酶抑制分光光度法

酶抑制分光光度法

蔬菜农药残留速测检测方法--酶抑制分光光度法，其原理是：有机磷和氨基甲酸酯类农药具有抑制昆虫中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死的原理来检测此类农药在食品中的综合残留量。此种方法主要是从家蝇或其他动物组织中提取乙酰胆碱酯酶（AChE），将乙酰胆碱酯酶与蔬菜样本提取液混合，以碘化乙酰硫代胆碱（ATChI）为底物，二硫双硝基苯甲酸（DTNB）为显色剂，经一段时间比色后，根据吸光值，计算乙酰胆碱酯酶受抑制程度。

造成蔬菜和水果农药残留问题主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药。如果蔬菜的提取液中不含农药或残留量很低，酶的活性就不被抑制，试验中加入的基质就被水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色或水解产物本身有颜色。如果蔬菜提取液中含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，基质就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。在分光光度计测定吸光度的变化，计算出抑制率就可以判断农药（有机磷和氨基甲酸酯类）的残留情况。抑制率与农药浓度呈正相关。残留农药对乙酰胆碱酯酶活性有抑制，浓度越高，抑制率越高。仪器通过测定酶与底物、显色剂显色反应变色速率，并与空白对照比较求得酶抑制率，从而判定农药残留量是否超标。农药残留速测检测结果判断标准（国标）中明确，酶抑制率≥50%时，蔬菜中某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒超标。

酶抑制率法对部分农药的检出限

农药名称

检出限／（㎎／㎏）

农药名称

检出限／（㎎／㎏）

敌敌畏

0.1

氧化乐果

0.8

对硫磷

1.0

甲基异柳磷5.0

辛硫磷

0.3

灭多威

0.1

甲胺磷

2.0

丁硫克百威

0.05

马拉硫磷

4.0

敌百虫

0.2

乐果

3.0

呋喃丹

0.05

AChE

化学反应式：

I(CH3)3NCH2CH2SOCCH3+H2O I(CH3)3NCH2CH2SH+CH3COOH

（ATChI）

碘化硫代胆碱与5,5,-二硫双硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-硫基-2-硝基苯甲酸（黄色），用溶液吸光度测出乙酰胆碱酯酶的催化活度。