药物分析 第二章 药物的鉴别试验

Na+
K+
焰色反应
焰色反应
鲜黄色（实例见⑧）
紫色（实例见⑧）
Ca2+
Ba2+
焰色反应
焰色反应
砖红色
黄绿色
Li+
NH4+
焰色反应
NaOH 石 蕊试液
光谱主要谱线670nm
NH4++OH-→NH3↑+H2O
胭脂红色
有刺鼻气味，湿石蕊试 纸变兰
有机氟化物
样品经氧瓶燃烧法进行有机破坏后， 用水和碱氢氧化钠溶液吸收为无机氟 化物，与茜素氟蓝和硝酸亚铈在 PH=4.3溶液中形成蓝紫色络合物。
4.气体生成反应鉴别法
（1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以 及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热， 产生氨（胺）气。 （2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后， 加热，发生硫化氢气体。
（3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色 碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水 解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。
反应原理
OH OH CH2N O
O OH O CH2N O CH2COO CH2COO Ce F OH
O
F
PH
+
CH2COOH CH2COOH
+ Ce
3+
FeCl3 反应
COONa 7 3FeCl3 2OH中性 溶液
COO Fe3(OH)2 OOC
6
7NaCl
2Cl-
碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）
加稀HCl，沉淀分解，生成游离
紫外光谱鉴别法
• (1) • (2) • (3)
λ
λ
最大吸收波长和最小吸收波长 - A -吸收系数
λ
• (4) λ - A1/A2 • (5) 化学处理后测定产物的吸光度值
不同国家测定方法略有不同
• USP(32) 采用对照品法,把样品与对照品按 同法处理,在200-400nm波长范围扫描，要求 相同波长处有最大吸收，最小吸收，相同的 吸收系数，或吸收比在规定的限度内。 • JP(15)与ChP(2010)的UV测定方法相似。
性 状--- 物理常数
比旋度：在一定波长 (589.3nm) 与 温度(20℃)下，偏振光透过长1dm且 每 1ml 中含有旋光性物质 1g 的溶液 时测得的旋光度。用 表示。

20 D


L C

20 D


Ld
• 例如：维生素C的比旋度测定： 取本品，精密称定，加水溶解，并定 量稀释成C为0.10g/ml的溶液，依法 测定旋光度为+2.05°至2.15°，求 =？
标准红外光谱的一致性，尤其是
指纹一致性。
• ChP和BP均采用标准图谱法 例中国药典对某药物的鉴别：本品的红外 吸收图谱应与对照的图谱（光谱集XX图） 一致。 USP采用对照品法 例阿莫西林的鉴别试验：取本品，经干燥 后用溴化钾压片法测定，所得的图谱与 USP阿莫西林参考标准品图谱一致。
• JP采用规定条件下测定一定波数处的 特征吸收峰 例氯羟去甲安定的测定：取本品，干 燥后用KBr压片法测定，其红外吸收 光谱图中3440cm-1,3220cm1,1695cm-1,1614cm-1,1324cm1,1132cm-1,828cm-1处有吸收。
试样制备方法： 1、压片法----用于固体 2、糊法----用于固体 3、膜法----用于液体 4、溶液法----用于液体 制剂的鉴别（2005版增加）
• （1）辅料无干扰，与原料药标准图 谱对照 • （2）辅料干扰不能完全消除，用指 纹区特征峰鉴别
药物鉴别方法新动向
• 仪器用于药物鉴别的数量大大增加，尤 其是红外和HPLC法。 • 英美采用仪器鉴别法和化学鉴别法的比 例为2:1。 • 制剂广泛采用IR法鉴别，采用提取分离 后再压片绘谱。 • 鉴别条目简练，选择专属的方法鉴别， 平均每个品种收2条左右。
紫外光谱鉴别法
对比吸收光谱 特征参数
比较吸收度比 值一致性 对比吸收光谱 一致性
• 紫外法 在指定溶剂中测定2-3个特定波长处的吸收度比 值（峰值与峰值比，峰谷与峰谷比），以提 高专属性。 例 地蒽酚的鉴别 取含量测定下的溶液，照分光光度法测定，于 240-400nm的波长范围测定吸收度,在 257,289,356处有最大吸收. 规定A257/= A289为1.06-1.10 A356/= A289为0.900.94.
百分吸收系数
溶液浓度 1% g / ml
液层厚度 1cm
1cm
E
1% 1cm
• A=ECL • E=A/CL C=1%或1mol/L 例如 盐酸甲氧明 “取本品，精密称定，加水溶解并定量 稀释成每1ml含30ug的溶液，照分光 光度法，在290nm波长处测定吸收度， 1% E133-141 吸收系数（为 ） 1cm
专属鉴别试验
依 据： 每种药物的化学结构的差异及引起的 物 理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏 的定性反应鉴别药物的真伪。 是证实某一种药物的依据。
例子
巴比妥类药物：苯巴比妥含有苯环，司可巴比 妥含有双键，硫喷妥钠含有硫原子。根据取代 基的不同，采用各自专属的反应进行鉴别。
例子
• 甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲 母核，主要差别在A环和D环的取代基 不同，可利用这些结构特征确证。
定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解 度和物理常数等。
外观
溶解度
物理常数
性 状 （Description）
外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。
如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的 粉末；有类似蒜的特臭”。
溶解度： 一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶
剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、 极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。
物理常数 ：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载
的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、 折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。
性 状--- 物理常数
固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度
熔 点
• ChP(2010)收载三种熔点的测定 方法： • 第一法 测定易碎固体药品 • 第二法 测定不易粉碎固体药品 （脂肪酸、石蜡） • 第三法 测定凡士林或其他易碎物 要求报告初熔和终熔的温度
• BP(2009)规定在一定波长范围内扫描，寻找 最大吸收，测定吸收系数。
红外光谱鉴别法
• 红外光谱法是一种专属性很强，应用 较广（固、液、气）的鉴别方法，主 要应用于组分单一，结构明确的原料 药，特别适合于其他方法不易区分的 同类药物，如磺胺类、甾体激素类、 半合成抗胜素。
红外光谱鉴别法
对比供试品红外吸收光谱与药品
鉴别试验的内涵 鉴别试验的项目 鉴别试验的方法
鉴别试验的条件
鉴别试验的内涵
Test meaning
根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或
生物学方法来判断其真伪。 鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器 中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物 的鉴别。 鉴别试验方法应专属，每个品种一般2～3条。
第二章
药物的鉴别试验
Identification test of drug
药品检验工作的基本规律
药物的鉴别试验
药物的杂质检查 药物定量分析与分析方法验证
Basic regularity of drug inspection
药物的鉴别试验
Identification test of drug
多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。
（3）其它沉淀反应。
3.荧光反应鉴别法
常用的荧光发射形式： （1）药物本身可在可见光下发射荧光； （2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光； （3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光； （4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药 物经其它反应后，发射荧光。
General identification test
一般鉴别试验
无机物
依 据： 某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊 反应或典型的有机官能团反应。 有机物 中国药典附录收载一般鉴别试验： 无机金属盐类、无机酸盐、有机酸盐、 丙二酰 脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化 物类等
阴阳离子的特殊反应
（1）三氯化铁呈色反应：
用于酚羟基或水解后产生酚羟基
（2）异羟肟酸铁反应：
多用于芳酸及其酯类、酰胺类
（3）茚三酮呈色反应：
用于结构中含有脂肪氨基药物
（4）重氮化-偶合显色反应：
用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基
（5）氧化还原显色反应及其它颜色反应
2.沉淀生成反应鉴别法
（1）与重金属离子的沉淀反应
（2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应
呈色反应鉴别法
沉淀生成反应鉴别法
化学鉴别法 四 、 鉴 别 方 法
荧光反应鉴别法 气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点
紫外光谱鉴别法
光谱鉴别法
红外光谱鉴别法
薄层色谱鉴别法
色谱鉴别法 生物学法
HPLC、GC鉴别法 纸色谱鉴别法
1. 呈色反应鉴别法 指供试品溶液中加入适当的试 剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的 有色产物。
COOH
白色
酒石酸盐
• 取供试品的中性溶液于试管中，加氨制硝 酸银溶液几滴，于水浴中加热，有银镜生 成。
OH OH
+
COOH COOH
2 Ag(NH3)OH
OH OH
2Ag
+
+
COONH4 COONH4
2 NH3
+ 2H2O
综上所述，一般鉴别试验只能证实是哪 一类药物，而不能证实是哪一种药物
Specific identification test
鉴别试验条件
（一）溶液的浓度 （二）溶液的温度
（三）溶液的酸碱度
（四）试验时间 （五）干扰成分的存在
六、鉴别试验的灵敏度（sensitivity）
1、反应灵敏度和空白试验
最低检出量（minimum detectable quantity）
最低检出浓度（minimum detectable concentration）
• 吸收系数：在给定的波长、溶剂和温 度等条件下，吸光物质在单位浓度、 单位液层厚度时的吸收度称为吸收系 1% 数。中国药典收载是 E1 。 cm
这两种物理常数可用以区别药品、检 查纯度或测定制剂的含量。
吸收系数 吸光物质在单位浓度、单位液 层厚度时的吸收度 摩尔吸收系数 溶液浓度 1mol / L ε 液层厚度
• ChP(2010)凡例中对药物的鉴别 的定义为：鉴别项下规定的实验 方法，仅反应该药品某些物理、 化学或生物学等性质特征，不完 全代表对该药品化学结构的确证。
鉴别试验的项目 Test items
性状项和物理常数确认
原 料 药 鉴 别
鉴别项下规定的试验
制 剂 鉴 别
Fra Baidu bibliotek
性 状 （Description）
空白试验（blank test）：
在与供试品鉴别 试验完全相同的条件下， 除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进 行的试验。
（二）提高反应灵敏度的方法
1. 加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集
在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很 浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶 剂，浓集有色生成物，使其在有机溶剂中颜色 变深，易于观测。 2. 改进观测方法 如将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光 度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。
中国药科大学
药分教研室
CO32+2H+→CO2↑+H2O Ca2++CO32-→CaCO3↓
Cl-+ Ag+→AgCl↓ Br-+ Ag+→AgBr↓
阴阳离子的特殊反应
离子 鉴别方法 鉴别原理 光谱主要谱线589nm可见 光区 光谱主要谱线766nm， 769nm 光谱主要谱线622nm可见 光区 光谱主要谱线553nm， 500nm 现 象
酸根 名称 SO42CO32HCO3ClBr-
检验试剂
BaCl2溶 液 稀酸， Ca(OH)2 稀酸， Ca(OH)2 AgNO3试 液 AgNO3试 液
现
象
反应方程式
SO42-+Ba2+→BaSO4
白色↓加酸不溶 气体使石灰水变混 气体使石灰水变混 白↓溶于氨水不溶 稀硝酸 黄↓微溶氨水不溶 稀硝酸