3.高效液相色谱仪流程及主要部件
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a. 注射器进样装置：微量进样器刺过装有弹性隔膜的 进样器，针尖直达固定相上端。 缺点：不能承受高压，须停流进样；无法取得精确 的保留时间 b. 高压定量进样阀：流路中 为高压力工作状态，通常 使用耐高压的六通阀进样 装置，其结构如图所示： 优点：进样准确，重现性 好，适于定量分析
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类 1）往复式柱塞泵：广泛使用的一种 恒流泵，柱塞反复进出缸体，100 次/min。可通过改变冲程（柱塞进 入缸体中距离的大小）或往复的频 率来调节流量；易于更换溶剂，适 用于梯度洗脱但有脉冲波动 2）气动放大泵：据液体的压力传导 原理而设计，是一种恒压泵 液缸体积大，更换流动相不方便， 不适于频繁更换流动相以选择合适 溶剂的实验，也不便于梯度洗脱， 但能供给无脉冲、稳定流量的输出
作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性 吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律
特点：
灵敏度高； 线形范围高；
波长可选，易于操作；
对流动相的流速和温度变化不敏感； 应用可变波长检测器（流通池装有紫外或紫外可见分光 光度计），以选择最佳检测波长。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器
使用粒度很小的固定相（<10μm）、流动液的扩散系数远 小于气体，故液体的流动相高速通过时，液体流动时阻力 很大，必须要有很高的柱前压力。 压力：150～350×105 Pa，高压、高速是高效液相色谱的
特点之一。
流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调 应具有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特性
application of HPLC
3. 阴离子的分析
离子色谱法（双柱法）分析 分离柱：薄壳型阴离子交换树脂 抑制柱：强酸型树脂（H+型） 流动相：0.003M NaHCO3 / 0.024 M Na2CO3
流
速：2.3mL/min
进样体积：100 L 检测器：电导检测器
思考题
1．现需分离分析一氨基酸试样，拟采用哪种色谱？ 2. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 3. 在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对柱效能的影响可以忽 略 4. 对下列试样，用液相色谱分析，应采用何种检测器：
(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
装柱方法：有干法和湿法两种，按粒度20μm划分， 湿法装柱又称匀浆法。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合物有响应。
受紫外光激发后能够辐射出比紫 外光波长较长的光 高灵敏度(比紫外检测器高两个数 量级，达10-11g/ml)、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉 素、卟啉类化合物、农药、药物 、氨基酸、甾类化合物等有响应 ；
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 e. 电导检测器（electrical conductivity detector）
（l）长链饱和烷烃的混合物 （2）水源中多环芳烃化合物。
5. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析，应采用哪一种液相色 谱法？ 6.指出下列各种色谱法，最适宜分离的物质。 （l）气液色谱；(2) 正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子交
换 色谱;（5）凝胶色谱；(6）气固色谱；(7）液固色谱。
仪器分析课程讲义
第三章 高效液相色谱分析
2004-11-25
目录
§3-6 高效液相色谱流程 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-8 高效液相色谱仪的应用实例
§3-6 高效液相色谱流程
§3-6 高效液相色谱流程
§3-7 高效液相wk.baidu.com谱仪主要部件
一、 高压输液泵
用于输送流动相，由于色谱柱很细、为了获得高柱效而
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(2)梯度淋洗装置
外梯度:
利用两台高压输液泵， 将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例 调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(3) 进样装置
§3-7高效液相色谱仪主要部件
(2)梯度淋洗装置
又称梯度洗提、梯度洗脱，与气相色谱中的程序升温 一样，可极大地改善分离效果 载液中含有两种及以上的不同极性（或不同性质）的 溶剂，在分离过程中按照一定的程序连续改变载液中 溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被 分离组分的分离因素。 通过梯度洗脱，可缩短分离时间、提高分辨能力、改 善峰形，还可提高分析精度。
§3-8 高效液相色谱的应用
application of HPLC
1. 环境中有机氯农药残留量分析
固定相：薄壳型硅胶(37 ～50 m) 流动相：正己烷
流
速：1.5 mL/min
色谱柱：50cm2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进 行分析。
§3-8 高效液相色谱的应用
属电化学检测器，是离子色谱法中应用最为广泛的检测器 作用原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化 来测定电离物质的含量。 受温度影响较大，须严格控制温 度（池体内放热敏电阻器） 化学抑制型离子色谱体系中可直 接检测 单柱离子色谱体系中，背景电导 高，极化效应严重，应采用五电 极式电导检测器或经改良的两电 极式电导检测器。
application of HPLC
2. 稠环芳烃的分析
稠环芳烃多为致癌物质 反相液-液色谱法 固定相：十八烷基硅烷化键合相
流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇
线性梯度淋洗，2%/min 流 柱 柱 速：1mL/min 温：50 º C 压：70 104 Pa
检测器：紫外检测器
§3-8 高效液相色谱的应用
除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差 值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不 同的折光指数）；
灵敏度低（10-7g/ml） 、对温度 敏感、不能用于梯度洗脱；
偏转式、反射式和干涉型三种
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 d. 荧光检测器（fluorescence detector）
紫外可见光度检测 器的重要进展； 1021个二极管阵列， 各检测某一特定波 长，无需停流扫描 而观察色谱柱流出 物的各个瞬间的动 态光谱吸收图
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 c. 差示折光检测器（differential refractive index detector）
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类 1）往复式柱塞泵：广泛使用的一种 恒流泵，柱塞反复进出缸体，100 次/min。可通过改变冲程（柱塞进 入缸体中距离的大小）或往复的频 率来调节流量；易于更换溶剂，适 用于梯度洗脱但有脉冲波动 2）气动放大泵：据液体的压力传导 原理而设计，是一种恒压泵 液缸体积大，更换流动相不方便， 不适于频繁更换流动相以选择合适 溶剂的实验，也不便于梯度洗脱， 但能供给无脉冲、稳定流量的输出
作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性 吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律
特点：
灵敏度高； 线形范围高；
波长可选，易于操作；
对流动相的流速和温度变化不敏感； 应用可变波长检测器（流通池装有紫外或紫外可见分光 光度计），以选择最佳检测波长。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器
使用粒度很小的固定相（<10μm）、流动液的扩散系数远 小于气体，故液体的流动相高速通过时，液体流动时阻力 很大，必须要有很高的柱前压力。 压力：150～350×105 Pa，高压、高速是高效液相色谱的
特点之一。
流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调 应具有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特性
application of HPLC
3. 阴离子的分析
离子色谱法（双柱法）分析 分离柱：薄壳型阴离子交换树脂 抑制柱：强酸型树脂（H+型） 流动相：0.003M NaHCO3 / 0.024 M Na2CO3
流
速：2.3mL/min
进样体积：100 L 检测器：电导检测器
思考题
1．现需分离分析一氨基酸试样，拟采用哪种色谱？ 2. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 3. 在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对柱效能的影响可以忽 略 4. 对下列试样，用液相色谱分析，应采用何种检测器：
(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
装柱方法：有干法和湿法两种，按粒度20μm划分， 湿法装柱又称匀浆法。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合物有响应。
受紫外光激发后能够辐射出比紫 外光波长较长的光 高灵敏度(比紫外检测器高两个数 量级，达10-11g/ml)、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉 素、卟啉类化合物、农药、药物 、氨基酸、甾类化合物等有响应 ；
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 e. 电导检测器（electrical conductivity detector）
（l）长链饱和烷烃的混合物 （2）水源中多环芳烃化合物。
5. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析，应采用哪一种液相色 谱法？ 6.指出下列各种色谱法，最适宜分离的物质。 （l）气液色谱；(2) 正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子交
换 色谱;（5）凝胶色谱；(6）气固色谱；(7）液固色谱。
仪器分析课程讲义
第三章 高效液相色谱分析
2004-11-25
目录
§3-6 高效液相色谱流程 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-8 高效液相色谱仪的应用实例
§3-6 高效液相色谱流程
§3-6 高效液相色谱流程
§3-7 高效液相wk.baidu.com谱仪主要部件
一、 高压输液泵
用于输送流动相，由于色谱柱很细、为了获得高柱效而
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(2)梯度淋洗装置
外梯度:
利用两台高压输液泵， 将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例 调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(3) 进样装置
§3-7高效液相色谱仪主要部件
(2)梯度淋洗装置
又称梯度洗提、梯度洗脱，与气相色谱中的程序升温 一样，可极大地改善分离效果 载液中含有两种及以上的不同极性（或不同性质）的 溶剂，在分离过程中按照一定的程序连续改变载液中 溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被 分离组分的分离因素。 通过梯度洗脱，可缩短分离时间、提高分辨能力、改 善峰形，还可提高分析精度。
§3-8 高效液相色谱的应用
application of HPLC
1. 环境中有机氯农药残留量分析
固定相：薄壳型硅胶(37 ～50 m) 流动相：正己烷
流
速：1.5 mL/min
色谱柱：50cm2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进 行分析。
§3-8 高效液相色谱的应用
属电化学检测器，是离子色谱法中应用最为广泛的检测器 作用原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化 来测定电离物质的含量。 受温度影响较大，须严格控制温 度（池体内放热敏电阻器） 化学抑制型离子色谱体系中可直 接检测 单柱离子色谱体系中，背景电导 高，极化效应严重，应采用五电 极式电导检测器或经改良的两电 极式电导检测器。
application of HPLC
2. 稠环芳烃的分析
稠环芳烃多为致癌物质 反相液-液色谱法 固定相：十八烷基硅烷化键合相
流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇
线性梯度淋洗，2%/min 流 柱 柱 速：1mL/min 温：50 º C 压：70 104 Pa
检测器：紫外检测器
§3-8 高效液相色谱的应用
除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差 值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不 同的折光指数）；
灵敏度低（10-7g/ml） 、对温度 敏感、不能用于梯度洗脱；
偏转式、反射式和干涉型三种
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 d. 荧光检测器（fluorescence detector）
紫外可见光度检测 器的重要进展； 1021个二极管阵列， 各检测某一特定波 长，无需停流扫描 而观察色谱柱流出 物的各个瞬间的动 态光谱吸收图
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器
§3-7 高效液相色谱仪主要部件
(5) 液相色谱检测器 c. 差示折光检测器（differential refractive index detector）