实验三 琼脂免疫电泳实验
免疫电泳实验报告
免疫电泳实验报告摘要：本实验运用火箭电泳、微量电泳、双向免疫扩散等方法测定抗体的效价。
关键词：抗体效价测定；火箭电泳；微量电泳；双向免疫扩散1 前言免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法很多，主要有单向免疫扩散、双向扩散电泳、对流免疫电泳、微量免疫电泳、免疫火箭电泳、免疫固定电泳等几种方法。
其中比较常用方法有以下三种。
火箭免疫（rocket immunoelectrophoresis），该方法是在琼脂板内掺入适量的抗体，在电场的作用下定量的在含适量抗体的离子琼脂中泳动，当走在前面的抗原遭到琼脂板内的抗体时，形成抗原体复合物而沉淀出来，走在后面的抗原继续在电场的作用下向正极泳动，在向前泳动过程中，遇到了前面抗原所沉淀的抗原抗体复合物，由于抗原的增加造成抗原过量时复合物沉淀溶解，并一同向正极移动而进入新的琼脂板内与未结合的抗体结合，有形成新的抗原抗体复合物沉淀出来，这样不断地沉淀—溶解—再沉淀，直到全部抗原与抗体结合，当比例合适时，可在短时间内出现锥形沉淀线，此沉淀线形似火箭，故称火箭电泳，抗原含量越高所形成的火箭峰愈长，因此依据火箭峰的长度，与标准抗原比较精确地计算抗原的浓。
微量电泳，该方法的原理是不同蛋白质颗粒所带电荷不同，在同一电场中，因泳动速度不同而发生分离，用于抗原、抗体纯度测定，以及临床诊断。
双向免疫扩散（double immunodiffuison）,根据出现沉淀线时抗体的最高稀释度来计算抗体的效价，或者依据沉淀线的出现定性抗原，检测疾病。
2 材料与方法2．1 材料抗体，抗原，巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M），1.5%琼脂糖凝胶，7%醋酸，电泳仪，温箱，玻璃板，打孔器等。
2．2 方法2．2．1 火箭电泳法配制巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M）；制备1.5%琼脂糖凝胶，煮沸至完全溶解；取琼脂糖凝胶约15ml，置55 ºC水浴中降温，并加入抗体200μL，共同孵育；将二者混匀，铺火箭电泳板，放置冷凝倍比稀释抗原抗体；电泳板打孔(6孔)，加入已稀释的抗原(约10 μL/孔)；电泳3~4h，电流：30mA/块，电压：100~120V；待火箭电泳结束，用0.1%氨基黑染色10min，7%醋酸脱色至条带清晰。
琼脂糖凝胶电泳实验原理及步骤
实验三琼脂糖凝胶电泳一、实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA 片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，而构型不同的DNA分子。
在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。
相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
在凝胶中加入少量溴化乙锭(ethidium bromide, EB)，其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红色荧光，因此也可对分离的DNA 进行检测。
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA片段。
本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法。
二、仪器及试剂1.仪器及耗材：水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像分析系统、微波炉、微量移液器、透明胶带、点样板或parafilm、100 ml或250 ml锥形瓶、量筒、吸头等。
2.试剂及配制：50×TAE缓冲液的配制：2 mol/L Tris-乙酸，0.05 mol/L EDTA（pH8.0）配制1000 mlTris 242 g冰乙酸 57.1 ml0.5 mol/L EDTA 100 ml加入600 ml去离子水后搅拌溶解，将溶液定容至1 L后。
高温高压灭菌，室温保存。
1×TAE缓冲液的配制：称量20 ml的50×TAE缓冲液，再加入980 ml的去离子水。
溴化乙啶贮存液：10 mg/ml 溴化乙啶配制：100 ml称取1 g溴化乙啶，置于100 ml烧杯中，加入80 ml去离子水后搅拌溶解。
适用于药典0541第三法琼脂凝胶电泳法
适用于药典0541第三法琼脂凝胶电泳法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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聚合酶链式反应和琼脂糖凝胶电泳 实验报告
实验三聚合酶链式反应（PCR）以及琼脂糖凝胶电泳实验目的1.掌握PCR反应的原理及各反应成分的作用；2.熟悉PCR反应程序的设计规则；3.掌握引物的设计原则及其与PCR其他成分的配制方法；4.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及其应用范围；5.熟悉琼脂糖凝胶电泳相关缓冲液的配制方法。
实验原理一．聚合酶链式反应原理在已知待扩增模板全部或部分序列的情况下，依据DNA半保留复制的机理，在含有Mg2+的缓冲溶液中，采用耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在特异性引物（分为上游和下游引物）的引导下，通过dNTP为原料，以cDNA或DNA等为模板，在人为控制DNA合成系统（PCR仪）温度调节下，通过变性（95℃）、退火（50-60℃）及延伸（72℃）等3个步骤的循环进行（30-35循环），在体外进行双链DNA变性为单链，单链DNA与特异性引物退火形成局部双链，进而在DNA聚合酶的作用下使引物沿相应模板延伸为特异性引物所限定范围的大量双链DNA的体外合成反应。
本质为体外DNA合成的酶反应。
二．琼脂糖凝胶电泳反应原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
在一定电场强度下偏碱性的缓冲液中（TAE pH8.0或TBE pH7.5-7.8），DNA分子带负电，其迁移速度取决于分子筛效应，在电荷效应与分子筛效应作用下，具有不同的相对分子量及构型的DNA片段泳动速度不同。
DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。
凝胶电泳不仅可分离不同分子量的DNA，也可以分离分子量相同，但构型不同的DNA分子。
如质粒的三种构型的泳动速率不同：超螺旋闭合环状质粒最快，线型质粒其次，开环质粒最慢。
实验步骤（一）PCR 加样术式在一微量离心管中依次加入下列试剂：水煮裂解后的细菌液4µL10PCR buffer（含MgCl2） 2 µLdNTPs (10mM) 1µL5’引物(10µM) 1µL 20µL3’引物(10µM) 1µLTaq DNA pol. (2U/µL) 1 µL去离子水（补足反应体系）10µL轻弹管底混合（用离心机甩一下）（二）缓冲液组成10×PCR buffer:500 mM KCl100 mM Tris-Cl (pH 8.3)15 mM MgCl2有的会加入硫酸铵(ammonium sulfate)，化学式（NH4)2SO4 ，通过破坏蛋白质在稳定因素（亲水行），而使蛋白析出。
免疫电泳实验
免疫电泳实验免疫电泳是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，由Grabar与Williams于1953年创立。
此项技术由于既有抗原抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，是广泛应用于生物医学领域的一项免疫学基本技术。
【实验原理】将蛋白质抗原在琼脂糖凝胶上进行电泳，样品中不同的抗原成分因所带电荷、分子量及构型不同，电泳迁移率各异，而被分离成肉眼不可见的若干区带。
停止电泳后，在与电泳方向平行的琼脂槽内加入相应抗体进行双向免疫扩散。
分离成区带的各种抗原成分与相应抗体在琼脂中扩散后相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀线。
根据沉淀线的数量、位置和形状，即可对样品中所含成分的种类及其性质进行分析、鉴定。
【主要试剂与器材】1. 0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液。
2.12g/L琼脂凝胶用0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液配制，置4℃冰箱保存备用。
3.小鼠全血清。
4.兔抗鼠血清。
5.电泳仪、电泳槽、37℃温箱。
6.载玻片、吸管、打孔器、毛细滴管、挖槽刀、湿盒、水平台等【实验方法】1．取已溶化的1%离子琼脂倾注于玻片上制成琼脂板。
孔直径3ml2．冷却凝固后，按照模板于挖槽线上下两侧各打孔一个，并分别用微量加样器加入待检血清及1%的溴酚兰各15μl。
3．置电泳槽内，注意电泳标本近孔端连接负极“―”一侧。
并将已浸透缓冲液的滤纸一端覆盖于琼脂板两侧各约0.5mm，另一端浸于电泳液中。
4．接通电源。
电压、电流及时间应视仪器性能而定。
100v恒压电泳。
5．电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板。
按模板位置用解剖刀挖横槽，用热的1.2%的琼脂封底，加入抗血清抗体。
6．置湿盒中，于37℃温箱中扩散24小时，观察结果。
【结果】根据沉淀弧的位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图，识别主要Ig。
准备实验材料：1：小鼠全血清（取活鼠，麻醉后心脏去血。
37度放置整夜，第二天吸取上层血清。
分装，将暂时不用的放于-20度冻存，其余放置于4度）兔抗鼠血清-20度冰箱中取出，实验时可能PBS 稀释部分10倍巴比妥缓冲液（先将0.46g 巴比妥置于三角瓶中，加入50ml蒸馏水，加热溶解后加入巴比妥钠2.575g，最后加蒸馏水至250ml）琼脂凝胶：称取1.2g 琼脂粉至250ml三角瓶中，加巴比妥50ml，沸水浴中溶解后，再加上述巴比妥缓冲液50ml,(混匀后置于4度冰箱保存备用)。
免疫琼脂沉淀实验报告
免疫琼脂沉淀实验报告本实验旨在通过免疫琼脂糖凝胶电泳（immunoprecipitation assay）方法来检测和分离特定抗原在混合蛋白质溶液中的存在，进而分析其在免疫反应中的重要性和功能。
实验原理：免疫琼脂沉淀是一种通过特异性抗体与靶标抗原结合来实现蛋白质分离的方法。
在实验中，我们首先将样本中的混合蛋白质与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
然后，将这些复合物与琼脂糖糊混合并注射到凝胶电泳槽中进行电泳。
在电泳过程中，抗原-抗体复合物会随着电场的作用向阳极方向迁移，并在凝胶中被固定下来，形成凝胶沉淀带。
通过此方法，我们可以将特定抗原从混合蛋白质中分离出来，并进一步进行鉴定和分析。
实验步骤：1.准备样本：将待检测的混合蛋白质样本制备好，并将其加入含抗原特异性抗体的试管中，形成抗原-抗体复合物。
2.制备琼脂糖糊：制备好5%的琼脂糖糊，加入蛋白质凝胶电泳缓冲液，混合均匀。
3.注射样品：将混合蛋白质样品与琼脂糖糊混合，然后使用注射器将其注入凝胶电泳槽中。
4.进行电泳：设置适当的电场强度和电泳时间，开始电泳。
5.固定凝胶：电泳结束后，将凝胶固定在特定位置，一般使用甲醛等物质进行固定。
6.染色和分析：根据需要，可以使用不同的染色方法对凝胶进行染色，然后使用分析软件或显微镜等设备分析和测量抗原-抗体复合物的大小和相对含量。
实验结果：通过免疫琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地分离和检测到了特定抗原-抗体复合物。
在分析结果中，我们可以观察到在琼脂糖凝胶电泳槽中形成了抗原-抗体复合物的凝胶沉淀带，并且可以通过染色方法对其进行染色，进一步加深对目标蛋白质的分析。
实验讨论和结论：免疫琼脂糖凝胶沉淀实验是一种常用的分离和检测特定抗原的方法。
它通过特异性抗体与抗原的结合，能够实现对目标蛋白质的分离和检测。
该方法相对简单、快速，并且具有较高的特异性和敏感性。
然而，我们在实验过程中需要注意的是选择合适的抗体和琼脂糖凝胶，以确保实验的准确性和可靠性。
琼脂凝胶实验报告
实验名称：DNA琼脂糖凝胶电泳实验日期：2023年10月25日实验目的：1. 学习并掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作步骤。
2. 通过电泳分离不同分子量的DNA片段，观察并分析实验结果。
3. 了解DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移规律，并探讨影响迁移速度的因素。
实验原理：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离、鉴定和定量DNA片段。
DNA分子在电场中带有负电荷，在琼脂糖凝胶的筛分作用下，根据分子大小和构型不同，迁移速度不同，从而实现分离。
溴化乙锭（EB）作为一种荧光染料，可以嵌入DNA分子中，在紫外光照射下发出橙红色荧光，便于观察DNA片段的位置和大小。
实验材料与仪器：- 仪器：电泳仪、紫外检测仪、水平电泳槽、移液器、一次性手套等。
- 试剂：琼脂糖、EB溶液、Tris-硼酸-EDTA缓冲液、加样缓冲液等。
- 材料：分子量不同的DNA片段。
实验步骤：1. 琼脂糖凝胶的制备：- 称取1g琼脂糖，加入10ml电泳缓冲液，再加入90ml蒸馏水，在电炉上加热溶解，配制成1%琼脂糖凝胶。
- 待凝胶冷却至60-70℃时，加入数滴EB溶液，混匀。
2. DNA样品的制备：- 将DNA片段用Tris-硼酸-EDTA缓冲液稀释至适当浓度。
3. 加样：- 将制备好的琼脂糖凝胶倒入电泳槽中，插入电泳梳子。
- 使用移液器将DNA样品加至凝胶孔中。
4. 电泳：- 将电泳槽放入电泳仪中，设定合适的电压和时间进行电泳。
5. 观察与分析：- 电泳完成后，取出凝胶，用紫外检测仪观察DNA片段的迁移情况。
- 比较不同分子量DNA片段的迁移速度，分析实验结果。
实验结果：- 通过电泳观察到，不同分子量的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移速度不同，分子量越小，迁移速度越快。
- EB染料嵌入DNA分子后，在紫外光照射下呈现橙红色荧光，便于观察DNA片段的位置和大小。
讨论：1. 影响DNA分子迁移速度的因素主要有：分子大小、构型、电场强度、凝胶浓度等。
实验三 琼脂免疫电泳实验
注意事项
（1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂 面要尽量铺平。 （2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外。 （3）电泳过程中注意防止发热，以免影响 电泳结果。 （4）电泳时要使滤纸与凝胶密切接触， 不可有缝隙。
思考题
（1）画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以 简要说明。 （2）与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫 电泳的主要优点。
2mm
2mm
图2 胶板打孔及挖槽示意图
（4）用微量加样器加入10－－20uL的粗提蛋白 和牛血清 ，不要溢出（可加入指示剂） 。 （5）把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液， 琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压 10-12v/cm电泳1-2h。 （6）样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终 止电泳，小心取出载玻片。 （7）用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要 深及底部，两道平行线间隔不可大于3 mm。用大 头针挑去琼脂。 （8）加入人全血清，放入湿盒中，37 ℃下扩散 24h。
实验三 琼脂免ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ电泳实验
实验目的
• 了解免疫电泳的原理和用途。 • 掌握免疫电泳的操作过程和方法。 • 掌握免疫电泳实验结果的分析方法，并 对粗提的蛋白进行检测。
实验原理
免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。
先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋 白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的 方向上开槽，加入抗血清。 37℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置 与抗体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解 见图。
• PH8.6巴比妥缓冲液配制： • 巴比妥酸 0.92g -----100ml， • 加热熔解 • 巴比妥钠 5.15g-------350ml， • 摇动熔解 • 混合，补足至500ml
对流免疫电泳(免疫学实验)
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Tuesday, March 22, 202222-
Mar-2222.3.22
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2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。14:0 7:5214: 07:5214 :073/2 2/2022 2:07:52 PM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 22.3.22 14:07:5 214:07 Mar-22 22-Mar-22
3．加样 一对孔中，一孔加抗原，另一孔加抗体。 4．电泳 将抗原孔置于负极端。电流强度3mA/cm～ 6mA/cm，电泳时间30min～90min。
四、结果观察
断电后，将玻板置于灯光下，衬以黑色背景 观察。阳性者则在抗原抗体孔之间形成一条 清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰， 可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电泳 槽过夜再观察。
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谢 谢 大 家 022 2:07 PM3/22/2022 2:07 PM22.3.2222.3.22
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。22-Mar-2222 March 202222.3.22
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7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 22年3 月下午2 时7分2 2.3.221 4:07M arch 22, 2022
单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳—单向双向免疫琼脂扩散
注意事项
加样时，吸取每份标本均应更换塑料吸头； 实际检测过程中，标准曲线必须与样品测定同时制备； 孵育时间应控制在24~48h，时间太短可能产生不了沉淀线，时间太长会造成沉
淀线的扩散。
双向免疫琼脂扩散
实验原理
可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异 性沉淀线。
实验结果
用尺子测量并记录沉淀环直径，然后以沉淀环直径为纵座标，以标准参考蛋白量 （单位/ml）为横座标，绘制成标准曲线。
实验结果
注意事项
制备抗体琼脂板时，琼脂温度必须严格控制，温度太低琼脂会凝固，太高则会影 响抗体的活性；
加样孔内的琼脂应挑干净，切不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致； 加样量一定要精确，并且不能逸出孔外，否则结果不好观察；
实验方法
加样：于中央孔加入牛IgG，周围1-5孔加入倍比稀释不同浓度的标准兔抗牛IgG 血清抗体，6孔加入生理盐水作对照。每孔各加10μl。
将琼脂板平放于湿盒内，置37℃温箱中，分别于24小时观察结果。
实验结果
观察孔间沉淀线的数目及特征。本试验1至5孔与中央孔之间是否可出现清晰的乳 白色沉淀线。
实验原理
沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例，而且与其分子 大小及扩散速度相关。
当抗原抗体存在多个系统时，可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。 依据沉淀线的形态、清晰度及位置可以了解抗原或者抗体的性质。
双向琼脂扩散试验的应用
检测未知抗原或抗体 抗原性质分析 抗体效价滴定 抗原或抗体纯度鉴定
周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。 以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。 可进行任意稀释。
抗原抗体纯度鉴定
“1” 为单一抗原抗体系统。 “n” 为多个抗原抗体系统。 *可以用混合抗原鉴定抗体纯度。 *可以用混合抗体鉴定抗原纯度。
实验-免疫电泳
以0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液为电泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上， 样品孔靠近阴极端，用缓冲液浸湿的双层滤纸搭桥电泳。一般稳定端电压100V， 电泳1h，即可终止电泳。
实验方法
实验报告
双扩散
取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的琼脂，取50μl兔抗牛IgG血清抗体充满槽 内，注意勿外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于37℃培养箱中进行双扩散， 24h后观察结果。
实验
免疫电泳
实验原理
免疫电泳是将双向免疫扩散实验与琼脂板区带电泳相结合的一种免疫学分析方法。 抗原样品在琼脂凝胶上进行电泳，不同抗原成分因电泳迁移率不同而被分离为若
干区带。 停止电泳，在琼脂凝胶横槽中加入抗体血清，抗体与不同抗原成分同时双向扩散，
相遇，并在比例适宜处形成沉淀弧线。 根据沉淀线的位置、数量和形状，分析抗原样品中的成分。
实验方法
实验结果
观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。
实验报告
根据观察结果绘制沉淀弧的位置和条数。
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实验原理
实验原理
实验方法
制板
将洁净玻片置于水平台面上，用移液管吸取4-4.5ml熔化的1.5％盐水琼脂加于载 玻片上，待冷凝。
2-5mm
）
实验方法
实验方法
加样
用微量进样器吸取10μl稀释的牛IgG，兔抗牛IgG（待检测血清）于上、下两小孔 中。
免疫学实验课件：实验三(2)琼脂免疫扩散实验
➢打孔：待琼脂板凝固后，用打孔器打孔，一般孔
径3-5mm，孔间距4-7mm（孔径和孔间距依不同 疫病检疫规程而定），根据需要，可打成梅花孔 （如下图所示，中央1孔，周围6孔），挑出孔内 琼脂。
➢ 封底:将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻灼烧，用手
背感觉微烫即可。
➢ 加样:
1）抗体效价测定：用移液器加样于中央孔加入已知抗原， 于周围孔加倍比稀释的血清，每个稀释度加一孔。加样时 勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。
琼脂免疫扩散实验
实验目的与要求
➢以牛血清白蛋白双向扩散试验为例，掌 握双向双扩散试验的原理、操作方法及 结果的判定。
实验原理：
➢ 双向双扩散试验是一种定型试验，可溶性抗原 与相应的抗体在琼脂凝胶中各自向四周扩散， 若抗原与抗体相对应，则在二者比例适当处形 成白色沉淀线;若抗原与抗体无关，则不会出 现沉淀线。
▪ 试剂与器材
➢1.2%的琼脂糖（用生理盐水配制） ➢已知抗原、待检血清、阳性血清、阴性
血清 ➢平皿或（载玻片）、酒精灯、湿盒、打
孔器、37℃恒温箱、移液器等。
操作方法
➢制板：趁热将已溶化琼脂糖倒入洁净的平板内或
（用注射器吸取3.5ml加热溶化的1.2%琼脂糖浇 注于一洁净的载玻片上，）厚度2.5-3.0mm，注 意勿产生气泡。
2、抗体效价测定:以出现沉淀带的血清最高稀释倍数 为该血清的琼扩效价。
▪ 3、抗原特异性与沉淀线形状的关系:
1,根据抗原的成份可有以下三种现象:(1)若二孔中的抗原 相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形;(2)若二孔中 抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则 形成的沉淀线相交叉;(3)若两孔中抗原部分相同，抗血清 中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。
单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳(Single Immunodiffusion and
单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳（Single Immunodiffusion and可溶性抗原与相应抗体以合适的比例发生特异反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。
沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、脂类等。
根据抗原与抗体的不同条件及其它因素，沉淀反应可以分为以下三种主要形式。
即：环状沉淀反应(ring precipitation reaction)，凝胶中沉淀反应(precipitation reaction in gel)，如单向扩散、双向扩散、对流电泳、免疫电泳以及微生物学实验中的絮状沉淀反应(floccu lation precipitation reaction)，如梅毒血清检验中的康氏（Kahn）及克莱氏（Kline）试验以及检测白喉杆菌毒力的体外试验-Elek 氏试验，检测毒素或类毒素的絮状沉淀单位测定等。
本实验主要介绍凝胶中的沉淀反应。
（一）单向免疫扩散(Single immunodiffusion)—人群血清IgG 正常值测定一、基本原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。
同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml 或U/ml)。
应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中IgG、IgA 及IgM 的水平。
二、实验材料2%离子琼脂或生理盐水琼脂（内含2%NaN3）。
标准马抗人IgG 血清（抗体）（北京生物制品研究所生产）工作标准参考蛋白（北京生物制品研究所生产）pH7.2 PBS.打孔器（孔径3mm）及打孔模板微量加样器湿盒（容器内加湿纱布或泡沫塑料）已制备好的含有1%马抗人IgG 抗体的琼脂板1/50 稀释的单人份待检血清标本三、实验方法（一）标准曲线的制备：1．按照玻片的大小，准备制做琼脂板所需要的1%离子琼脂。
免疫电泳(immunoelectrophoresis )实验
免疫电泳（immunoelectrophoresis ）实验免疫电泳（immunoelectrophoresis ）是将电泳和琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定型方法，具有灵敏快速的优点。
该实验可分为如下两个步骤：1.电泳将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。
由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度具有一定的规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。
2.琼脂扩散电泳后在琼脂槽中加入相应抗血清，然后置湿盒内进行双扩散。
当抗原与抗体相遇且比例适合时，可形成不溶性复合物，出现特异性沉淀线，根据沉淀线的数量和位置，可鉴定分析各种抗原成分及其性质。
【材料】1.抗原：正常人血清；抗体：兔抗人血清。
2.1% 离子琼脂（用离子强度 0.05 、pH8.6 的巴比妥缓冲液配制）。
3.载玻片、直径 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料条、微量加样器、电泳仪、吸管等。
【方法】1.制琼脂板载玻片放于水平台面上，将塑料条放置于玻片中央，吸取4ml 热熔的 1% 离子琼脂于其上，待凝固后，取出塑料条，即制成琼脂槽。
再按图 6-2 打孔。
2.加样用微量加样器往孔中加正常人血清。
3.电泳电压 4V/cm ，电泳 1.5 小时。
4.琼脂扩散在琼脂槽内加入兔抗人血清，使其充满槽内，置湿盒内 3 7 ℃ 扩散 24 小时，观察结果。
【结果观察】在琼脂槽的两边出现相对称的弧形沉淀线。
【注意事项】1.电泳扩散后可直接在黑色背景下，用斜射光观察。
2.电泳时，搭桥应完全紧密接触，以免因电流不均而发生沉淀线弯曲。
3琼脂糖电泳实验
3
DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场 作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与 分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同， 电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值 成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子 质量的DNA ，也可以分离相对分子质量相同， 但构型不同的DNA 分子。 溴化乙锭 EB 可与 DNA 分子形成 EB-DNA 复合物， 其荧光强度与DNA的含量成正比。
问题 原因
1) DNA降解 避免核酸酶污染 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱， 从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液 电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度 应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 减少凝胶中DNA上样量
解决办法
琼脂糖凝胶电泳
1
一、实验目的：
1、掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理。 2、了解琼脂糖凝胶电泳的操作步骤和影响因素。
2
二、实验原理：
琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元 是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依 氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖 束，构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此 该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、 鉴定及纯化。
2) 电泳缓冲液陈旧
3) 所用电泳条件不合适
DNA带模糊
4) DNA上样量过多
5) DNA样含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
6) 有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
7) DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
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琼脂糖凝胶电泳实验报告
实验一：琼脂糖凝胶电泳对DNA提取实验目的：学习使用水平式琼脂糖凝胶电泳进行DNA的提取。
实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下显色。
1）在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。
由于糖——磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
2）在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。
具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
3）生物染料在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，生物染料从正极向负极移动，就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。
在生物染料足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
实验材料：微量移液器(2μl和4μl)，高压灭菌锅，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置，微波炉等。
TAE电泳缓冲液，琼脂糖凝胶，PCR 扩增样品实验步骤：1胶液的制备：称取琼脂糖,置于200ml锥形瓶中, 加入20ml TAE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，沸腾。
取出摇匀。
加热时应盖上封口膜, 以减少水份蒸发。
2胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用透明胶带(宽约1cm)紧密封住。
将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子。
3向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中小心地倒入胶槽内, 使胶液形成均匀的胶层。
检查有无气泡。
v1.0 可编辑可修改4室温下约20分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和挡板，注意不要损伤梳底部的凝胶，清除碎胶。
将凝胶放入电泳槽中。
5加入电泳缓冲液（TAE）至电泳槽中，使液面高于胶面约1mm。
实验：琼脂糖明胶电泳
OCDNA LDNA CC DNA
电 泳 方 向
含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围
凝胶中的琼脂糖含量 [%（W/V）] 0.3 0.6 0.7 DNA/RNA分子的分离 范围（ kb ） 5—60 1—20 0.8—10
0.9 1.2
1.5
0.5—7 0.4—6
0.2—3
2
0.1—2
一、实验原理
一、实验原理
电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的
最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电 解质的多孔支持介质并把它置于静电场中， DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA 分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根 残基。
一、实验原理
2.分类
DNA的凝胶电泳常使用两种支持介质：琼脂糖凝胶 和聚丙烯酰胺凝胶 分类 琼脂糖凝胶电泳 凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 分离长度 200bp—近 50kb 5—500bp 分辨率高
电泳样品 DNA相对分子质量标准物 电泳缓冲液 沉降DNA并起指示作用 电泳支持介质 嵌入DNA中，在紫外灯下 显色
二、仪器、材料与试剂
1.琼脂糖凝胶电泳系统
二、仪器、材料与试剂
2.紫外投射仪
二、仪器、材料与试剂
3. DNA的染料 EB：即溴化乙锭，它能够插入DNA分子中的碱基对 之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光 的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光 ，易于检测。可以检测10ng 的DNA 注意：EB是一种诱变剂，操作时一定要注意安全， 必须戴塑料或乳胶手套
10×：108g Tris碱 15.5mL 85%磷酸 40mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0) 5×：54g Tris碱 27.5g硼酸 20mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0)
沉淀反应实验
沉淀反应实验：免疫电泳(immune electrophoresis)实验来源：易生物实验浏览次数：49 网友评论0 条免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。
使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。
每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。
关键词：电泳免疫沉淀反应实验免疫电泳immuneelectrophoresis琼脂凝胶免疫电泳实验免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。
使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。
每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。
1、材料（1）待检标本（抗原）：正常人血清；（2）抗体：正常人血清的家兔免疫血清；（3）1.5%离子琼脂（系用巴比妥缓冲液配制的）；（4）电泳仪；（5）pH8.6、离子强度0.05M巴比妥缓冲液配方：巴比妥1.84克，巴比妥钠10.3克，加蒸馏水1000毫升，调pH至8.6；（6）其它：载物玻片，直径3毫米打孔器，20mmⅹ2mm玻璃铸型，微量进样器。
2、方法（1）取载物玻片（7.5ⅹ2.5厘米）加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶，制成2毫米厚的琼脂板；（2）按图位置，在琼脂板未凝固时，放入抗血清槽铸型，注意勿使铸型全部浸入琼脂中，待凝固时再打孔；（3）加待检标本：用微量进样器往孔中加1—5微升；（4）电泳：电压9—7伏/厘米，泳动15—20小时；（5）电泳后取出抗血清槽铸型，加入抗血清，进行双扩散，一般在24小时内沉淀弧出全；（6）观察结果：或描绘、拍照或进行染色，染色后的标本便于结果分析及保存。