发酵工业菌种.

（2）变色圈法 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可 在底物平板中加入指示剂或显色剂，使目的微 生物菌落周围呈现变色圈，从而能被快速鉴别 出来。
如
筛选果胶酶产生菌
用含0.2%果胶为唯一碳源的培养基平板，对含微 生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2%刚果 红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会 出现绛红色水解圈。
又如 分离解脂微生物
豆油作底物 甘油三丁酸酯为底物
中性红（红～黄. 6.8～8.0. ） 罗丹明B为指示剂 指示 荧光圈 菌落周围呈红色圈
（3）生长圈法
通常用于分离筛选氨基酸、 核苷酸和维生素的产生菌 指示菌（工具菌）是一些相对应的营养 缺陷型菌株 将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺少所需 营养物的平板上进行培养，若某菌株能合成平 板所需的营养物，在该菌株的菌落周围便会形 成一个混浊的生长圈
第2章
发酵工业菌种
• 在发酵工业中，工业生产水平主要由三个 要素决定，即： 1、 生产菌种性能 2、发酵及提取工艺条件 3、 生产设备 其中，生产菌种是最重要的因素，是发酵 的灵魂。
2.1 发酵工业常用菌种
2.1.1 发酵工业对菌种的要求 （1）菌种不能是病源菌 （2）发酵周期短，生产能力强 （3）发酵过程中不产或少产与目标产物性质 相似的副产物 （4）原料来源广价格低廉，菌种能高效地将 原料转化成产品 （5）对需添加的前体有耐受能力，且不能将 前体作为一般碳源利用
菌种分离：将混杂着各种微生物的样品按照实 际需要和菌株特性采取迅速、准确、有效的方 法对它们进行分离、筛选，进而得到所需的微 生物的过程。
从自然界分离筛选菌种的一般步骤： 样品采集 样品预处理 富集培养 菌种分离 初筛、复筛 性能鉴定 2.2.1 样品采集 总原则是：（1） 样品来源越广，获得新菌种 的可能性越大； （2）要了解目标产物的性质和可能产目标产 物的微生物种类及其生理特征。
①了解微生物的代谢规律。如初级代谢基本 相同，但通常丝状菌及产芽孢细菌才能进 行次级代谢。 ②考虑微生物的生理特征。如营养类型、生 长环境等。
1 土样选择 如酵母菌 果园 产蛋白酶菌 鱼、肉加工厂 高温酶产生菌 火山或温泉 耐压菌 油井或海洋深处
2 采样深度 离地表5-25cm处较好。
3 季节条件 避免雨季，一般以秋季最理想。 4 采样方法 用无菌器具按规范取样，记录采样地 点、时间、环境情况等以备考证。
6 菌种纯，遗传性能稳定，不易变异退化 7 可以在易于控制的条件下发酵
2.1.2 发酵工业常用菌种 （1）细菌 自然界分布最广、数量最多的一类微 生物，单细胞原核生物。
① 工业常用的有枯草杆菌、短杆菌
② 还常用作基因工程载体的宿主细胞，用于构 建基因工程菌来生产外源物质。
（2）酵母菌 单细胞真核生物，主要分布于含糖较多的 酸性环境中如水果、蔬菜、花蜜和植物叶子上， 以及果园土壤中。 常用的有啤酒酵母、酒精酵母。
酿酒酵母
假丝酵母
红酵母
（3）霉菌 是一群在营养基质上形成绒毛状、网状、 絮状菌丝真菌的通称。分布于偏酸性环境中， 常用的有根霉、毛霉、青霉等
根霉
wk.baidu.com曲霉
青霉
（4）放线菌 因其菌落呈放射状而得名。属原核微生物 类群。分布于有机质丰富的微碱性环境中，大 多腐生，少数寄生 。最大价值在于能生产多 种抗生素，从微生物中发现的抗生素有60%以 上的是来自于放线菌。 常用的有链霉菌属、小单孢属等。
常用的平板快速检测法有： （1）透明圈法
在平板培养基中加入溶解性较差的底物， 使培养基混浊； 能分解底物的微生物便会在菌落周围产生 透明圈，圈与菌落直径比的大小初步反应菌株 利用底物的能力。 分离水解酶产生菌时较多采用，如蛋白酶、 淀粉酶、脂肪酶、核酸酶等；
例如用此法分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌 土壤经巴氏消毒，以减少不产芽孢的微生 物；然后制备成菌悬液涂布在pH8-9的琼脂培 养基（含有均匀的不溶性蛋白质）表面；碱性 蛋白酶产生菌能消化平板上的不溶性蛋白质， 产生一透明圈。
（5）其它类 ① 药用真菌：如灵芝、茯苓、冬虫夏草等 ② 藻类：如螺旋藻
2.2 发酵工业菌种的分离筛选
获得优良的生产菌种是实现高水平发酵工 程工业生产的第一环节。 符合发酵工业要求的菌种可从如下途径获得： 1 从自然界分离筛选 2 从菌种保存机构直接购买所需的菌株 3 从生产过程中发酵水平高的批号中重新进 行分筛
如 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的 琼脂混合倒平板，在其上涂布含菌样品保温 培养，周围出现生长圈的菌落即为嘌呤产生 菌
（4）抑菌圈法
常用于抗生素产生菌的分 离筛选 指示菌采用抗生素的敏感菌 若被检菌能分泌某些抑制菌生长的物质， 如抗生素等，便会在该菌落周围形成工具 菌不能生长的抑菌圈
（1）控制培养基的营养成分：如唯一碳源 （2）控制培养条件：如T、DO、pH、添加 抑制剂等 2.2.4 菌种分离 常用的纯培养分离方法有： （1）平板划线法 （2）稀释分离法 （3）简单平板分离法 （4）涂布分离法 （5）毛细管分离法 （6）小滴分离法
通常某些菌种在分离时就可进行筛选，一 般这些菌在平板上培养时，其产物可与指示剂、 显色剂或底物等反应而直接定性地鉴定。
分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用 透明圈法初筛
在选择培养基中加入碳酸钙，使平板呈混浊 状，产酸菌能够把菌落周围的碳酸钙水解，形 成清晰的透明圈
透明圈的大小不能完全作为选择高产菌的 依据，因为在深层培养中的产酶单位与平板 上圈的大小之间并不完全成正比。
但作为初筛的手段是有意义的
2.2.2 样品的预处理 预处理可提高菌种的分离效率，常使 用的方法有： （1） 物理方法： ① 热处理：常用来减少样品中的细菌数。 ② 膜过滤和离心法：用来浓缩水中的微生 物细胞。 （2） 化学方法： 在培养基中添加某些化学成分来增加 特定微生物数量。
（3）诱饵法： 将一些固体物质加到待分离的土壤或 水中做成诱饵富集目的菌。 2.2.3 富集培养 利用不同微生物生长繁殖对环境和营 养的要求不同，投其所好取其所抗，使目 的菌成为人工环境下的优势菌。