沙门氏菌检验详细流程

初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
特异性 灵敏度
89％ 100%
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(铜绿假单胞菌也呈紫红色，可 以通过前增菌排除。所以推荐 在检测中的前增菌用TTB。 粉红色、深红色、干燥菌落、 边缘锯齿状等 均非沙门氏菌菌 落。）
生化试验
• 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型 或可疑菌落，分别接种三糖铁（TSI）琼脂、 赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板； 取菌落一部分于斜面划线后穿刺底层。
• 接种针在接种TSI后不要灭菌，直接接种赖 氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板， 于36 ℃培养18 ～24 h，必要时可延长至 48 h。
穿刺TSI方法
• 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养 基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛 基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从 营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长 至48 h。
• 将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室 温至少保留24 h，以备必要时复查。
无菌均质袋
选择性增菌与分离
• 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种 于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。 同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。
• 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼 脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色 培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生 长的菌落。
– 其他沙门氏菌均不给专用名，只在亚种数字名后直接 书写抗原式，比如S.Ⅴ 66:z35:-
– 新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
沙门氏菌检验程序
检样
25g（mL）样品+225 mLBPW
36 ℃±1 ℃，8 h～18h
1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h
1 mL+SC10 mL 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
BS
XLD（或HE、科玛嘉显色培养基）
36 ℃±1 ℃，40 h～48 h
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN
商品化生化鉴 H2S+靛基质- 尿素- H2S+ 靛 基 质 + 尿 H2S-靛基质-尿素 反 应 结 果 与 左
国产BS
进口BS
菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色或
棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落, 周围培养基不变。
国产HE
进口HE
蓝绿色或蓝色, 多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色, 中心黑色或几乎全黑色。
进口XLD
国产XLD
菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心， 或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心
定系统
KCN- 赖氨酸+
素- KCN-赖氨酸+ -KCN- 赖氨酸+/- 侧描述不符
甘露醇+、山梨醇+
ONPG-
沙门氏菌，血清学试验 报告
非沙门氏菌
前增菌
• 目的：修复损伤的细菌细胞； • 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均
质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质 袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样 品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。
为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用 两种以上选择性分离培养基。
进口-SS 进口-SS 国产-SS 进口-HE 国产-HE 进口-XLD 国产-XLD 进口-BS 国产-BS CHRO显色 国产-DHL 国产-WS TSA（对照）
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
被分成2500多个血清型。
Vi抗原 O抗原 H抗原
沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
– 肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工作中，可简写为S. Typhimurium。
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门菌概况
• 沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
• 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它 是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴 性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌 有2500多个血清型和变种。我国发现的有250 多个血清型。
邦戈尔沙门菌（Samonella bongori） Ⅴ
沙门菌种和亚种的鉴别
项目
肠道沙门菌
ⅠⅡⅢⅣ
卫矛醇
＋
＋
－
－
山梨醇
＋
＋
＋
＋
水杨苷
－
－
－
＋
ONPG
－
－
＋
－
丙二酸盐
－
＋
＋
－
KCN
－
－wenku.baidu.com
－
＋
注：+为阳性 - 为阴性
邦戈尔沙门 菌
Ⅵ
Ⅴ
－
＋
－
＋
－
－
－
＋
－
－
－
＋
沙门氏菌的血清分型
• 迄今为止沙门氏菌有
– 57个O抗原 – 116个H抗原 – Vi抗原
沙门菌的分类
根据生化反应不同，分为2个种： 肠道沙门菌（Samonella enterica） ：
Ⅰ 肠道亚种（subsp. enterica ）
Ⅱ 萨拉姆亚种 （subsp. salamae ） Ⅲ 亚利桑那亚种（subsp. arizonae ） Ⅳ 豪顿亚种（subsp. houtenae ） Ⅵ 因迪卡亚种 （subsp. indica ）