铁皮石斛组织培养

生根培养基的设计
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生根培养基
1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
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铁皮石斛的组织培养技术路线
外植体
培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
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初代培养基的设计
诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液： BA10ml,NAA5ml
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各时期的培养条件
• 茎段的诱导时间在5~11天之间 • 培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光 照时间10h/d
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参考文献
• [1]郑宽瑜,邓君浪,赵培快繁技术体系研究[J].云南 农业科技,2009,(S2):57-59。 • [2]周根余,谢薇,程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的 若干因素[J].江西科学,1999,17(4):231-235. • [3]叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究[J].中 国药业,2001,10(1):53。 • [4]李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培[J]. 福建热作科技,1999,24(1):29-31。 • [5]张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展 [J].中国中药杂志,2000,25(6):323-326。
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增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖 培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长 调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。
IBA BA
NAA
土豆汁
香蕉汁
IAA
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B1小组成员展示结束
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3
生长发育健壮苗优先
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外植体的处理
Text 1
Text 2
Text 3 在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
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生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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外植体的选择
优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段
1
2
接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。
摘去叶片和 膜质叶鞘， 剪成约2cm 长带节的小 段。
用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
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接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养 物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记
蔗糖：30g 琼脂：6.8g
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继代培养基的设计
增殖培养基
MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： BA5ml,NAA2ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml
铁皮石斛 组织培养
B1小组准备素材
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铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生 于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上， 喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。 一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、 金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极 品，它因表皮呈铁绿色而得名。
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