海水鱼病多联抗独特型抗体

海水鱼病多联抗独特型抗体

疫苗

西安斯凯达生物制品有限公司

2016.6

产品简介

改革开放以来，我国海水养殖渔业发展迅速，至今海水鱼每年养殖量约6 0亿尾，随着养殖量扩大，鱼病也逐年严重。每年因病害造成损失上百亿元。

国内对海水养殖病防治主要依靠化学药和抗生素，这些药物过多使用，造成耐药和药物残留及毒副作用，疫苗已成为海水养殖疾病防治领域研究与开发的主流产品。至今国内未见商品化的海水鱼疫苗问世，也未见国外疫苗引入的报道，为此我们和第四军医大学合作，在海洋863和现代农业863计划基金资助下，对海水鱼病的防治进行研究，先后研究出鱼病多联诊断试剂，鱼病多联单克隆抗体治疗制剂和鱼病多联抗独特型抗体疫苗。其中抗独特型抗体疫苗2004年获国家发明专利证书，2006年获国家农业部一类新兽药证书。

海水鱼病多联抗独特型抗体疫苗是由三种海水鱼重要病菌：溶藻弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华菌的抗独特型抗体混合而成的海水鱼病多联抗独特型单克隆抗体疫苗，用以接种免疫养殖海水鱼，以预防养殖海水鱼这三种重要流行病的爆发。

技术原理

免疫学界公认，抗体和抗原的结合位称为独特位，认为抗体的独特位和与其进行免疫结合的抗原表位，其空间构形是互补的，所以称独特位为抗原表位的内影像。如果用抗体再去接种免疫机体时，抗体的独特位能刺激机体产生抗独特位的抗体，这种抗体称为抗独特型抗体。

抗独特型抗体的结合位点的空间结构和独特位是互补的，而和原来的抗原表位的空间结构是相类似的，它具有抗原表位的功能，能刺激机体产生抗原表位的抗体。如果抗原是病原体，病原体的抗独特型抗体就能取代病原体起到疫苗的作用。 技术原理 免疫小鼠 免疫小鼠 免疫小鼠 抗原表位 抗独特型抗体

独特位 抗体 抗体 抗独特型抗体产生原理

抗独特型抗体研制技术路线

抗独特型抗体研制技术路线

1. 病原体免疫小鼠

2. 取高免小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合

3. 杂交瘤细胞的阳性克隆筛选

4. 筛选对病原体具有免疫中和性抗体

5. 用该抗体再免疫小鼠

6. 取高免小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合

7. 杂交瘤细胞的阳性克隆筛选

8. 克隆化培养后，按抗独特型抗体的指标筛选抗独特型抗体

9. 将所获得稳定分泌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株保存于液氮中

工业化生产工艺流程

1 工业化生产工艺流程

1. 杂交瘤细胞复苏

2. 在CO2孵箱内，进行小培养瓶、大培养瓶扩增培养

3. 转移至小容积生物反应器扩增培养（5~10升）

4. 转移至中等容积生物反应器扩增培养（50~100升）

5. 转移至大容积生物反应器扩增培养（500~1000升）

6. 培养物离心取上清，加入适量稳定剂

7. 分装、冻干，即为抗独特型抗体疫苗

8. 质检合格后，入成品库。

创新内容与创新水平

1.国内外现有的海水鱼病疫苗一般都是灭活疫苗或者是减毒活疫苗。这

两种疫苗如果处理不当均容易产生毒副作用，因为细菌都有内毒素和外毒素，灭活或减毒方法很难除去病菌的内外毒素，所以常常会使接种动物产生强烈的应激反应，甚至毒死接种动物；而生产该两种疫苗，首先要大量扩增繁殖毒株，如果生产过程中产生泄露，就会造成环境污染损害人类。

我们在国内首次成功研制海水鱼病抗独特型抗体疫苗，能取代病原体起到疫苗的作用，但不含有病原体有毒成分，对接种动物无任何毒副作用，是一种无任何毒副作用，安全有效的疫苗。工业化生产的过程是使用生物反应器对产生抗独特性抗体杂交瘤细胞大量扩增繁殖，并大量分泌抗独特性抗体的过程。杂交瘤细胞是哺乳动物细胞，在自然环境中不能存活，不会污染环境，也不会传染人类。单抗生产过程耗能少，不排出任何废气、废水，无污染，是节能环保的。

2. 在我国用使用生物反应器生产人用单抗制品已有先例，但在兽用行业还未见报道。我们在国内首次建立了生物反应器生产兽用单克隆抗体的GMP生产线，建立了稳定高效的生产工艺流程。

1.我国珠江水产研究所研制的草鱼出血病灭活疫苗2014年获得

注册批文，华东理工大学研制的海水鱼迟缓爱德华菌活疫苗2016

年获得一类新药证书。但至今未见抗独特型抗体疫苗报道，本产品已拿到国家发明专利和一类新兽药证书，所以它是国内首创，具有国内领先水平。

2.在国际上已有海水鱼病灭活疫苗和减毒疫苗的商品流通，但

也未见海水鱼病抗独特型抗体疫苗的报道，该疫苗也属于国际首创，具有国际先进水平。

技术成熟度、可靠性、稳定性

1. 该疫苗的核心技术是建立了三株能稳定分泌三种重要海水鱼病菌即溶藻弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株，该三株细胞株经多次传代其核形是稳定的，生长是稳定的，复苏后很快可达到对数生长期。细胞株所分泌的抗独特型单克隆抗体的浓度稳定在200微克/毫升以上；效价稳定在10-2~10-3。说明三个细胞株各种特性很稳定。

2. 该疫苗经过生物反应器工业化生产，各株疫苗已生产多批，每批产品抗体浓度都保持在200微克/毫升以上，说明我们已建立了稳定的用生物反应器工业化生产疫苗的工艺流程。

3.疫苗已经过多批安全及效力试验。

在安全试验中，海水鱼腹腔注射10倍单剂量疫苗，观察一个月未见接种鱼异常死亡，也未见异常反应，说明疫苗对海鱼是安全的；

多批效力实验显示，注射型抗独特型抗体疫苗对海鱼的保护率为70~80%；浸泡型抗独特型抗体疫苗对海鱼的保护率为 50~60 %，说明疫苗对海鱼有较好的保护性。

市场

1 产品市场准入情况

海水鱼病多联抗独特型抗体疫苗为西安斯凯达生物制品有限公司独家占有，2009年公司开始着手建设5条疫苗生产线，其中有一条是用生物反应器生产鱼用抗独特型抗体疫苗的生产线。5条生产线2012年通过国家农业部药监局GMP静态验收，2013年通过GMP动态验收。5条疫苗生产线通过GMP验收后，目前公司正在积极组织各条生产线产品注册批文的申报。该疫苗产品预计今年年底前能拿到注册批文。