鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定

鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定

摘要:以乙醇为溶剂,采用索氏回流法提取鱼腥草全草中的黄酮｡优化了索氏回流法的提取温度､乙醇体积分数､提取时间､固液比等提取条件;索氏回流法的最佳提取条件为提取温度100℃､乙醇体积分数80%､提取时间 4 h､固液比1∶30(m/V,g∶mL,下同),在此条件下,黄酮提取率为12.59%｡采用硝酸铝比色法测定鱼腥草全草中的黄酮含量,结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 4);相对标准差RSD为0.21%,加样平均回收率为99.10%,表明该方法重复性良好,结果稳定可靠｡

关键词:鱼腥草全草;黄酮;索氏提取法;紫外分光

Content Determination of Flavonoid in Whole Plants of Houttuynia cordata Abstract:Taking the whole plant of Houttuynia cordata Thunb. as the raw material, ethanol as solvent extraction, Soxhlet extraction method was used to extract flavonoid. The elements such as extraction temperature, ethanol concentration, extraction time, solid-liquid ratio which affected the yield of flavonoid from whole plants of H. cordata were investigated by orthogonal experiment. Content of flavonoid was determined by Al(NO3)3 colorimetry.The results showed that absorption had good linear relationship with rutin concentration at the range of 48.75~377.31μg/mL(R2=0.999 4). RSD was 0.21%, indicating good repetitiveness. The average recovery rate was 99.10%, it showed that the method was stable and reliable. The optimal conditions were as follows: extraction temperature at 100℃,ethanol concentration of 80%, extraction time 3 h, solid-liquid ratio 1∶30. The yield was 12.59% under these conditions.

Key words: Houttuynia cordata Thunb whole plant; flavonoids; soxhlet extraction method; spectrophotometry

鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为三白草科一年生草本植物,始载于《名医别录》,自古以来供食药两用[1],现被国家卫生部正式确定为“既是食品,又是药品”,极具开发价值[2-4]｡紫赤色,易于种植,肥地能蔓生,多生长在湿地山谷阴处｡黄酮类化合物(Flavonoids)是经植物光合作用产生的一大类化合物[5,6],它广泛存在于药用植物､水果和蔬菜中,特别是高等植物的花､叶､根中较多[7]｡黄酮具有广泛的生理活性,如抗氧化､抗癌､防治心脑血管疾病､防治糖尿病､抗菌､抗病毒､抗过敏､祛痰､平喘､抑制消化道疾病､保肝等作用｡

植物体内的黄酮的提取主要采用溶剂法､微波法､超声波提取法和超临界流体萃取法等｡科研工作者对黄酮的提取做了大量的工作[8-14]｡黄酮类化合物的提取

主要采用热水浸提法,由于黄酮类化p

1材料与方法

1.1材料与试剂

供试材料:鱼腥草全草(于2010年4月中旬采于湖南省永州市零陵区),自然风干备用｡供试试剂:芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);无水乙醇､硝酸铝､亚硝酸钠､氢氧化钠等均为国产分析纯｡

1.2仪器

UV-752紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司),AL104电子天平(Mettler Toledo仪器公司),DF-101S集热恒温磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司),索式提取器｡

1.3鱼腥草中黄酮提取条件的优化

取风干后的鱼腥草全草,切碎,放入去离子水中浸泡0.5 h,沸水中煮沸5 min,用清水漂洗数次,洗至沥液接近无色为止,沥干,置烘箱(70℃左右)中烘干,碾碎成粉末状｡准确称取4.0 g经预处理的鱼腥草全草,置于索式提取器的回流管中｡在磁力搅拌器下,以乙醇为溶剂,选择不同提取温度､提取时间､乙醇浓度和固液比为参试因子,以总黄酮的提取量为衡量指标,采用L9(34)正交试验设计表布置试验,以确定鱼腥草中黄酮最佳提取工艺,各因素水平如表1｡所得提取液经过滤,即得到黄酮浸提液｡抽滤,得到黄酮滤液及滤渣｡将滤渣注入到相同体积的､已预冷的甲醇溶液中,静置,得到甲醇-黄酮混合物｡将所得黄酮滤液和甲醇-黄酮混合物进行抽滤,打散滤饼,用95%乙醇溶液洗涤,再抽滤,再打散滤饼,最后用无水乙醇洗涤脱水,得到黄酮提取液｡

1.4鱼腥草中黄酮含量的测定

1.4.1溶液的制备标准品溶液:取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50 mg,精密称定,置于50 mL容量瓶中,加60%乙醇适量,水浴上微热,使溶解,放冷后用60%乙醇稀释至刻度,摇匀｡样品溶液:准确称取干燥鱼腥草叶粉末4 g,加入120 mL 80%的乙醇溶液,在100℃下回流提取3 h,冷却､过滤,共提取3次,合并滤液并定容至200 mL,得测定用样液｡1 mol/L NaOH溶液:准确称取4.000 0 g NaOH固体,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡NaNO2溶液(1∶20):准确称取5.000 0 g NaNO2,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡Al(NO3)3溶液(1∶10):准确称取10.000 0 g Al(NO3)3,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡

1.4.2标准曲线的绘制吸取标准品溶液0.0,1.0,

2.0,

3.0,

4.0及

5.0 mL,分别置于50 mL容量瓶中,各加60%乙醇使其成为5.0 mL｡加入NaNO2溶液(1∶20)0.5 mL,摇匀,放置6 min后;加Al(NO3)3溶液(1∶10)1.5 mL,摇匀,放置6 min;加1.0 mol/L NaOH试液4.0 mL,去离子水稀释至刻度,摇匀,放置15 min｡在510 nm波长下测定各溶液的吸光度｡以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线｡