实验二 食品中致病菌的检测

实验二食品中致病菌的检测

一、实验目的

1.掌握引起食物中毒的常见病原菌；

2.熟悉金黄色葡萄球菌的检测方法。

二、器材试剂

材料：血平板、甘露醇管、血浆、革兰染液等

三、检验程序

见实验指导P371

四、检验方法

1.样品的采取和送检

（1）散装或大型包装的乳品检样：用灭菌刀、杓取样。在移采另一件样品前，应将用过的刀、杓清洗灭菌。采样时应注意不同的部位，使样品有代表性。样品放入灭菌容器内，及时送检。

（2）小型包装的乳品检样：应采取整件包装，奶粉1瓶或1包。采样时应注意包装的完整性。

（3）成批产品质量的检样：采样量一般以1%的比率抽取，应注意代表性，不足千件者抽取1件。

2.检样处理

（1）灌（瓶）装乳粉：将灌或瓶表面先用温水洗清，再用点燃的酒精棉球消毒灌或瓶的上表面，然后用灭菌的开罐器打开灌（瓶）面，以无菌手续称取25g检样，放入装有玻璃珠的三角烧瓶内，然后徐徐加入225ml温热的灭菌生理盐水，（先加入少许使乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结块），震摇均匀，使充分溶解后即为1：10稀释液。

（2）袋装乳粉：可用75%的酒精棉球擦拭消毒袋口后，以无菌手续开封取样。以后操作同灌（瓶）装乳粉。

3.増菌培养

用无菌吸管吸取上述稀释液5ml加入7.5%NaCL肉汤，置37℃温箱培养24h。在肉汤中呈浑浊生长。

4.分离培养

直接取可疑奶粉或増菌培养物划线接种至血平板，37℃培养24h。取可疑菌落作革兰染色镜检。根据形态染色性，作进一步鉴定。

5.血浆凝固酶试验（玻片法）

血浆凝固酶试验是鉴定金葡菌的主要试验。金葡菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌的表面，产生凝固。凝固酶可分为两种，一种是与细胞壁结合的凝固酶，可用玻片法测定；另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，可用试管法测出。

玻片法：取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，分别滴加新鲜人或兔血浆及生理盐水各一滴，挑取待检菌的菌落，分别与血浆和生理盐水混合，立即观察结果。

6.甘露醇发酵试验

取斜面上菌苔接种于甘露醇管中，再覆盖无菌石蜡约5mm高，37℃培养，连续观察4天，报告结果。

7.脱氧核糖核酸酶试验（平板法）

取融化的甲苯胺蓝核酸琼脂3ml铺于洁净载玻片上，凝固后打上4-8个直径为2mm的孔，每孔滴加经沸水浴处理过的细菌培养物一滴，置37℃温箱3h，试验的同时应设对照。

8.肠毒素测定（略）

五、实验结果

1.革兰染色形态：

2.血浆凝固酶试验：

3.甘露醇发酵试验：

4.脱氧核糖核酸酶试验：

六、注意事项