生物化学检验实验室基本知识

第二章生物化学检验实验室基本知识

掌握好临床实验室的基本知识，包括实验用纯水，实验室常用器材、试剂、

试剂盒，参考范围和医学决定水平，实验方法与参考物质，方法学评价试验，临床诊断性能评价等，才可能保证检测结果的准确度与精密度，能够促进实验室与临床的沟通，因此其对于从事生物化学检验的实验室工作者非常重要。

第一节实验用纯水

实验用纯水指天然水和自来水经过蒸馏、离子交换、活性炭吸附、超滤等处理后除去了杂质的水。其质量的高低直接影响到检测结果的准确度和精密度。

一、实验室用水等级

1985年美国国家临床实验室标准委员会（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）将实验用水分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级（表2-1）。中国国家技术监督局先后于1992年、2000年批准实施的《中国国家验室用水标准》（GB6682-92、GB6682-2000），也将分析实验用水分为三个等级（表2-2），两次

的区别主要是电导率的计量单位不同。

表2-1 美国NCCLS等级纯水的规定及用途(1985)

级别Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级pH 未定未定 5.0～8.0

电阻率(MΩ·cm, 25℃,最大量) 10 2.0 1.0

硅(mg SiO2/L,最大量) 0.05 0.1 1.0

微生物含量（每毫升最大菌落数）10 103 未定

硅（mgSiO2/L，最大量）0.05 0.1 1.0

微粒0.2µm微孔膜过滤未定未定

有机物质活性碳过滤未定未定

用途原子吸收，火焰光度，荧光，

电解质，酶，高效层析，电泳，一般实验室检

验，器皿冲洗。

器皿洗涤，要

求不高的定性

学习目标

掌握诊断试剂盒的选择与性能指标评价，实验方法与参考物质的分级，五种方法学评价试验的目的、原理、操作、计算及注意事项。

熟悉化学试剂的选择、保存与配制，常用临床实验室器材的使用及玻璃仪器的清洗，参考范围和医学决定水平，实验方法与参考物质的相关基本概念，实验方法的正确选择，诊断试验的性能评价。

了解实验用纯水。

参比液，缓冲液。试验。

表2-2 中国国家验室用水GB6682-2002标准

名称一级二级三级pH范围(25℃) －（未定）－ 5.0～7.5

电导率（25℃）ms/m ≤ 0.01 0.10 0.50

比电阻（25℃，MΩ·cm）≥10 1 0.2

可氧化物质（以O计）mg/L ＜－0.08 0.40

吸光度（254nm，1cm光程）≤ 0.001 0.01 －

蒸发残渣（105±25℃）mg/L ≤－ 1.0 2.0

可溶性硅（以SiO2计）mg/L ＜ 0.01 0.02 －

可见，Ⅰ级（一级）水最好。临床实验室一般选用Ⅱ级（二级）水即可。水越纯，所含离子就越少，则电阻越大，导电性越差，即电阻率（比电阻）越大，电导率越小。同时，水越纯，所含的SiO2、细菌数、有机物等越少。

二、纯水的制备方法

（一）蒸馏法

自来水(或天然水)在蒸馏器中进行加热气化，水蒸气经冷凝后得到蒸馏水（distiled water，DW）。

蒸馏水的电阻率约为0.1MΩ·cm（25℃）。

(二) 离子交换法

将自来水通过离子交换树脂以除去水中杂质离子，称为离子交换法。离子交换法制备去离子水（deionized water，DW）的原理是水中的杂质离子先通过扩散进入树脂颗粒的内部，然后水中的Na+、Ca2+等与阳离子交换树脂中的活性基团H+发生交换，水中的Cl-、SO42-等则与阴离子交换树脂中的活性基团OH-发生交换。由于树脂为多孔网状结构，具有非常强的吸附能力，可以同时除去颗粒杂质。

去离子水的电阻率约为5.0MΩ·cm（25℃）以上。

蒸馏水与去离子水的英文缩写均为DW。因蒸馏水里面有挥发性物质、有离子干扰，故临床实验室多用去离子水，或先蒸馏、后去离子的纯水。

(三)其他方法

在制备纯水时，还可采用超滤膜法（除细菌等），活性炭吸附法（除有机物）等，以及采用活性炭吸附法、去离子树脂、超滤膜法等步骤的混合纯化系统。与自动生化分析仪配套的纯水机一般采用混合纯化系统，要求其纯水电阻率大于2.0MΩ·cm（25℃）。

三、水的纯度检查

水的纯度检查首先测定电阻率或电导率，然后检测残留物含量。

1.电阻率利用电导仪或兆欧表测定。电导仪测得的电导率可与电阻率换算：电导的单位是西门子(S)，电导(S)与电阻(Ω)互为倒数。电导率为每cm长的电导(S/cm)，电导仪的表头读数单位为µS/cm，因此电导仪读数为1时，电阻率为1×106Ω·cm = 1MΩ·cm。

GB6682-2000规定的一级水电导率的最小值为0.01mS/m，即为0.01µS/mm = 0.1µS/cm，正好与GB6682-92规定的一级水电导率的最小值0.1µS/cm 相吻合。

2.可溶性硅限量试验取纯水10ml，加入15滴1%的钼酸铵溶液，8滴草酸、硫酸混合液(按4%草酸1份加4mol/L硫酸3份的体积比)，混匀置室温10min，加5滴1%硫酸亚铁溶液，摇匀以不呈蓝色为合格(≤0.05mg/L)（以上百分比均为W/V）。

3.细菌菌落计数按细菌常规菌落计数法进行检测。

实际工作中，除了要保证实验用纯水的制备质量外，还应重视纯水的贮存、运输以及使用过程的规范化，避免一切可能的污染，防止纯水等级的下降。

第二节常用临床实验室器材

常用临床实验室器材包括普通的玻璃器材以及非玻璃器材。普通的玻璃器材又分为量器类和容器类。量器用于计量溶液体积，如量筒、容量瓶、刻度吸管等，不能作为反应容器，更不能加热。容器则是物质反应或贮存的器皿如试管、烧杯等。非玻璃器材包括微量加样器，一次性注射器、采血器、塑料试管，塑料吸管、试剂瓶、洗瓶等，以塑料类为主。

一、微量加样器的使用

微量加样器又称微量移液器、微量进样器。其下端为可装卸、可更换的尖管形移液嘴（吸头），上方是控制采样的推进按钮。常用的有固定式和可调式两种类型，规格有µl级、ml级。其准确度和精密度均高于有被替代趋势的刻度吸管。

（一）工作原理

微量加样器利用排代原理由活塞的定程运动形成负压吸入定量的液体，其吸液量由活塞在活塞套内移动的距离来确定，再按下按钮使活塞向下移动，排出活塞腔内的气体而将吸头内的液体排出。