【CN109957514A】一种粗壮脉纹孢菌的新用途【专利】

权利要求书1页 说明书6页 附图6页
CN 109957514 A
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权 利 要 求 书
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1 .一 种 粗 壮 脉 纹 孢 菌 的 新 用 途 ，其 特 征 在 于 ，所 述 粗 壮 脉 纹 孢 菌 的 保 藏 号 为 CGMCC3088，用于产蛋白水解酶。
2 .一种利用粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产蛋白水解酶的方法，其特征在于，步骤如下： (1)将粗壮脉纹孢菌(CGMCC3088)菌株接种至活化培养基中培养活化；再将菌株接入马 铃薯葡萄糖琼脂(PDA)斜面培养基中培养，使菌株全部孢子化； (2)向PDA斜面培养基中加入吐温-80、无菌水，涡旋至菌液均匀，过滤，再加一定量灭菌 水使孢子浓度为1～2×106个/mL，制得孢子悬液； (3)在豆渣中加入灭菌水，搅拌均匀，121℃灭菌20min，接种孢子悬液，用低浓度的盐酸 和氢氧化钠调节豆渣初始pH至5 .0，置于发酵罐中30℃培养72h，10000rpm离心5min即可获 得含蛋白水解酶的粗酶液。 3 .根据权利要求2所述一种利用粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产蛋白水解酶的方法，其 特征在于，所述步骤(3)中豆渣与灭菌水的质量比为10∶21。 4 .根据权利要求2所述一种利用粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产蛋白水解酶的方法，其 特征在于，所述步骤(3)中豆渣与接种量的比例(g/mL)为5∶1。 5 .根据权利要求2所述一种利用粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产蛋白水解酶的方法，其 特征在于，所述步骤(1)中活化培养基的培养条件为30℃、70％湿度、培养72h，马铃薯葡萄 糖琼脂斜面培养基的培养条件为30℃、70％湿度、培养72h。
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910077415 .1
(22)申请日 2019 .01 .25
(71)申请人 南昌大学 地址 330000 江西省南昌市红谷滩新区学 府大道999号
(72)发明人 郑溜丰 邓泽元 于新颖
(74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 11246
发明内容 [0005] 本发明的目的是为提高粗壮脉纹孢菌在发酵食品和农副产品的综合开发的利用 价值，提供了一种粗壮脉纹孢菌的新用途。 [0006] 为了实现上述目的，本发明的技术方案为： [0007] 粗壮脉纹孢菌的保藏号为CGMCC3088，用于产蛋白水解酶。 [0008] 本发明还提供了一种利用粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产蛋白水解wenku.baidu.com的方法，步骤 如下： [0009] (1)将粗壮脉纹孢菌(CGMCC3088)菌株接种至活化培养基中培养活化；再将菌株接 入马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)斜面培养基中培养，使菌株全部孢子化； [0010] (2)向PDA斜面培养基中加入吐温-80、无菌水，涡旋至菌液均匀，过滤，再加一定量 灭菌水使孢子浓度为1～2×106个/mL，使固态发酵过程中菌体繁殖力和次级代谢产物的产 量达到最大，制得孢子悬液。 [0011] (3)在豆渣中加入灭菌水，搅拌均匀，121℃灭菌20min，接种孢子悬液，用低浓度的 盐酸和氢氧化钠调节豆渣初始pH至5 .0，置于发酵罐中30℃培养72h，10000rpm离心5min即
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说 明 书
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可获得含蛋白水解酶的粗酶液。 [0012] 进一步地，所述步骤(3)中豆渣与灭菌水的质量比为10∶21。 [0013] 进一步地，所述步骤(3)中豆渣与接种量的比例(g/mL)为5∶1。 [0014] 进一步地，所述步骤(1)中活化培养基的培养条件为30℃、70％湿度、培养72h，马 铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基的培养条件为30℃、70％湿度、培养72h，使菌株全部孢子化，最 大限度地提高发酵活力。 [0015] 与现有技术相比，本发明的有益效果： [0016] 以生产豆奶或豆腐过程中的副产品-豆渣为培养基原料，接种粗壮脉纹孢菌进行 固 态发酵 ，实现了其在发酵罐中高效 产蛋白 水解酶。本发明提供了最优化固 态发酵工艺条 件，豆渣与灭菌水的质量比为10∶21，豆渣与接种量的比例(g/mL)为5∶1、初始pH5 .0、培养温 度30℃、培养时间72h，此时蛋白酶活力可达1960U/g，与未优化前相比分别提高了232％。本 发明在粗壮脉纹孢菌产纤维素酶和合成类胡萝卜 素的基础上，为其所产高活力蛋白酶工业 化应用于食品加工和农副产品的综合开发提供科学依据。
纹 孢菌的 新 用途 ，用于产蛋白 水解酶 。还涉及利 用粗壮脉纹孢菌发酵豆渣产蛋白水解酶的方法， 其主要包括下列步骤为：( 1 )粗壮脉纹孢菌菌株 的活化、孢子化 ；( 2 )加入吐温-80、无菌水制备孢 子悬液；( 3 )固态发酵豆渣获得含蛋白水解酶的 粗酶液。本发明涉及的粗壮脉纹孢菌是从我国传 统发酵食品中提取并纯化得到的 ，安全无毒。因 此，依据本发明获得的蛋白水解酶在食品和农产 品加工中具有明显的优势。
代理人 胡群
(51)Int .Cl . C12N 1/14(2006 .01) C12N 9/50(2006 .01) C12R 1/645(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109957514 A (43)申请公布日 2019.07.02
( 54 )发明 名称 一种粗壮脉纹孢菌的新用途
( 57 )摘要 本发明发酵工程领域，具体涉及一种粗壮脉
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一种粗壮脉纹孢菌的新用途
技术领域 [0001] 本发明发酵工程领域，具体涉及一种粗壮脉纹孢菌的新用途。
背景技术 [0002] 蛋白酶被广泛应用于食品加工、饲料、加酶洗涤剂和医药等行业。近年来，利用微 生物发酵生产蛋白酶的研究已成为国内外上述领域的研究热点之一。国外的研究报道主要 集中于探索具有特殊性质的碱性蛋白酶并对产蛋白酶菌株进行基因重组使其产高活性蛋 白酶。国内报道在利用基因工程技术提高碱性蛋白酶产量和活性上也取得了一定的进展。 同时也开始致力于从我国传统的发酵豆制品(比如豆瓣酱、豆豉)中筛选、分离、纯化和鉴定 出一些新的高产蛋白酶菌株 ，并通过单因素和响应面实验确定了底物类型和比 例、接种量、 培养温度、培养时间等最佳发酵工艺条件。 [0003] 目前在菌株应用方面，固态发酵因高效和低能耗等优点已成为改良菜籽粕等优质 植物蛋白源农副产品的营养价值和品质的研究重点之一。国内外研究团队在采用固态发酵 豆粕、棉籽粕、菜籽粕等方面取得了良好效果，主要体现在可以降解蛋白质等大分子物质为 游离氨基酸、肽类等易于被肠道吸收的小分子物质，以及有效减少或去除单宁等抗营养因 子。 [0004] 粗壮脉纹孢菌是本实验室从江西传统发酵食品中提取并纯化得到的菌株，具有产 高活性纤维素酶和类胡萝卜 素的优点。并且粗壮脉纹孢菌是从天然食品中分离得到，安全 无毒，这在食品和农产品加工中具有明显的优势。而国内外对其所产蛋白酶研究甚少。因而 本发明对粗壮脉纹孢菌蛋白酶进行研究 ，以期在其产纤维素酶和合成类胡萝卜 素的基础 上，为工业化应用于发酵食品和农副产品的综合开发提供科学依据。