海南地区718例男性不育患者AZF基因微缺失研究

［实验研究］

目前，全世界不育夫妇约占已婚夫妇的15%，而且有逐年增加的趋势，其中由男方原因引起的不育占一半左右。导致男性不育的众多因素中，约30%是由于染色体畸变或基因突变等遗传学因素引起的精子发生障碍，表现为无精子症和少弱精子症。近几年的研究揭示，男性不育与Y染色体长臂上的生精相关基因AZF的缺失密切相关[1，2]。从分子水平研究精子发生障碍机制对男性不育的发生、诊断及治疗均具有非常重要的意义。

1材料与方法

1.1病例来源不育患者均来自海南医学院附属医院妇产科生殖医学中心门诊病人，年龄20～45岁。经临床检查排除精道梗阻、全身性疾病、后天获得性无精子或少精子引起的不育，常规G显带染色体分析排除染色体结构与数目异常。按WHO精液常规分析标准（《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》第四版），连续3次以上的精液检查，将患者分为无精症228例，严重少精症209例，少弱精子症281例。

1.2检测方法

1.2.1细胞遗传学检查常规外周血淋巴细胞培养，染色体G 带分析，镜下计数30～100个中期分裂相，分析3个以上核型。

1.2.2AZF基因微缺失检测外周血常规酚/氯仿提取DNA，检测DNA浓度和纯度。引物由上海生工生物技术公司合成。采用本中心自主研发的AZF基因微缺失检测试剂，经多重PCR 技术对Y染色体微缺失AZFa区sY81、sY86、sY182；AZFb区sY121、sY124、sY127、sY128、sY130、Sy133、sY134；AZFc区sY239、sY242、sY254、sY255、sY157;AZFd区sY145、sY152、sY153共18个微缺失位点进行扩增。采用100bp的分子量标准，产物经琼脂糖电泳后，用Alphalmager2200凝胶成像系统观察分析条带。

2结果

在718例男性不育患者中，228例特发性无精症患者中有4例缺失，占1.7%，其中AZFb+AZFc+AZFd缺失1例，AZFc+AZFd缺失2例，AZFc缺失1例;209例严重少精子症患者中有17例缺失，占8.1%，其中AZFa+AZFc+AZFd缺失1例，AZFc+AZFd 缺失14例，AZFb+AZFc缺失1例，AZFc缺失1例；其余

图1AZF微缺失检测两组多重PCR结果，从右边开始第3道显示sY153缺失。

海南地区718例男性不育患者AZF基因微缺失研究

毛记龙1，2，金应霞1，马宁1，陈雪银1，麦杨青1，陈竞西1，王梅红1，黎明红1，黄元华1，徐雯1，卢伟英1，李崎1，马燕琳1*

摘要：目的研究Y染色体AZF基因微缺失与男性不育的关系。方法应用多重PCR对718例男性不育患者进行Y染色体AZFa、AZFb、AZFc和AZFd基因的18个位点进行检测。结果228例特发性无精症患者中有4例缺失，占1.7%；209例严重少精子症患者中有17例缺失，占8.1%；其余281例少弱精子症患者中有8例缺失，占2.8%。

结论在男性不育症患者中，Y染色体AZF基因微缺失是男性不育发生的重要原因之一，基因检测可为患者的诊断、治疗及遗传咨询提供理论依据。

关键词：男性不育；Y染色体；AZF基因微缺失

中图分类号：R698＋.2文献标识码：A文章编号：1009-9727（2010）7-846-01

Study on the Microdeletion of AZF gene in718male infertility patients in Hainan.MAO Ji-long，JIN Ying-xia，MA Ning，et al.（1.Affiliate Hospital of Hainan Medical College，Haikou570102，Hainan；2.Guiyang Traditional Chinese Medicine Hopital，Guiyang550002，Guizhou，P.R.China:Corresponding author:MA Yan-lin:Email：mayanlinma@）Abstract：Aim To investigate the corelation of microdeletions of AZF gene with male infertility.Methods The18 sites of AZF genes in718cases were detected with multiplex polymerase chain reaction（PCR）.Results The AZF deletion rate in228azoospermia patients was1.7%（4/228）；the rate of that in severe oligozoospermia patients was8.1%（17/ 209）；that in the rest patients with asthenospermia and oligospermia was 2.8%（8/281）.Conclusion AZF gene deletion is one of the important cause of male infertility with azoospermia and oligospermia.

Key words：Male infertility；Y chromosome；AZF microdeletions

基金项目：海口市科技重点项目：《Y染色体微缺失诊断试剂盒的开发》.

作者单位：1.海南医学院附属医院生殖中心，海南海口570102；2.贵阳中医学院，贵州贵阳550002

作者简介：毛记龙（1984~），男，在读硕士研究生，研究方向为生殖医学。

*通讯作者：Email：mayanlinma@.

（下转第854页）

281例少弱精子症患者中有8例缺失，占2.8%，其中AZFc+ AZFd缺失7例，AZFb缺失1例。AZF微缺失检测结果见图1。3讨论

遗传性因素是引起男性不育的主要因素之一。人类的Y染色体对性别决定和精子发生起着关键作用。Y染色体由长臂和短臂构成，长臂上存在精子发生调控基因家族即无精子症因子AZF。按由近侧至远侧划分为AZFa、AZFb、AZFc三个区域，而在AZFb和AZFc之间还存在AZFd[3，4]。AZF缺失是男性原发不育的重要遗传因素，AZF的片段较小，常规核型分析不易发现其缺失，目前一般通过STSs进行PCR来获取Y染色体微缺失信息。由于AZF的扩增位点比较多，我们把AZFa区sY81、sY86、sY182；AZFb区sY121、sY124、sY127、sY128、sY130、sY133、sY134；AZFc区sY239、sY242、sY254、sY255、sY157；AZFd区sY145、sY152、sY153这18个高发H缺失位点优化组合分为4组进行多重PCR扩增，其试剂的制备，储存和使用按照中试的标准进行，在海医附院生殖中心使用达5年，稳定，简便，可靠。18个位点的检出率高于欧洲男科协会和欧洲分子遗传质控协会（2004）标准推荐的6个位点:SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255[5]。在我们的结果中，AZFb区发现1例仅缺失sY130，1例缺失sY133、sY130、sY121、sY124，却都没有发现SY127及SY134的缺失。在AZFc区缺失患者中发现1例仅缺失sY157，另一例缺失sY242及239，但都没有发现SY254、SY255的缺失。这些在29例缺失中占了14%，这一比率高出了欧洲男科协会的预计值5%。这可能与我们样本的总数不够大有关，但也可能为中国海南人群特有的群体特点。这一现象值得进一步探讨。值得注意的是在本研究对象中（相对封闭的海南人群），无精症患者的AZF微缺失比率相对较低（1.7%），而少弱精子症的AZF微缺失比率相对较高（2.8%）。对于此现象还需进一步大样本的临床研究来证明。近年来，寻求辅助生殖助孕的人群不断增长，而需要采取单精子胞浆内注射技术进行治疗的患者也不断增多。进行AZF检查的显示出越来越重要的意义。完整的AZFa和AZFb区缺失预示着难以有精

子生成的不良预后，即使行附睾穿刺术也无法获得精子[6]，而大部分的AZFc区缺失患者能较成功的通过单精子胞浆内注射技术生育下一代。所有这些对下一代进行风险预测，植入前诊断及针对性的精子预存等生育指导是具有非常深远的意义[7，8]。

参考文献：

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收稿日期：2010-03-19

修回日期：2010-05-09

编辑：崔宜庆

血半暗带区血流灌注及保护这些神经元是急性脑梗塞治疗成功的关键。有作者提倡用颈总动脉内膜中膜厚度作为最强的缺血性卒中预测因素之一[5]。另有观点认为颈动脉IM T的测量可以预测脑卒中等疾病的发生风险，随着IM T的增加．发生风险增加[6]。可见颈动脉内-中膜厚度可以较好的反应动脉粥样硬化的程度。缺血半暗带的血液供应和动脉粥样硬化程度呈负相关，而缺血半暗带血供量的多少，可影响缺血性脑血管病的预后。积极控制减少颈动脉内中膜厚度的各种因素，一方面可降低缺血性心脑血管病的发生危险，另一方面即使发生心脑血管疾病，预后也会相对良好。所以颈动脉内中膜厚度的测量和控制具有重要的临床意义。

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收稿日期：2010-01-19

编辑：杜中华

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