葡萄皮中多酚物质的提取及总酚含量的测定

实验方案

1材料和方法

1.1原料与试剂

葡萄皮、甲醇、乙醇、KH2 PO4 、Na2HPO4 、FeSO4 、酒石酸钾钠、没食子酸等均为国产分析纯试剂。

1.2主要仪器

722型分光光度计,电子天平，恒温水浴锅、粉碎机、减压抽滤机

1.3 试验方法

1.3.1 提取工艺

原料预处理→溶剂浸泡→回流浸提→精密滤纸过滤→分离过滤液→

旋转蒸发脱除溶剂→烘干

1.3.2 操作要点

(1) 原料的预处理:将葡萄皮自然晾干,粉碎过40目筛,避光保存。

(2) 浸提溶剂的选择: 称取葡萄皮粉末1g(准确至01000 1g) ,分别加入蒸馏水、体积分数60%乙醇、体积分数60%甲醇、体积分数95%乙醇、体积分数95%甲醇,在30℃水浴浸提1h ,趁热减压抽滤，定容至25 mL。吸取1 mL 显色测定吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(3) 浸提单因素试验:对可能影响葡萄皮多酚得率的几个因素(浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度)分别作单因素试验,测定提取液的吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(4) 最佳浸提条件的选择: 以浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度为因素, 选择L9 (34) 正交表进行四因素三水平试验,各处理重复3 次,并进行方差分析。

1.3.3 总酚含量的测定

1.3.3.1 样品吸光度的测定

准确吸取1mL 试液,转移至25mL 容量瓶中,加蒸馏水4mL 和酒石酸亚铁溶液5mL ,充分混合,再加pH7.5的缓冲溶液至刻度,用10mm 比色杯,在波长540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测吸光度A 。

1.3.3.2 标准曲线的制作

准确称取没食子酸标准样品0.15 g ,加蒸馏水溶解并移入100mL 容量瓶中定容,在6只100 mL 容量瓶中分别加入510 g/ L 没食子酸标准样品0、1、2、3、5、10 mL ,加入蒸馏水定容至100 mL ,各吸取1mL ,同1.3.3.1方法测定,绘制标准曲线。

1.3.3.3 结果计算

葡萄皮总酚含量： w = CV/m

式中:

w ：多酚含量(mg/ g);

C：,葡萄皮多酚质量浓度(mg/mL);

V ：提取液的体积(mL);

m：,葡萄皮质量(g)。