GAD65

分析项目文件编号：版本：2011-6 第 14页共 94 页
三、谷氨酸脱羧酶抗体（GAD65）测定标准操作规程
1 检验申请
单独检验项目申请：谷氨酸脱羧酶抗体（GAD65）；组合项目申请：临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理
2.1标本采集
2.1.1 血清：采集5.0ml静脉血至玻璃试管中，室温静置。

离心、分离血清部分，2℃-8℃
贮存。

2.1.2血标本试管标上统一且唯一的条码。

2.1.3急诊标本采集后，在试管条码上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于1ml的全血标本，或少于0.5ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与条码单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存
2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血浆, 避免溶血。

离心必须达到4000rpm ×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。

2.2.2血清标本在2℃-8℃稳定6小时。

超过6小时，则先分装，-20℃可保存30天，避
免反复冰冻和解冻2次以上。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项
2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

3 方法原理
本试剂盒利用化学发光免疫夹心法检测GAD65浓度；
采用GAD65纯抗原标记磁性微球，SPA抗原标记ABEI。

标本、校准品、与缓冲液、GAD65纯
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抗原标记磁性微球溶液混匀，外加磁场沉淀，去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物3次，再加入ABEI标记的SPA抗原混匀，形成GAD65纯抗原标记磁性微球、待测GAD65和SPA抗原标记ABEI的免疫复合物，外加磁场沉淀，去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物3次，直接进入标本测量室，仪器自动泵入发光底物1和2，自动监测3秒钟内发出的相对光强度（RLU）。

GAD65浓度与RLU成一定的比例关系，测定仪自动拟合计算GAD65浓度。

4 试剂及其他用品
试剂：谷氨酸脱羧酶抗体（GAD65）测定试剂盒，由深圳市SNIBE出品。

4.1主要组成成份
4.2 注意事项：
4.2.1.. 不同批号试剂盒中各组份不能互换。

4.2.2. 除了浓缩洗液，其它试剂均为随时可用的工作试剂。

4.2.3 该试剂盒中的校准品购自北京博奥森生物技术有限公司, 生物来源：白兔血清中纯
化，PROTEIN A 纯化，纯度≥90%。

经检测不含HBsAg, anti-HCV, anti-HIV。

4.3. 当发生以下情况时，应视为试剂变质。

4.3.1 磁性微球溶液中磁性颗粒凝集。

4.3.2 校准品、发光标记物、缓冲液、标本稀释液呈明显浑浊状，发现沉淀。

4.4其他试剂与用品
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4.4.1 蒸馏水或去离子水
4.4.2 反应杯
4.4.3 浓缩洗液
4.4.4 发光底物1和发光底物2
4.5试剂的准备和贮存
4.5.1 工作洗液：用蒸馏水或去离子水，将浓缩洗液按1：14稀释混匀，放置室温待用，
保存至有效期。

4.5.2 试剂：本试剂盒除洗液外,其它成份置于2-8℃保存至有效期。

4.5.3 发光标记物均应避免阳光直射；湿度对试剂稳定性无影响。

4.5.4 试剂运输要求：置于2-8℃环境条件下运输，运输过程避免碰撞。

4.5.6 有效期：2-8℃储存条件下，未开封有效期为12个月，开封后有效期不少于28天。

5 质控品与室内质控规则
5.1质控品采用Bio-Rad质控品。

5.2质控品测定：在每天检测时测定质控血清一次。

5.3质控规则：判断是否有假阴性或假阳性。

6 适用仪器
该测试必须在迈格鲁米（MAGLUMI）化学发光测定仪上进行。

迈格鲁米（MAGLUMI）产自深圳市新产业生物医学工程有限公司，于2008年注册，有效期四年，注册号：粤食药监械（准）字2008第2400249号。

7 标本检测步骤
检测的阶段步骤：装载试剂→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。

8 主要分析参数
无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数自动进行分析。

标本用量20µL。

9 结果计算
测定仪借助于由主曲线经两点定标而得到的一条工作曲线，自动地计算每一个标本的GAD65浓度，结果以IU/ml表示。

正常参考值：0.51-30IU/ml
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10 检验结果的报告
10.1结果的报告
10.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

10.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

10.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11 产品性能指标
11.1 准确率:将高校准品用稀释液按1：2比例稀释，取稀释后校准品测定10次，根据实测浓度和期望浓度，计算回收率，应在90%-110%范围内。

11.2 批内精密度:批内精密度是对一份高点校准品重复测试10次，计算其变异系数,批内变异系数( CV) 应≤ 10%。

11.3 批间精密度:批间精密度是指对三批测定试剂盒，分别用一份高点校准品重复测试10次，计算三批测定试剂盒之间的高点校准品测量值的变异系数, 批间变异系数( CV) 应≤15%。

11.4 分析灵敏度:灵敏度的定义为：对20次零校准品的测定，求其2倍的平均偏差,其从标准曲线上所对应的浓度即是灵敏度.本试剂的灵敏度为小于2.5IU/ml.
11.5 特异性:试剂盒对GAD67标准浓度的检测结果应符合以下的要求：
当GAD 67=280 IU/ml时，检测结果 GAD65<1IU/ml。

11.6 线性:用GAD65校准品配制六点标准曲线，标准曲线除A点外，测量各点的相对光强度值（RLU）采用四参数线性拟合标准曲线，其线性相关系数（r）绝对值大于0.9800。

11.7生物安全性检测:试剂盒中校准品，经检测HIV抗体、HCV抗体、HBsAg为阴性。

12 检验结果的解释
胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）,I 型，是由胰腺β-细胞自身免疫损伤引起。

此选择性自身免疫造成胰岛素分泌的完全消除。

其免疫学证据为在IDDM病人血清中出现特异性的胰岛细胞自身抗体。

现已发现I型糖尿病人至少有三种抗胰岛细胞抗原成份的处身抗体，分别特异性对应于胰岛细胞抗原组分，谷氨酸脱羧酶和胰岛素。

谷氨酸脱羧酸（GAD）是一种能够合成神经递质抑制因子γ-氨基丁酸（GABA）的酶。

同一基
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因能产生两种GAD：65kD和67kD, 高度同源性。

这两种GAD发现于人脑和胰岛细胞，在人，大鼠，小鼠胰岛腺中被不同表达。

因糖尿病为涉及-细胞损伤的慢性自身免疫疾病，故在前临床（无症状）期尽早准确地判定有无此病有助于干扰胰岛细胞损伤尽可能多的细胞群。

对高危人群作这三种自身抗体（ICA，IAA和GAD）的筛查，有助于防止或减慢该疾病的发生。

自身抗体为阳性者，通常在以后的5~7年内，易于发展为IDDM。

胰岛素依赖性糖尿病（I型糖尿病IDDM）是一种自身疫疾病。

GAD（glutamate decarboxylase 谷氨酸脱羧酶）抗体出现表示该免疫过程已经开始，对大多数病人而言，可导致IDDM。

有资料表明GAD抗体阳性者其I 型糖尿病的发病率在5年内高达68%。

I型糖尿病开始后，血清中特异性GAD抗体浓度通常会降低，并且甚至能降回到正常血清水平。

13 结果审核以及分析与相关项目的联系
13.1由资深专业人员负责检验结果的审核。

13.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。

13.3相关项目：审核与指标的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。

14 有关引用程序与文件
14.1 MAGLUMI免疫分析仪仪器标准操作规程。

14.2免疫检验室内质控标准操作程序。

14.3 检验结果审核程序。

14.4标本送检和接收程序。

15 参考文献
15.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州：浙江大学出版社, 2004. 15.2深圳市新产业生物医学工程有限公司谷氨酸脱羧酶抗体（GAD65）测定试剂说明书。