实习六 食品中人工合成色素的测定

实习六食品中人工合成色素的测定（一）原理
聚酰胺是一种高分子化合物，又称“尼龙6”，在酸性条件下可与水容性酸性染料牢固结合；在碱性条件下则可解吸色素，用纸层析法或薄层层析法进行分离鉴别后，再与标准比较予以定性、定量。

（二）试剂
1．聚酰胺粉（尼龙6）200目
2．正丁醇
3．无水乙醇
4．1%氨溶液
5．乙醇-氨液（9：1）
6．20%柠檬酸
7．0.1%色素标准贮备液(1mg/ml):精确称取商品色素胭脂红、苋菜红0.1克容于蒸馏水，稀释至100毫升。

8．展开剂（临用现配）正丁醇：无水乙醇：1%氨水（6：2：3）
（三）仪器
9．沙氏漏斗-G3
10．抽滤瓶：500ml
11．100 ml， 500 ml
12．血红蛋白吸管
13．展开缸
14．玻璃水泵
15．带塞刻度比色管：10 ml
16．恒温水浴
17．量筒：25 ml， 50 ml
18．天平
19．吹风机
20．吸管：1 ml
21．白瓷蒸发皿
22．中速层吸滤纸
23．温度计
24．PH试纸
25．玻璃棒
26．滴管
(四)操作方法
1. 样品处理（汽水类样品）：将样品用两个杯子反复倾倒100次除去CO2，精确吸取样品50 ml放入100 ml烧杯中，加热到70℃，备用。

2．吸附去杂质：称取聚酰氨粉1g，加少量水调成糊状后倒入前处理的70℃的样品中，充分搅拌使样液色素全部被吸附，将样液全部移入沙氏-G3漏斗抽滤，用300ml 70℃ PH=4的蒸馏水分多次洗涤沉淀物，至洗液与原蒸馏水PH相同为止（洗涤过程必须充分搅拌，使所用的洗涤液与聚酰氨粉充分接触）。

3. 解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗涤色素，解吸过程时时搅拌直至滤出液无色为止并收集全部解吸液。

4．浓缩: 将色素解吸液置于蒸发皿中在80℃水浴上浓缩至0.5-1ml，转入10ml刻度试管中，用少量50%乙醇洗涤蒸发皿，洗液并入并入刻度试管中。

5纸层析定性:为了判断样品中存在有几种色素以及是什么色素，必须进行纸层析进行鉴定。

经上述浓缩后样品色素溶液于新华中速层析滤纸（8cm*16cm）距底边2cm的基线上点样点样点的直径应不超过2毫米为宜，样点间距离以及左右纸边各距2厘米。

点样量20微升，同时根据样品颜色点上色素标准溶液点作对照。

用展开剂在展开槽展开（展开前层析缸及滤纸先用相应的溶剂系统平衡10分钟后再展开）。

待溶剂前沿到达离起始线12cm处，将滤纸取出于空气中晾干，测量各色素点的R f值，于标准色素R f值对照确定何种色素（以标准色素斑点R f值衡量样品各色素斑点的R f值是否于标准点在同一条直线上，色素的颜色是否完全一致，就可确定样品色素属于何种色素）。

Rf（比移值）=斑点移动距离/溶剂前沿距离
所使用的展开剂有：
1)正丁醇︰无水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3
2)正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4
3)异丁醇︰无水乙醇︰水 = 3︰2︰2
6．纸层析定量：将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入10ml比色管中，并加水稀释至刻度，作比色测定用。

分别吸取0.0 0.1 0.2 0.3 0.4ml胭脂红或苋菜红色素标准液分别置于10ml比色管中，各加水稀释至刻度。

目视比色。

（五）结果计算
X（g/kg，g/L）=A/（m*V2/V1）
式中 A：测定样液中色素的含量（mg）
m：样品质量或体积（g，ml）
V1：样品解吸后总体积（ml）V2：样液点纸体积（ml）。