流式细胞仪试剂介绍
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Date kindly suppled by Dr Vincent Shankey, BCI Miami, FL, USA
Flow: Visualization of Signaling in Discrete Cell Populations
Challenges of Cell Signaling: Assay Standardization
200 of 208 New Drugs Are PKIs
The Competition: Western Blot vs Flow Cytometry
Western Blot
Untreated Treated
Flow Cytometry
Red = Un-stimulated Blue = Stimulated
Simplified Workflow, Standardized, Faster
Solastra™ 5-Color Panels – Part Numbers *
A66286 B-Cell Kit
Kappa Lambda CD19 CD5 CD45
CD20
CD10
CD19
CD38
CD45
A66287
10 specimens with five color panels From receipt to first results
PERFORMANCE
08:00
09:00
10:00
11:00
12:00
EFFICIENCY
7 reagent vials
3 hours
Pre-titrated Pre-validated
Operator
Performance
Specimen
Timing
Flexibility Standardization
Temp
Reagents
Multiple Opportunities For Variability in Results
Example of Optimization: Standardized ZAP-70 Assay
IM和A开头的试剂性价比
格最高，法国生产， IMMUTECH品牌，同时有 两个货号的试剂（价格一 致），请采用A开头的货号 订货。 7开头的试剂为cell lab的 科研试剂 (SouthernBiotech,美国SBA 公司生产的试剂， 订货 周期长）
BC公司常用的临床检测试剂
双色试剂
FITC-PE,PE-PC7,FITC-PC5双色标记(可用于所有的BD仪器)
Amber Vial, 24 hrs BCI Vial, 24 hrs
Performance
CD19-ECD
FL2 log CD3-PC5 CD3-PC7
Patented Packaging Protects Against Photo-degradation
荧光染料比较(平均荧光强度)
Q-Prep / ImmunoPrep 试剂系统
PERFORMANCE
08:00
09:00
10:00
11:00
12:00
EFFICIENCY
> 25 reagent vials
4 hours
Re-titration Re-validation
Multiple Opportunities for Process Errors
Multicolor Panels Workflow
Optimized Sample Prep to Yield Best S/N Ratio
(T细胞,Th细胞,Ts细胞,NK细胞,B细胞)
HLA-B27检测试剂盒(正在进行注册)(可以用在BD仪器上)
百度文库
溶血素(更适用于BC的仪器) 破膜剂(对细胞形态和完整性影响最小,性能优于BD的破膜剂) 其它各种荧光素标记的单克隆抗体 (用于白血病免疫分型及其它 一些免疫细胞的检测) (注册证最多) 仪器的调试微球(各种FLOWCHECK)(稳定性非常好)
科研试剂
Cell Signaling Automation iTAG™ Tetramer Technology
Cancer Research Focused On Signaling Pathways
Performance Flexibility Standardization
Illustration courtesy of Dr David Hedley, Princess Margaret Hospital
三色试剂
FITC-PE-PC5, FITC-PE-PC7, FITC-APC-PC7三色标记(可以用于所有的 BD仪器) FITC-PE-ECD（只能用于BC仪器）
(T细胞,Th细胞,Ts细胞,NK细胞,B细胞等)
四色试剂
FITC-PE-ECD-PC5四色标记(只能用于BC仪器,BD的Canto II/Aria系列)
Finished Tandem Dye Three Lot Comparison of PC7
250
Performance
Fluorescence Intensity
200
150
Lot # 3021-101 Lot # 1828-47 Lot # 1828-95
100
50
0 550 600
Emission Wavelength (nm)
Performance Standardization
Refold
Tandem Video
Patented Process Unique To Beckman Coulter
Performance Matters: Patented Manufacturing Process
Purification
Performance
250 150 100 75
Flexibility
50
pSTAT5
MAPK - AF488
Standardization
• Lysates • Homogeneous data • Qualitative • Slow
Identifiable cells Multiple populations Quantitative Fast
CD45-FITC vs SS
FS vs SS
VIABLE CD34+
SS SS SS SS
PERFORMANCE
CD45-FITC
CD34-PE
CD45-FITC
FS
CD45-FITC vs CD34-PE
FS vs SS
Time vs FlowCount
7-AAD vs SS
CD34-PE
FlowCount
如何读懂荧光标记的单克隆抗体
Mouse anti-Human CD3-FITC Clone:UCHT1 Isotype:IgG1 Mouse Mouse: 抗体来源----小鼠 Anti-Human: 检测对象为人类细胞 CD3-FITC: 检测CD3的抗原, 该抗体为FITC荧光素标记 UCHT1: 抗体的Clone 株 IgG1 Mouse: 为抗体的免疫球蛋白亚型,所以选用的阴
HIV Reagent
PLG CD4 : CD45/CD4
TriChrome: CD45/CD4/CD3 TetraChrome:CD45/CD4/CD8/CD3
FlowCount: 单平台进行绝对计数
以上三种试剂均可进行5天陈血检测
造血干细胞检测(CD34)
CD45-FITC vs SS
CD34-PE vs SS
CD8-FITC
CD8-PE
CD8-ECD
CD8-PC5
CD8-PerCP
CD8-APC
PerCP < APC < FITC < ECD < PC5 < PE
Fluorescence Spectrum Viewer
Fluorescence Spectrum Viewer
EGFP
Fluorescence Spectrum Viewer
650
700
750
800
Standardization
Unpurified PC7 Discarded Material Purified PC7
Reproducible Data Over Time
Performance Matters: Vendor Comparison
Beckman Coulter
T-Cell Kit
CD2
CD56
CD7
CD5
CD45
CD8
CD4
CD3
CD45
EFFICIENCY
A66288
Myeloid Kit
CD15
CD11b
CD16
CD14
CD45
HLA-DR CD56
CD34
CD117
CD45
CD7
CD13
CD34
CD33
CD45
* Not Available in the USA
BC公司常用的临床检测试剂优点
各种荧光试剂荧光信号强度高，信噪比好 试剂的SFDA注册证最多 破膜剂(对细胞形态和完整性影响最小,性能优 于BD的破膜剂) 进行干细胞检测的试剂(CD45/CD34)及内参微球 有SFDA注册证，更具准确性，对各地区脐血 库及骨髓移植的干细胞检测尤为重要 所有的质控血都有SFDA注册证，国家卫生部 临检中心每年发放的流式细胞质控血都来自贝 克曼库尔特公司
FITC和EGFP能否一起使用
XL -单激光四色的荧光光 谱示意图
FC500-单激光五色的荧光 光谱示意图
常用荧光素激发、发射、滤光片波长
Qdots-纳米微晶体：未来的荧光素
Qdots 605的激发波长和发射波长（VERY SHARP）
同一种光源激发一种晶体发射多种荧光
常用荧光染料组合
性对照应为Mouse IgG1-FITC
如何看懂试剂的说明
临床试剂
RD1=PE
标 记 的 荧 光 素
试 剂 包 装 规 格 大 小
如何看懂试剂的说明
科研试剂
科研试剂，以mg/g表示试剂包装大小，需 要做滴度实验，摸索最佳实验所需试剂量
如何看懂试剂的说明－试剂的货号识别
6开头的试剂为美国库尔 特生产
CD3 ECD CD3 PC5
CD3 PC7
Performance
Vendor ‘X’
Vendor ‘Y’
Clear Resolution of Cellular Sub-sets
Performance Matters: Impact Of Photo-degradation
Control, t0
流式细胞仪试剂介绍
五光十色的荧光素
单分子荧光素 耦合的复合荧光素分子（Tandem Dye) 新型的荧光素样荧光物质—Qdots
常用激光和荧光素搭配
Blue FITC PE PerCP PerCP-Cy5.5 PE-Texas Red(ECD) PE-Cy5 PE-Cy7 PI EGFP
FITC＋PE：最常用的双色组合 FITC＋PE＋PE-Cy5：最常用的三色组合，进行多色 荧光染色时荧光光谱重叠补偿很小 FITC＋PE＋PerCP+APC：BD最常用的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5:贝克曼库尔特公司最常用 的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5+PE-Cy7：贝克曼贝克曼 库尔特公司最常用的五色组合，而且PE-Cy7与FITC 、PE、PE-Cy5标记的抗体一同使用时的荧光补偿小 PE-Cy5可与FITC、PE同时使用，但不能与APC同时 使用，二者之间荧光干扰太大
SS
CD45-FITC
FS
Time
SS
A-AAD
Data kindly supplied by M Keaney, London Health Sciences Centre, Canada
白血病／淋巴瘤免疫分型
10 specimens with single color panels From receipt to first results
Red APC APC-Cy7 UV DAPI Hoechst
Innovation – First Commercial Tandem Conjugates
APC Alexafluor™700 APC Alexafluor™750 PE-Texas Red PE-Cy7™
1985
1990
1995
2000
2005
2010
PE-Cy5™
PE-Cy5.5™
Multicolor Flow Impossible Without Tandems
Beckman Coulter - Patented Conjugation Process
Native State
Unfold
Couple Acceptor Dye
Flow: Visualization of Signaling in Discrete Cell Populations
Challenges of Cell Signaling: Assay Standardization
200 of 208 New Drugs Are PKIs
The Competition: Western Blot vs Flow Cytometry
Western Blot
Untreated Treated
Flow Cytometry
Red = Un-stimulated Blue = Stimulated
Simplified Workflow, Standardized, Faster
Solastra™ 5-Color Panels – Part Numbers *
A66286 B-Cell Kit
Kappa Lambda CD19 CD5 CD45
CD20
CD10
CD19
CD38
CD45
A66287
10 specimens with five color panels From receipt to first results
PERFORMANCE
08:00
09:00
10:00
11:00
12:00
EFFICIENCY
7 reagent vials
3 hours
Pre-titrated Pre-validated
Operator
Performance
Specimen
Timing
Flexibility Standardization
Temp
Reagents
Multiple Opportunities For Variability in Results
Example of Optimization: Standardized ZAP-70 Assay
IM和A开头的试剂性价比
格最高，法国生产， IMMUTECH品牌，同时有 两个货号的试剂（价格一 致），请采用A开头的货号 订货。 7开头的试剂为cell lab的 科研试剂 (SouthernBiotech,美国SBA 公司生产的试剂， 订货 周期长）
BC公司常用的临床检测试剂
双色试剂
FITC-PE,PE-PC7,FITC-PC5双色标记(可用于所有的BD仪器)
Amber Vial, 24 hrs BCI Vial, 24 hrs
Performance
CD19-ECD
FL2 log CD3-PC5 CD3-PC7
Patented Packaging Protects Against Photo-degradation
荧光染料比较(平均荧光强度)
Q-Prep / ImmunoPrep 试剂系统
PERFORMANCE
08:00
09:00
10:00
11:00
12:00
EFFICIENCY
> 25 reagent vials
4 hours
Re-titration Re-validation
Multiple Opportunities for Process Errors
Multicolor Panels Workflow
Optimized Sample Prep to Yield Best S/N Ratio
(T细胞,Th细胞,Ts细胞,NK细胞,B细胞)
HLA-B27检测试剂盒(正在进行注册)(可以用在BD仪器上)
百度文库
溶血素(更适用于BC的仪器) 破膜剂(对细胞形态和完整性影响最小,性能优于BD的破膜剂) 其它各种荧光素标记的单克隆抗体 (用于白血病免疫分型及其它 一些免疫细胞的检测) (注册证最多) 仪器的调试微球(各种FLOWCHECK)(稳定性非常好)
科研试剂
Cell Signaling Automation iTAG™ Tetramer Technology
Cancer Research Focused On Signaling Pathways
Performance Flexibility Standardization
Illustration courtesy of Dr David Hedley, Princess Margaret Hospital
三色试剂
FITC-PE-PC5, FITC-PE-PC7, FITC-APC-PC7三色标记(可以用于所有的 BD仪器) FITC-PE-ECD（只能用于BC仪器）
(T细胞,Th细胞,Ts细胞,NK细胞,B细胞等)
四色试剂
FITC-PE-ECD-PC5四色标记(只能用于BC仪器,BD的Canto II/Aria系列)
Finished Tandem Dye Three Lot Comparison of PC7
250
Performance
Fluorescence Intensity
200
150
Lot # 3021-101 Lot # 1828-47 Lot # 1828-95
100
50
0 550 600
Emission Wavelength (nm)
Performance Standardization
Refold
Tandem Video
Patented Process Unique To Beckman Coulter
Performance Matters: Patented Manufacturing Process
Purification
Performance
250 150 100 75
Flexibility
50
pSTAT5
MAPK - AF488
Standardization
• Lysates • Homogeneous data • Qualitative • Slow
Identifiable cells Multiple populations Quantitative Fast
CD45-FITC vs SS
FS vs SS
VIABLE CD34+
SS SS SS SS
PERFORMANCE
CD45-FITC
CD34-PE
CD45-FITC
FS
CD45-FITC vs CD34-PE
FS vs SS
Time vs FlowCount
7-AAD vs SS
CD34-PE
FlowCount
如何读懂荧光标记的单克隆抗体
Mouse anti-Human CD3-FITC Clone:UCHT1 Isotype:IgG1 Mouse Mouse: 抗体来源----小鼠 Anti-Human: 检测对象为人类细胞 CD3-FITC: 检测CD3的抗原, 该抗体为FITC荧光素标记 UCHT1: 抗体的Clone 株 IgG1 Mouse: 为抗体的免疫球蛋白亚型,所以选用的阴
HIV Reagent
PLG CD4 : CD45/CD4
TriChrome: CD45/CD4/CD3 TetraChrome:CD45/CD4/CD8/CD3
FlowCount: 单平台进行绝对计数
以上三种试剂均可进行5天陈血检测
造血干细胞检测(CD34)
CD45-FITC vs SS
CD34-PE vs SS
CD8-FITC
CD8-PE
CD8-ECD
CD8-PC5
CD8-PerCP
CD8-APC
PerCP < APC < FITC < ECD < PC5 < PE
Fluorescence Spectrum Viewer
Fluorescence Spectrum Viewer
EGFP
Fluorescence Spectrum Viewer
650
700
750
800
Standardization
Unpurified PC7 Discarded Material Purified PC7
Reproducible Data Over Time
Performance Matters: Vendor Comparison
Beckman Coulter
T-Cell Kit
CD2
CD56
CD7
CD5
CD45
CD8
CD4
CD3
CD45
EFFICIENCY
A66288
Myeloid Kit
CD15
CD11b
CD16
CD14
CD45
HLA-DR CD56
CD34
CD117
CD45
CD7
CD13
CD34
CD33
CD45
* Not Available in the USA
BC公司常用的临床检测试剂优点
各种荧光试剂荧光信号强度高，信噪比好 试剂的SFDA注册证最多 破膜剂(对细胞形态和完整性影响最小,性能优 于BD的破膜剂) 进行干细胞检测的试剂(CD45/CD34)及内参微球 有SFDA注册证，更具准确性，对各地区脐血 库及骨髓移植的干细胞检测尤为重要 所有的质控血都有SFDA注册证，国家卫生部 临检中心每年发放的流式细胞质控血都来自贝 克曼库尔特公司
FITC和EGFP能否一起使用
XL -单激光四色的荧光光 谱示意图
FC500-单激光五色的荧光 光谱示意图
常用荧光素激发、发射、滤光片波长
Qdots-纳米微晶体：未来的荧光素
Qdots 605的激发波长和发射波长（VERY SHARP）
同一种光源激发一种晶体发射多种荧光
常用荧光染料组合
性对照应为Mouse IgG1-FITC
如何看懂试剂的说明
临床试剂
RD1=PE
标 记 的 荧 光 素
试 剂 包 装 规 格 大 小
如何看懂试剂的说明
科研试剂
科研试剂，以mg/g表示试剂包装大小，需 要做滴度实验，摸索最佳实验所需试剂量
如何看懂试剂的说明－试剂的货号识别
6开头的试剂为美国库尔 特生产
CD3 ECD CD3 PC5
CD3 PC7
Performance
Vendor ‘X’
Vendor ‘Y’
Clear Resolution of Cellular Sub-sets
Performance Matters: Impact Of Photo-degradation
Control, t0
流式细胞仪试剂介绍
五光十色的荧光素
单分子荧光素 耦合的复合荧光素分子（Tandem Dye) 新型的荧光素样荧光物质—Qdots
常用激光和荧光素搭配
Blue FITC PE PerCP PerCP-Cy5.5 PE-Texas Red(ECD) PE-Cy5 PE-Cy7 PI EGFP
FITC＋PE：最常用的双色组合 FITC＋PE＋PE-Cy5：最常用的三色组合，进行多色 荧光染色时荧光光谱重叠补偿很小 FITC＋PE＋PerCP+APC：BD最常用的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5:贝克曼库尔特公司最常用 的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5+PE-Cy7：贝克曼贝克曼 库尔特公司最常用的五色组合，而且PE-Cy7与FITC 、PE、PE-Cy5标记的抗体一同使用时的荧光补偿小 PE-Cy5可与FITC、PE同时使用，但不能与APC同时 使用，二者之间荧光干扰太大
SS
CD45-FITC
FS
Time
SS
A-AAD
Data kindly supplied by M Keaney, London Health Sciences Centre, Canada
白血病／淋巴瘤免疫分型
10 specimens with single color panels From receipt to first results
Red APC APC-Cy7 UV DAPI Hoechst
Innovation – First Commercial Tandem Conjugates
APC Alexafluor™700 APC Alexafluor™750 PE-Texas Red PE-Cy7™
1985
1990
1995
2000
2005
2010
PE-Cy5™
PE-Cy5.5™
Multicolor Flow Impossible Without Tandems
Beckman Coulter - Patented Conjugation Process
Native State
Unfold
Couple Acceptor Dye