《兽医免疫学》实验课件：实验九(2)新城疫抗体水平评估—综合
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实验二 鸡群新城疫抗体水平检测
某鸡场免疫新城疫疫苗后，免疫效果须进行评 估，请用免疫学技术检测鸡群抗体效价，据测 定结果评估免疫效果。
鸡群对NDV的免疫状态评价标准
按一定比例抽查（20-30份血清或枚鸡蛋） HI≧24，鸡群有免疫力。 HI ≧26，成年鸡群有免疫力。 HI ≧28，对非典型ND有免疫力 HI效价参差不齐（HI≦23和HI ≧ 212并存），
➢ ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底；
➢ +++约有75％血球发生凝集； ➢ ++约有50％血球发生凝集；
➢ +约有25％血球发生凝集；
➢ －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。
结果判定
以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍 数
鸡群被感染过（疫苗免疫很少出现HI ≧ 212 所有检测的抗体水平HI ≧ 212，说明感染过或感
染正在发生。
一、实验材料
1. 鸡新城疫病毒 (弱毒株Lasota）液 2. 鸡红细胞：用生理盐水配成1%悬液 3. 抗凝剂：3.8%柠檬酸三钠缓冲液 4. 活鸡 5. V型血凝板、微量移液器，微量振荡器等
以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释度作为 判定终点； 以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最高血 清稀释倍数作为该血清的血凝抑制价。
(4)采血完成后，将注射器栓塞向后拉少许，以保证针筒内有足 够的空间析出血清； (5)将注射器放入37℃温箱1-2小时； (6)将注射器放入4℃冰箱2小时以上或过夜,血清即可析出，仍 未析出者，3000转离心10分钟，取上清即为血清。
（二）血凝试验（HA）
源自文库
弃50
1．做标记； 2．加生理盐水； 3. 第1孔加NDV，然后倍比稀释； 4．加红细胞； 5．立即振荡2min，静置20－30min； 6. 观察结果。
作为该病毒的血凝价。 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
血凝单位的计算方法： 以血凝价为29(512x)为例 8U=8×1/512=64x,即将原病毒稀释64倍； 4U=4×1/512=128x,即将原病毒稀释128倍.
（三）血凝抑制试验（HI）
弃50µL
结果判定
二、实验内容
血清样品的采集 抗体效价的测定（HA和HI）实验
HA实验得到NDV效价，配置8U和4U病毒液 ； HI实验得到被检鸡血清的抗体效价。 据HI检测结果，分析鸡群的免疫状态
作业
完成实验报告, 据所得结果说明鸡群的免 疫状态，评价疫苗的免疫效果。
附：实验方法
（一）鸡血清分离
(1)右手持注射器，左手将家禽双翼提起，露出翼静脉的采血位 置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管； (2)用酒精棉球将采血部位消毒。采血时用左手大拇指夹住覆盖 静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻 轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针； (3)针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管,见有少量回血 即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血；
某鸡场免疫新城疫疫苗后，免疫效果须进行评 估，请用免疫学技术检测鸡群抗体效价，据测 定结果评估免疫效果。
鸡群对NDV的免疫状态评价标准
按一定比例抽查（20-30份血清或枚鸡蛋） HI≧24，鸡群有免疫力。 HI ≧26，成年鸡群有免疫力。 HI ≧28，对非典型ND有免疫力 HI效价参差不齐（HI≦23和HI ≧ 212并存），
➢ ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底；
➢ +++约有75％血球发生凝集； ➢ ++约有50％血球发生凝集；
➢ +约有25％血球发生凝集；
➢ －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。
结果判定
以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍 数
鸡群被感染过（疫苗免疫很少出现HI ≧ 212 所有检测的抗体水平HI ≧ 212，说明感染过或感
染正在发生。
一、实验材料
1. 鸡新城疫病毒 (弱毒株Lasota）液 2. 鸡红细胞：用生理盐水配成1%悬液 3. 抗凝剂：3.8%柠檬酸三钠缓冲液 4. 活鸡 5. V型血凝板、微量移液器，微量振荡器等
以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释度作为 判定终点； 以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最高血 清稀释倍数作为该血清的血凝抑制价。
(4)采血完成后，将注射器栓塞向后拉少许，以保证针筒内有足 够的空间析出血清； (5)将注射器放入37℃温箱1-2小时； (6)将注射器放入4℃冰箱2小时以上或过夜,血清即可析出，仍 未析出者，3000转离心10分钟，取上清即为血清。
（二）血凝试验（HA）
源自文库
弃50
1．做标记； 2．加生理盐水； 3. 第1孔加NDV，然后倍比稀释； 4．加红细胞； 5．立即振荡2min，静置20－30min； 6. 观察结果。
作为该病毒的血凝价。 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
将血凝价规定为1个血凝单位（U）。
血凝单位的计算方法： 以血凝价为29(512x)为例 8U=8×1/512=64x,即将原病毒稀释64倍； 4U=4×1/512=128x,即将原病毒稀释128倍.
（三）血凝抑制试验（HI）
弃50µL
结果判定
二、实验内容
血清样品的采集 抗体效价的测定（HA和HI）实验
HA实验得到NDV效价，配置8U和4U病毒液 ； HI实验得到被检鸡血清的抗体效价。 据HI检测结果，分析鸡群的免疫状态
作业
完成实验报告, 据所得结果说明鸡群的免 疫状态，评价疫苗的免疫效果。
附：实验方法
（一）鸡血清分离
(1)右手持注射器，左手将家禽双翼提起，露出翼静脉的采血位 置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管； (2)用酒精棉球将采血部位消毒。采血时用左手大拇指夹住覆盖 静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻 轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针； (3)针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管,见有少量回血 即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血；