药物分析课件-第四章_药物的含量测定方法

二、光谱分析法
光谱分析法
药典 收载
红外分 光度法
火焰光 度法
紫外可见 分光度法
本章 讲叙
荧光分 析法
原子吸收分 光光度法
紫外可见 分光度法
荧光分 析法
（一）紫外-可见分光光度法
• 基于物质分子对紫外光区（波长为200~400nm）
和可见光区（波长为400~760nm）的单色光辐
射的吸收特性建立起来的光谱分析方法。 • 1、朗伯-比尔定律
• 本法紫外区须选用石英比色皿，比色皿一般为1cm，吸光度 在0.3~0.7之间为宜，选用最大吸收光波长。 • 本法比较少应用于原料药的含量测定，可用于制剂的含量测 定。
（1）对照品比较法
• 分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液 中所含被测药物的量应为供试品溶液中被测成分 规定量的100±10%，所用溶剂量两者相同，在 规定的波长下测定吸光度。按下式计算结果：
特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛
tR
h
W1/2
t0
0
0.5h
0.607h
t
W
色谱柱
填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶
（一）HPLC
1. 对仪器一般要求
变
固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改
其他均可适当改变 色谱图20分钟内记录完毕
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5 重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％ 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.95 ～ 1.05
讨论
• 在剩余量滴定法中，第一滴定液与第二滴 定液的浓度是相当的。
• 如上例中，第一滴定液为溴滴定液 （0.05mol/L），第二滴定液为硫代硫酸 钠滴定液（0.1mol/L）。
• Br2~I2~2Na2S2O3
(2)剩余量滴定法
• 本公式适用于空白校正情形
• 本公式适用于没有做空白校正情形
（二）容量分析法的有关计算
3. HPLC测定法
（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
峰面积 含量
对照液（R）： AR
内标液（S）： AS
CR
CS
AS/CS f= ———— AR /CR
’ / C’ A S S f= ———— Ax /Cx
供试液（X）： AX
CX
Ax Cx=f· ———— A’S / C’S
3. HPLC测定法
• 对于固体制剂:
P16：制剂的标示量：系指每一 支、片或每一个单位制剂中含有 主药的重量（或效价）或含量或 装量。
Cx D W 标示量（%） = 100% W B W：制剂平均重量（装量）； B：制剂的标示量；
（一）紫外-可见分光光度法
（2）吸收系数法
• 引入吸光系数的含量计算方法
通过指示剂颜色变化 ， 或者电子设备的电位或电 流突变来指示滴定终点， 滴定终点和计量不一致， 就会引入滴定误差，应该 尽量避免。
一、容量分析法
• 特点：
• 1.方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速；
• 2.方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少； • 3.测定结果准确：误差低于0.2%，满足准确度高样品； • 4.方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成 分含量较高的样品分析。
方法：对照品比较法
计算：
C供＝
R 供－R 供空白 R 对－R 对空白
C对
三、色谱分析法
根据混合物中各组分的色谱行为差异，先行分 离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方 法，是分离分析混合物的最有力手段。
按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 分类 按分离方法：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC
（2）外标法测定供试品中主成分含量
对照液（R）： AR
供试液（X）： AX
CR
CX
CX CR ——＝—— AX AR CR· AX CX＝———— AR
• 0.3g供试品+水100mL+盐酸15mL+碘化钾试液 10mL——密塞，振摇后暗处放置10min——碘量法
Sb 2 I Sb I 2
-
5
3
I 2 2 S 2O 2 I S 4O
2 3

2 6
Sb5+——2S2O32-
（1）生成物滴定法
(2)剩余量滴定法
(2)剩余量滴定法
AX C X 1% E1cm 100
mg转化单位
• 溶液 • 片剂
A D V 1000 标示量（%） = 1% 100% E1cm 100 V B
A D W 1000 标示量（%） = 1% 100% E1cm 100 W B
g/mL
（2）吸收系数法
• 示例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定： • 精密量取本品适量（约相当于盐酸氯丙嗪50mg），置 200mL量瓶中，加盐酸溶液（9-1000）稀释至刻度，摇匀； 精密量取2mL，置100mL量瓶中，用盐酸（9—1000）稀 释至刻度，摇匀；在254nm下测定吸光度，按盐酸氯丙嗪 的吸收百分系数计算，即得。 • 注射液，选溶液公式，如下：
（2）吸收系数法
• 固体试剂公式推导如下：
（一）紫外-可见分光光度法
• 3.计算分光光度法 • 多种，具体按每种药物规定的方法进行 如： VA的三点校正法 • 不宜做含量测定 • 4.比色法 • 加入显色剂后，按照对照品比较法测定影 响显色因素很多，故需注意平行操作空白 溶剂：溶剂+显色剂，同法处理
2、方法特点与适用范围
（1）简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易 于普及 （2）灵敏度高：本法灵敏度可达10-7~10-4g/mL，适用于低 浓度试样分析 （3）准确度较高：本法误差在2%~5%之间，适用于对测定结 果的准确度要求较高的样品 （4）专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相 近的有关物质缺乏选择性。
（二）容量分析法的有关计算
• 3.含量计算方法：直接滴定法与间接滴定法 • 直接滴定法
V T 含量（%） = 100% W
• 在实际工作中，滴定液的浓度可能与药典规定的 浓度并不一致，所以应该进行校正。
实际摩尔浓度 F 实际摩尔浓度=F 规定摩尔浓度 规定摩尔浓度
（二）容量分析法的有关计算
• 直接滴定法的含量计算方法
直接读取 药典规定
自己标定
V T F 含量（%） = 100% W
取样量
（二）容量分析法的有关计算
（1）生成物滴定法
（1）生成物滴定法
• 示例三 葡萄糖酸锑钠的含量测定
本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘，再用碘与硫代 硫酸钠反应生成碘离子，相当于是用硫代硫酸钠在滴定葡萄 糖锑钠，因此要找出它们两者的量反应关系，也就是a和b。
WA WB 被测药物的摩尔质量 aM A bM B
被测药物反应的质量
滴定液反应的质量
滴定液的摩尔质量
（二）容量分析法的有关计算
• 滴定度的计算
用B滴定A
WA
a 待测液 mB VB M b 浓度
mB 等于 1mL
滴定液
WB a M A nB M A bM B b
A D V 1000 标示量（%） = 1% 100% E1cm 100 V B
（2）吸收系数法
• D为供试品溶液的稀释体积：共稀释了 200mL×100÷2=10000mL
A D V 1000 标示量（%） = 1% 100% E1cm 100 V B
• V ，是注射液规格（mL/支）：已知 • B，注射液标示量（mg/支）：已知 • V，供试品取样量：2mL • A，吸光度：测量值，已知 1% E • 1cm ：已知
目 标
基于生物学原理 的效价测定。
基 础
本章的目标： 含量测定。
生物检定法，微生 物检定法，酶法。
前言
药物的含量测定
第一节 定量分析方法的分类与特点
• 一、容量分析法，亦称滴定法
• 定义：将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由 滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与 被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后 根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量 关系计算出被测药物的含量。
Ax CR Cx AR
Cx供试品溶液浓度； CR对照品溶液浓度； Ax，AR对应吸光度；
（1）对照品比较法
• 对原料药:
对应于稀释 体积浓度
Cx D 测得量 含量（%） = 100%= 100% 称样量 W Cx : 供试品浓度； D：稀释体积； W：供试品的量；
（1）对照品比较法
A
浓度乘 体积=nB
计算有一个从质量到物质的量， 再到浓度再到滴定度的转变过程
（二）容量分析法的有关计算
a T (mg / mL) m M b
• 示例一 计算Vc的滴定度T
• 碘量法测定Vc含量[M（C6H6O6）=176.13]，C（I2） =0.05mol/L
C6 H 8O6 I 2 C6 H 6O6 2 HI a 1 T m M 0.05 176.13 8.806(mg / mL) b 1
(2)剩余量滴定法
(2)剩余量滴定法
• 示例四 司可巴比妥钠的含量测定
取本品约0.1g，精密称定，置250mL碘瓶中，加水10mL，振 摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L) 25mL，再加盐酸 5mL，立即密塞，并振摇1min，在暗处放置15min后，注 意微开瓶塞，加碘化钾试液10mL，立即密塞，摇匀后，用 硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至终点时，加淀粉指 示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定得的结果用空白试验 校正。
• 适用范围：
• 广泛应用于化学原料的测定，较少应用于药物制剂的测定。
（二）容量分析法的有关计算
• 滴定度：每1mL规定浓度的滴定液所相当 的被测药物质量。《中国药典》用毫克 （mg）表示。
（二）容量分析法的有关计算
• 滴定度的计算
aA bB cC dD
被测 药物 滴定 液
用B滴定A
• 习题一 剩余碘量法测定异烟肼含量
异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液 （0.1mol/L)氧化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用 硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L)滴定（以淀粉为指示剂）。
（二）容量分析法Baidu Nhomakorabea有关计算
• 习题二 非那西丁含量测定
精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚 硝酸钠液（0.1010mol/L)滴定，用去20.00mL。每1mL 亚硝酸钠液（0.1mol/L)相当于17.92mg的C10H13O2N， 请计算非那西丁的含量。
(2)剩余量滴定法
• 示例四 司可巴比妥钠的含量测定
已知： 司可巴比妥钠M=260.27； 司可巴比妥钠与溴反应摩尔=1：1； W=0.1022g； 硫代硫酸钠浓度校正因子=1.038； 供试品滴定Vs=15.73mL； 空白试验滴定Vo=23.21mL；
a 1 T (mg / mL) m M 0.05 260.27 13.01( mg / mL) b 1 （VB0 VBS ) FB TA 含量（%） = 100% W
（二）容量分析法的有关计算
a T (mg / mL) m M b
• 示例二 异烟肼的滴定度
• 溴酸钾法测定异烟肼含量[M（C6H7N3O）=137.14]， C溴酸钾=0.01667mol/L
3C6 H 7 N3O 2KBrO3 3C6 H 5 NO2 3N 2 2KBr 3H 2O a 3 T m M 0.01667 137.14 3.429(mg / mL) b 2
（二）荧光分析法
• 特点
• 灵敏度高，可达10-10~10-12g/mL • 要求低浓度下测定，防止自熄灭作用 • 干扰因素多，须做空白测定 • 荧光弱的药物可衍生化后测定，可提高灵 敏度和选择性
（二）荧光分析法
含量测定
原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度 等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧 光强度R与该物质浓度C成正比
第四章 药物的含量测定方法 与验证
前言
• 药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价 药物质量的重要指标。
前言
药物的含量测定
分 两 类
P40：效价测定方法： 凡以生物学方法或者酶 学方法对药品中的特定 成分以标准品为对照， 作量反应平行线测定方 法进行的生物活性（效 力）测定。
基于化学或物理学 原理的含量测定。