高速逆流色谱法.ppt
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两种基本模式 ➢ 流体静力学平衡系统
• 洗脱速度太慢，一般需要两天或更长时间。
➢ 流体动力学平衡系统
三、仪器结构
高速逆流色谱的仪器流程
柱：长的软管(如聚四氟乙烯管)绕制成 载体：无
固定相：液体。用某一种有机／水两相溶剂体系或双水 和溶剂体系的上层或下层作为色谱过程的固定相，用离 心力场来支撑住柱内的液态相。
• 溶剂应该进行分层实验，实验结果决定流速和洗 脱方式 • 样品要溶解于流动相或固定相之中
五、高速逆流色谱的应用
• 天然药物的分离和分析 • 氨基酸、激素、嘌呤、抗生素等分离分析 • 蛋白质、细胞至微生物的分离等
黄连生物碱Hale Waihona Puke Baidu分离
第9章 高速逆流色谱法
一、概述
• Ito，70年代提出，80年代提出CCC，一种液液 色谱分离技术
• 逆流分配→液滴逆流色谱→高速逆流色谱
• 参考书
1.《逆流色谱技术》张天佑，北京科学技术出版社， 1991年
2.《高速逆流色谱分离技术与应用》曹学丽，化学工业 出版社，2009年
二、分离原理
• 连续液液萃取过程，固定相和流动相均为液体 • 问题是：如何在流动相流动时使固定相不动？
流动相：若用溶剂体系中的另一层作为流动相，带着混 合样品由泵的压力推入分离管柱，样品就会穿过两个液 相对流的整个管柱空间。
分离：溶剂萃取过程成千上万次地、高效地、自动连续 地予以完成。各个组分也就会按其在两相中的分配系数 分离开来。
四、方法特点
1． 固定相、流动相均为液体，完全排除了载体对样品组分的吸 附、玷染、变性、失活等不良影响，能避免不可逆吸附造成的色 谱峰拖尾现象，实现高回收。 2．分离柱容积可大， 没有填料，柱内空间均为有效空间。因此， 样品负载量较大，制备量可从毫克到克量级。 3． 逆流色谱不用填料，分离过程不是淋洗或洗脱过程，而是对 流穿透过程。溶剂用量少，成本低。
4. 逆流色谱的分离效率比不上气相色谱和高效液相色谱等技术， 不宜进行复杂混合物的全分析。
5. 适合用于分离纯化，预处理条件宽松，回收率高，制备量大。
四、高速逆流色谱的溶剂选择
• 溶剂体系的选择原则
• 不造成样品的分解或变性 • 足够高的样品溶解度 • 样品在系统中有合适的分配系数 • 固定相能实现足够高的保留
• 洗脱速度太慢，一般需要两天或更长时间。
➢ 流体动力学平衡系统
三、仪器结构
高速逆流色谱的仪器流程
柱：长的软管(如聚四氟乙烯管)绕制成 载体：无
固定相：液体。用某一种有机／水两相溶剂体系或双水 和溶剂体系的上层或下层作为色谱过程的固定相，用离 心力场来支撑住柱内的液态相。
• 溶剂应该进行分层实验，实验结果决定流速和洗 脱方式 • 样品要溶解于流动相或固定相之中
五、高速逆流色谱的应用
• 天然药物的分离和分析 • 氨基酸、激素、嘌呤、抗生素等分离分析 • 蛋白质、细胞至微生物的分离等
黄连生物碱Hale Waihona Puke Baidu分离
第9章 高速逆流色谱法
一、概述
• Ito，70年代提出，80年代提出CCC，一种液液 色谱分离技术
• 逆流分配→液滴逆流色谱→高速逆流色谱
• 参考书
1.《逆流色谱技术》张天佑，北京科学技术出版社， 1991年
2.《高速逆流色谱分离技术与应用》曹学丽，化学工业 出版社，2009年
二、分离原理
• 连续液液萃取过程，固定相和流动相均为液体 • 问题是：如何在流动相流动时使固定相不动？
流动相：若用溶剂体系中的另一层作为流动相，带着混 合样品由泵的压力推入分离管柱，样品就会穿过两个液 相对流的整个管柱空间。
分离：溶剂萃取过程成千上万次地、高效地、自动连续 地予以完成。各个组分也就会按其在两相中的分配系数 分离开来。
四、方法特点
1． 固定相、流动相均为液体，完全排除了载体对样品组分的吸 附、玷染、变性、失活等不良影响，能避免不可逆吸附造成的色 谱峰拖尾现象，实现高回收。 2．分离柱容积可大， 没有填料，柱内空间均为有效空间。因此， 样品负载量较大，制备量可从毫克到克量级。 3． 逆流色谱不用填料，分离过程不是淋洗或洗脱过程，而是对 流穿透过程。溶剂用量少，成本低。
4. 逆流色谱的分离效率比不上气相色谱和高效液相色谱等技术， 不宜进行复杂混合物的全分析。
5. 适合用于分离纯化，预处理条件宽松，回收率高，制备量大。
四、高速逆流色谱的溶剂选择
• 溶剂体系的选择原则
• 不造成样品的分解或变性 • 足够高的样品溶解度 • 样品在系统中有合适的分配系数 • 固定相能实现足够高的保留