转座子插入敲除 PPT
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使用转座子进行插入突变的优点有:
• (1 )转座子能够在转座酶的存在下从插入位点剪切下来,造成 突变体反转。采用这种方法可进一步确证突变体表型是否由转座 子插入突变引起。
• (2)大多数转座的位点偏好于连锁位点,所以如果有一个可转座 的元件靠近目的基因,那么可转座的元件即会高效地移动并插入 目的基因。因此,即使在突变体库中没有发现期望的插入位点, 仍可以采用转座子在连锁位点上的转座获得目的基因被插入失活 的品系。
• 用特异的开放阅读框捕获技术,可以使自然散在的转座酶编码基 因高表达,人为催化激活转座子使其苏醒,执行插入、切除等任 务。目前已经应用于微生物、昆虫、植物、动物及人类基因组功 能的研究。例如蛙类基因组含有Tcl水手转座子超家族,呈自然 失活状态,转座酶与转座增强子序列末端结合,在HMGBI蛋白协助 下,激活转座子,使睡美人转座子苏醒。
• 1、剪切-粘贴机制 • 2、复制-粘贴机制
大家应该也有点累了,稍作休息
大家有疑问的,可以询问和交流
插入突变
• 睡美人转座子(sleeping bueaty,转座子SB)已证明在小鼠和人细 胞中可以激活,转座子插入新的位点后,该位点附近的基因即受 到抑制呈现隐性的“睡美人”表型。
• 一旦转座子在转座酶的作用下从这一位点上转走,该位点的基因 隐性表型又恢复为显性表型,即“睡美人苏醒”。调控转座酶பைடு நூலகம் 转座子活性的系统称为青蛙王子(Frog Prince)。
• (3 )当一个基因家族的多个成员沿染色体串连排列时,可采用 复制型的转座系统创建该基因家族全部成员均被敲除的突变体。
转座子插入敲除
特点:
• 1、所有生物的染色体都有转座子 • 2、转座相关序列可以占据物种基因的很大
一部分,如人和玉米基因组的50%以上是由 转座相关序列组成 • 3、转座子的含量在不同基因组中变化很大 • 4、当转座子移位时,转座因子通常对插入 位点几乎没有序列选择性
转座子类型:
• 1、DNA转座子 • 2、类病毒反转录转座子 • 3、聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子