脂质体介导转染方法

脂质介导的短暂表达

实验材料

哺乳动物细胞

试剂、试剂

质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM

盒

仪器、耗材

培养皿培养箱聚苯乙烯管

实验步骤

1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中

培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%

汇片，将所有数量扩大8倍）

2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下：稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中，

在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温下温育5~ 10 min，

使DNA与阳离子脂质体结合。

3. 吸去DMEM-SF培养液，用1 ml 的完全DMEM-SF洗1次，吸去DMEM-SF。对毎

个35 mm 孔中，直接在细胞上加1 ml DNA/脂质体复合物。在37℃培养箱中温育3~5 h。

4. 往每孔细抱中加入1 ml 的DMEM-20完全培养液，在37℃培养箱中继续温育24~48

h。

5. 吸去完全DMEM/DNA/脂质体复合物，毎孔加入2 ml 新的DMEM-10完全培养液，

继续搵育24~48 h。

6. 收集细胞：用细胞刮于刮下细胞，或胰蛋白酶消化或冻融裂解细胞。进行适当的表

达分析。

脂质体进行稳定表达