补体的检测

可测知补体总溶血活性
在适当、稳定的反应系
统中，溶血反应与补体的 剂量依赖关系呈现“S”形 曲线 在轻微溶血和接近完全 溶血时，补体量的变化对 溶血程度的影响不大，即 溶血对补体量的依赖不敏 感。但在30％～70%溶血 时，补体含量仅出现较小 的变动，溶血程度也会发 生较大的改变
溶血程度与补体含量的关系
第十七章 补体检测及应用
第三临床医学院 临床检验教研室 王飞 副教授，副主任医师
第一节 补体的生物学特性与功能 一、补体的理化特性 二、补体的激活 三、补体系统的生物学功能
第二节 血清总补体活性测定 一、CH50测定原理 二、CH50测定方法要点及结果判断 三、方法评价与临床意义
第三节 补体结合试验 一、试验原理 二、试验方法 三、方法评价 第四节 单个补体成分的测定 一、免疫溶血 二、免疫化学法
第五节 补体测定的临床应用 思考题 小结
一、教学目的： 1、掌握补体总活性和单个补体成分的检测原理和 方法。 2、熟悉补体结合试验的原理和方法。 3、了解补体测定的应用。
第一节补体的生物学特性与功能
补体的发现 霍乱弧菌+新鲜免疫血清 霍乱弧菌+新鲜免疫血清 (56º C,30min)
细菌先凝集后溶解 细菌只凝集 +新鲜免疫血清 细Leabharlann Baidu又溶解
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
C1q
390
γ2
70
C9
79
α
240
C1r
C1s C2
95
85 117
β
α β1
35
35 20~30
B
D P
C1INH
95
25 220
β
α γ2
210~240
2 25
C3
C4 C5 C6 C7 C8
具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
一、 补体的理化特性
分 类
根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补 体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR)三大部分。
1、补体的固有成分 经典激活途径：C1q、C1r、C1s、C4、C2； MBL激活途径：MBL、MASP； 旁路激活途径：B因子、D因子； 共同末端通路：C3、C5—9 2.补体调节蛋白： 备解素、C1抑制物、 I因子、 C4结合蛋白、H因子、S蛋白等。 3.补体受体(CR): CR1～CR5、C3aR、C5aR、C1qR 等。
（一）CH50测定原理
应用绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）和其相应
的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物
和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解， 当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和 活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系， 测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，
190
180 190 128 120 163
β1
β2 β2 β2 β2 γ1
1300
430~600 75 60 55 200
150
1100 93 159 88
α
180
250
C4bp I因子 H因子 S因子
β β α
50 400~480 500
二、补体的激活
经典途径
经典激活途径
激活物质 起始分子 参与补体成分 所需离子 C3转化酶 C5转化酶 生物学作用 抗原抗体复合物 C1q C1、C4、C2、C3、C5C9 Ca2+、Mg2+ C4b2b C4b2b3b 参与特异性免疫的 效应阶段,感染后期 发挥作用
（二）CH50测定方法要点及结果判断
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，
可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm 波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
补体理化性质
由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因 子含量最低 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最 小。 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条件下 活性只能保持3～4d。 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加 剂等均可破坏补体
结论：新鲜免疫血清中含两种作用于细菌的物质
1、耐热的、能凝集细菌的物质，即抗体。 2、不耐热的、能辅助抗体介导的溶解细菌的物 质，即补体。
补体：是存在于人和脊椎动物血清中一组经
活化后具有酶活性、不耐热的糖蛋白,能自我 调节、具有免疫作用,包括30余种可溶性蛋白 和膜结合蛋白，故又被称为补体系统。
2.溶血素滴定
溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化
试验前需先行加热56℃ 30min或60℃ 3min以灭活补体 溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用 自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活 性测定中，大多使用2个单位。 溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定
三、 补体系统的生物学功能
1.溶解细胞、细菌和病毒 2.调理作用 3.清除免疫复合物 4.引起炎症反应 5.免疫调节作用
第二节 血清总补体活性测定
补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血 为判断终点，称为CH50 补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体 途径 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规） MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立
替代激活途径
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖 C3
C3、C5-C9、B因子、D因子
MBL途径 (甘露糖结合凝集素)
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
C2、C4 C2-C9、 MASP Ca2+ C4b2b C4b2b3b 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
Mg2+ C3bBb C3bnBb 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用