泊马度胺对多发性骨髓瘤细胞MM1.S凋亡作用及其对Cereblon表达的调控研究

泊马度胺对多发性骨髓瘤细胞MM1.S凋亡作用及其对Cereblon

表达的调控研究

目的:探讨泊马度胺对人多发性骨髓瘤细胞株MM1.S的增殖、凋亡作用及其对Cereblon表达的影响,进一步探讨其对糖代谢关键酶及关键蛋白AMPK和

p-AMPK的调控。材料与方法:使用不同终浓度的泊马度胺分别作用于MM1.S细胞24、48、72h时CCK-8法检测MM1.S细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双重染色法检测MM1.S细胞凋亡率;实时定量PCR检测CRBN基因表达水平;Western blot 法检测泊马度胺对MM1.S细胞CRBN蛋白、糖代谢关键蛋白AMPK、p-AMPK表达量的影响;ELISA试剂盒检测丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶活性及乳酸含量。结果:1、泊马度胺对MM1.S细胞具有增殖抑制作用,其增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性(r=0.981,r=0.990)。

作用72 h时,40和80μmol/L组细胞增殖抑制率P<0.001,差异有统计学意义。2、泊马度胺能够诱导MM1.S细胞凋亡。泊马度胺终浓度分别为0、40和80μmol/L培养干预MM1.S细胞72 h,细胞凋亡率分别为:0.003±0.001,8.333±0.260,10.730±0.210,药物浓度越高,凋亡率越高(r=0.952),差异有统计学意义。

3、泊马度胺终浓度分别为0、20、40和80μmol/L培养干预MM1.S细胞72 h,CRBN基因表达量分别为:1.487±0.34,0.478±0.076,0.211±0.054,0.055±0.005。呈剂量依赖性,随着药物浓度增加,CRBN基因表达量下调(P<0.05),差异有统计学意义。

4、与对照组(即0μmol/L组)相比,泊马度胺药物组(40和80μmol/L组)CRBN蛋白表达明显降低,随着泊马度胺药物浓度的增加CRBN蛋白表达量逐渐降低。

5、与对照组(即0μmol/L组)相比,随着泊马度胺药物浓度的增加,糖代谢关键酶(丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶)活性及乳酸含量逐渐降低。

6、与对照组(即0μmol/L组)相比,随着泊马度胺药物浓度的增加,糖代谢关键蛋白AMPK蛋白表达量基本无变化,而p-AMPK蛋白表达量逐渐增加。结论:泊马度胺能够抑制MM1.S细胞增殖并促进其凋亡,一定浓度泊马度胺可降低MM1.S细胞CRBN基因表达并下调其蛋白表达量。

泊马度胺作用于MM1.S细胞时能够调控糖代谢通路。