微生物各属及种的鉴别
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三、鞭毛染色
用于观察菌体上有无鞭毛、鞭毛在菌体上的位置以及鞭毛的数量。在细菌鉴定中，特别是非发
酵菌的鉴定中很重要。
鞭毛染色可以直接从平板上挑选菌落，或从斜面上刮菌苔涂片即可，但必须注意动作尽量轻，
以免鞭毛从菌体上脱落。菌落应是
生长在营养较好的琼脂平板(如血平板、营养琼脂)上的过夜培养物。不可采用有抑制剂的选择性培
(二) 临床 8 种常见葡萄球菌的鉴别
目前葡萄球菌已被命名有 27 个种。临床标本中最常见有意义菌种是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄 球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌。 首先用凝固酶试验将其分为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌(包括中间和猪葡萄球菌)和凝固酶阴性的 其他葡萄球菌，然后用新生霉素敏感试验。推断新生霉素耐药为腐生葡萄球菌。下表列出了关键鉴 定试验来区别上述 8 个菌。
d．Faller 和 Schleifer 改良氧化酶试验为检出细胞色素 C。
e．标准的氧化—发酵试验。
f．+，耐药或无抑菌环，微球菌、口腔球菌、气球菌敏感，抑菌环 10～25mm。
g．十，耐药或抑菌环≤9mm；一，敏感，抑菌环 15～35mm。
h．表皮葡萄球菌有些菌株生长时紧固地粘附于琼脂表面，此种特性与细菌产生浓的粘液相关。
表
菌种
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 溶血葡萄球菌 里昂葡萄球菌 施氏葡萄球菌 腐生葡萄球菌 中间型葡萄球 猪葡萄球菌菌
有临床意义的 8 种葡萄球菌关键性鉴定
试
验
菌 落 色 素
葡 萄 球 菌 凝 固 酶
凝 聚 因 子
耐 热
D N A 酶
碱 性 磷 酸 酶
吡 咯 烷 酮 酶
鸟 氨 酸 脱 羧 酶
脲 酶
β 半 乳 糖 苷 酶
用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些菌，如新型隐球菌。 传统的方法是用印度墨汁，但目前国内无售。常规工作可以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒 不能太粗，否则影响观察结果。有人用 5％黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果较好。 试剂 印度墨汁或 5％黑色素水溶液。 染色方法 将标本与 1 滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下，使标本混合液变薄。在低倍 镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。
表
葡萄球菌属与其他革兰阳性球菌的鉴别 a
特 征b
菌名
严格 四联状 紧粘 需氧 排列 琼脂
动 力Leabharlann Baidu
5%NaCl 琼脂
触酶 c
氧化酶 d (改良法)
厌氧下 葡萄糖 产酸 e
葡萄球菌属
-
D
-b
-
+
+
-
d
气球菌属
-
+
-
-
+
-
-
(+)
动性球菌属
+
D
-
+
+
+
ND
-
腔球菌属
-
D
+
-
-
土
-
+
微球菌属
+
+
-
-
+
+
+
-
耐
产 生
V | P
新 生 霉 素 耐 药
多 粘 菌 素
B 耐 药
D | 蕈
糖
D | 甘 露 醇
需氧下产气
D
D | 甘 露 糖
D | 松 二 糖
D | 木 糖
| 纤 维 二 糖
麦 芽 糖
蔗 糖
+++++ - - d - + - +++++ - - ++
- - - - + - (d) + - + - + - - (+) (d) - - + +
色奴卡菌需要加长时间)，水洗。
2．加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。
3．加复染液，染 0.5～l min，水洗。
4．干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。
*：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用 2％硫酸水溶液。
(二)金胺 O-罗丹明 B 染色法
染剂 1．罗丹明 B 液：罗丹明 B 0.1g 加蒸馏水 100ml； 2．0.1％金胺 O 液：金胺 O 0.1g 加蒸馏水 95ml，再加入纯石炭酸 5ml，混匀； 3．3％盐酸酒精； 4．稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液 10ml，加蒸馏水 90ml，混匀。 方法 1． 涂片固定后加第 1 液 30～90s。 2． 弃去第 1 液后加第 2 液染 15min。 3． 用第 3 液脱色 1～2min，水洗。 4． 滴加第 4 液染 30s，水洗，待干，荧光抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。
消毒手。 7．个人物品不许带入室内。 8．当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物，并报
告主管人员采取必要的措施。 9．工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治
疗，并向主管负责人报告，进一步采用特殊措施。
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基本染色方法
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养基，如中国蓝、麦康凯、SS 琼脂等。观察鞭毛时，应耐心寻找整个涂片上的菌细胞，因为并不是
涂片上每个细菌细胞上的鞭毛特性及数量都一样，应以鞭毛数量最多的菌细胞为准。
鞭毛染色(改良 Ryu 法)
试剂
A 液： 5％石炭酸
10ml
鞣酸
2g
饱和硫酸铝钾液 10ml
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达到细菌检验与临床的密切联系。 6． 工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。
二、工作人员守则
在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。 工作人员必须遵守以下规则：
1．穿专用的工作衣、帽入室；必要时应戴口罩。 2．不允许无关人员进入实验室。 3．室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。 4．养成在室内手不触及口、脸、头发及躯体的习惯。 5．操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。 6．每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂
d - - - - + - - - + - - + d - (d) - - + +
d - (+) - - + + d - + - d + - + (d) - - + +
- - + + + + - - (+) + - - d - + - - - - -
d - - - - - - ++++ - +d - + - - ++
杆菌肽 f 0.04U/片
+ ND -
药
呋喃唑酮 g 100ug/片
+
注： a．葡萄球菌属、动性球菌属、口腔球菌属、微球菌属皆隶于微球菌科。
b．符号：+，90％以上阳性；土，90％以上弱阳性；一，90％以上阴性；d，1l％一 89％阳性；ND，未试验；
( ) 迟缓反应。
c．在某些菌种中出现触酶弱阳性或假阳性反应，是由于在培养中补充血红素，活化某些菌株触酶活性。
法(也称金胺 O-罗丹明 B 法)。
(一) 碱性复红染色法
试剂
1．萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
5％石炭酸溶液
90ml
2．脱色剂 *
浓盐酸
3ml
95％乙醇
97ml
3．复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液
30ml
10％氢氧化钾
0.1ml
蒸馏水
100ml
染色方法
1．涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染 5 min(若染
四、异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。
标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特(Albert)法染色来观察异染颗粒。
试剂
甲液： 甲苯胺蓝 0.15g
孔雀绿
0.2g
冰醋酸
1ml
95％乙醇 2ml
蒸馏水
100ml
将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混匀。静置 24h 后过滤备用。
B 液： 结晶紫酒精饱和液 应用液：A 液 10 份，B 液 1 份，混合，室温存放。 染色方法 1．玻片的处理：要求用新的载玻片。用前须在 95％酒精中浸泡 24 小时以上。用时从酒精中取 出，以干净纱布擦干后使用。 2．在玻片上滴蒸馏水两滴。一张玻片上可同时制 2 个涂片。 3．用接种环挑取血平板上菌落少许，将细菌点在玻片上的蒸馏水滴的顶部。一般只需点一下， 仅允许极少量细菌进入水滴，不可搅动，以免鞭毛脱落。 4．玻片置室温自然干燥。 5．滴加染液于玻片上，染色。 6．约 10～15min 后，用蒸馏水缓慢冲去染液。冲洗时应避免使染液表面的金属光泽液膜滞留在 玻片上，影响镜检。 7．玻片自然干燥后，镜检时应从涂片的边缘开始，逐渐移向中心。寻找细菌较少的视野，鞭毛 容易观察。细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
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葡萄球菌属
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一、常规鉴定
葡萄球菌的鉴定：首先须与其他的革兰阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定。
(一) 与其他革兰阳性球菌鉴别
临床标本中常见到的革兰阳性球菌，除葡萄球菌属外，还有微球菌属和气球菌属等。所以，在
菌属内菌种鉴定之前，首先与这几属细菌鉴别(见表)。
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)
和革兰阴性(红色)两类。
试剂
1. 结晶紫溶液
A 液： 结晶紫
2g
95％乙醇 20ml
B 液： 草酸铵
0.8g
蒸馏水
80ml
需在用前 24h 将 A 液、B 液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2．碘液
碘
1g
碘化钾
二、试验方法
(一)触酶试验(过氧化氢酶试验)
试剂：3％H2O2 溶液，置棕色瓶内于 4℃阴暗处保存。 方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加 3％过氧化氢溶液 1～2 滴。 静置之，lmin 内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。
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10ml
蒸馏水
90ml
染色方法： 1．涂片经火焰固定，加结晶紫液染 1 min，清水冲去染液。 2．加碘液染 l min，水洗。 3．加脱色液，不时摇动约 10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。 4．加复染液，染 30s，水洗。 5．干后镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须 掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。
- + d + + + - + + - - - + (d) + d - - ± +
- d - ++ - - d - - - ++ - + - - - - +
乙液： 碘
2g
碘化钾
3g
蒸馏水
300ml
先将碘化钾加少许蒸馏水(约 2m1)，充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏
水至 300ml。
染色方法
1. 涂片经火焰固定，加甲液，染 3～ 5 min。水洗。
2．滴加乙液，染 l min。水洗。
3．干后镜检，菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。
五、墨汁荚膜染色
2g
蒸馏水
300ml
碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完
全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至 300ml。
3．脱色液：95％乙醇。
4．复染液
A. 贮存液： 沙黄
2.5g
95％乙醇 100ml
B. 应用液： A 液
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片 上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水 1 滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时 必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果 的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫 为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳 性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺 O
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1．与链球菌鉴别：葡萄球菌与链球菌的区别如下：在镜下，葡萄球菌以单、双、葡萄状排列， 菌体呈圆形。链球菌以成单、双、链状排列，菌体形态为圆形或椭圆形。葡萄球菌触酶试验阳性， 链球菌则阴性。
2．与微球菌的鉴别：实验室常用的鉴别依据是形态和发酵葡萄糖产酸。在镜下，葡萄球菌以葡 萄状排列为主，菌体较小；微球菌以四联排列为主，且菌体较大。葡萄球菌发酵葡萄糖产酸试验阳 性，微球菌阴性。此外杆菌肽、呋喃唑酮敏感试验有利区别两属菌种。
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临床细菌检验工作的基本要求和技术
一、 对临床细菌检验人员的要求
1． 负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。 2． 一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。 3． 通晓细菌室守则，并严格遵守。 4． 负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。 5． 定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，
用于观察菌体上有无鞭毛、鞭毛在菌体上的位置以及鞭毛的数量。在细菌鉴定中，特别是非发
酵菌的鉴定中很重要。
鞭毛染色可以直接从平板上挑选菌落，或从斜面上刮菌苔涂片即可，但必须注意动作尽量轻，
以免鞭毛从菌体上脱落。菌落应是
生长在营养较好的琼脂平板(如血平板、营养琼脂)上的过夜培养物。不可采用有抑制剂的选择性培
(二) 临床 8 种常见葡萄球菌的鉴别
目前葡萄球菌已被命名有 27 个种。临床标本中最常见有意义菌种是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄 球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌。 首先用凝固酶试验将其分为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌(包括中间和猪葡萄球菌)和凝固酶阴性的 其他葡萄球菌，然后用新生霉素敏感试验。推断新生霉素耐药为腐生葡萄球菌。下表列出了关键鉴 定试验来区别上述 8 个菌。
d．Faller 和 Schleifer 改良氧化酶试验为检出细胞色素 C。
e．标准的氧化—发酵试验。
f．+，耐药或无抑菌环，微球菌、口腔球菌、气球菌敏感，抑菌环 10～25mm。
g．十，耐药或抑菌环≤9mm；一，敏感，抑菌环 15～35mm。
h．表皮葡萄球菌有些菌株生长时紧固地粘附于琼脂表面，此种特性与细菌产生浓的粘液相关。
表
菌种
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 溶血葡萄球菌 里昂葡萄球菌 施氏葡萄球菌 腐生葡萄球菌 中间型葡萄球 猪葡萄球菌菌
有临床意义的 8 种葡萄球菌关键性鉴定
试
验
菌 落 色 素
葡 萄 球 菌 凝 固 酶
凝 聚 因 子
耐 热
D N A 酶
碱 性 磷 酸 酶
吡 咯 烷 酮 酶
鸟 氨 酸 脱 羧 酶
脲 酶
β 半 乳 糖 苷 酶
用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些菌，如新型隐球菌。 传统的方法是用印度墨汁，但目前国内无售。常规工作可以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒 不能太粗，否则影响观察结果。有人用 5％黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果较好。 试剂 印度墨汁或 5％黑色素水溶液。 染色方法 将标本与 1 滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下，使标本混合液变薄。在低倍 镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。
表
葡萄球菌属与其他革兰阳性球菌的鉴别 a
特 征b
菌名
严格 四联状 紧粘 需氧 排列 琼脂
动 力Leabharlann Baidu
5%NaCl 琼脂
触酶 c
氧化酶 d (改良法)
厌氧下 葡萄糖 产酸 e
葡萄球菌属
-
D
-b
-
+
+
-
d
气球菌属
-
+
-
-
+
-
-
(+)
动性球菌属
+
D
-
+
+
+
ND
-
腔球菌属
-
D
+
-
-
土
-
+
微球菌属
+
+
-
-
+
+
+
-
耐
产 生
V | P
新 生 霉 素 耐 药
多 粘 菌 素
B 耐 药
D | 蕈
糖
D | 甘 露 醇
需氧下产气
D
D | 甘 露 糖
D | 松 二 糖
D | 木 糖
| 纤 维 二 糖
麦 芽 糖
蔗 糖
+++++ - - d - + - +++++ - - ++
- - - - + - (d) + - + - + - - (+) (d) - - + +
色奴卡菌需要加长时间)，水洗。
2．加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。
3．加复染液，染 0.5～l min，水洗。
4．干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。
*：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用 2％硫酸水溶液。
(二)金胺 O-罗丹明 B 染色法
染剂 1．罗丹明 B 液：罗丹明 B 0.1g 加蒸馏水 100ml； 2．0.1％金胺 O 液：金胺 O 0.1g 加蒸馏水 95ml，再加入纯石炭酸 5ml，混匀； 3．3％盐酸酒精； 4．稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液 10ml，加蒸馏水 90ml，混匀。 方法 1． 涂片固定后加第 1 液 30～90s。 2． 弃去第 1 液后加第 2 液染 15min。 3． 用第 3 液脱色 1～2min，水洗。 4． 滴加第 4 液染 30s，水洗，待干，荧光抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。
消毒手。 7．个人物品不许带入室内。 8．当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物，并报
告主管人员采取必要的措施。 9．工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治
疗，并向主管负责人报告，进一步采用特殊措施。
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基本染色方法
第 2 页 共 47 页
养基，如中国蓝、麦康凯、SS 琼脂等。观察鞭毛时，应耐心寻找整个涂片上的菌细胞，因为并不是
涂片上每个细菌细胞上的鞭毛特性及数量都一样，应以鞭毛数量最多的菌细胞为准。
鞭毛染色(改良 Ryu 法)
试剂
A 液： 5％石炭酸
10ml
鞣酸
2g
饱和硫酸铝钾液 10ml
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达到细菌检验与临床的密切联系。 6． 工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。
二、工作人员守则
在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。 工作人员必须遵守以下规则：
1．穿专用的工作衣、帽入室；必要时应戴口罩。 2．不允许无关人员进入实验室。 3．室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。 4．养成在室内手不触及口、脸、头发及躯体的习惯。 5．操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。 6．每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂
d - - - - + - - - + - - + d - (d) - - + +
d - (+) - - + + d - + - d + - + (d) - - + +
- - + + + + - - (+) + - - d - + - - - - -
d - - - - - - ++++ - +d - + - - ++
杆菌肽 f 0.04U/片
+ ND -
药
呋喃唑酮 g 100ug/片
+
注： a．葡萄球菌属、动性球菌属、口腔球菌属、微球菌属皆隶于微球菌科。
b．符号：+，90％以上阳性；土，90％以上弱阳性；一，90％以上阴性；d，1l％一 89％阳性；ND，未试验；
( ) 迟缓反应。
c．在某些菌种中出现触酶弱阳性或假阳性反应，是由于在培养中补充血红素，活化某些菌株触酶活性。
法(也称金胺 O-罗丹明 B 法)。
(一) 碱性复红染色法
试剂
1．萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
5％石炭酸溶液
90ml
2．脱色剂 *
浓盐酸
3ml
95％乙醇
97ml
3．复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液
30ml
10％氢氧化钾
0.1ml
蒸馏水
100ml
染色方法
1．涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染 5 min(若染
四、异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。
标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特(Albert)法染色来观察异染颗粒。
试剂
甲液： 甲苯胺蓝 0.15g
孔雀绿
0.2g
冰醋酸
1ml
95％乙醇 2ml
蒸馏水
100ml
将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混匀。静置 24h 后过滤备用。
B 液： 结晶紫酒精饱和液 应用液：A 液 10 份，B 液 1 份，混合，室温存放。 染色方法 1．玻片的处理：要求用新的载玻片。用前须在 95％酒精中浸泡 24 小时以上。用时从酒精中取 出，以干净纱布擦干后使用。 2．在玻片上滴蒸馏水两滴。一张玻片上可同时制 2 个涂片。 3．用接种环挑取血平板上菌落少许，将细菌点在玻片上的蒸馏水滴的顶部。一般只需点一下， 仅允许极少量细菌进入水滴，不可搅动，以免鞭毛脱落。 4．玻片置室温自然干燥。 5．滴加染液于玻片上，染色。 6．约 10～15min 后，用蒸馏水缓慢冲去染液。冲洗时应避免使染液表面的金属光泽液膜滞留在 玻片上，影响镜检。 7．玻片自然干燥后，镜检时应从涂片的边缘开始，逐渐移向中心。寻找细菌较少的视野，鞭毛 容易观察。细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
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葡萄球菌属
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一、常规鉴定
葡萄球菌的鉴定：首先须与其他的革兰阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定。
(一) 与其他革兰阳性球菌鉴别
临床标本中常见到的革兰阳性球菌，除葡萄球菌属外，还有微球菌属和气球菌属等。所以，在
菌属内菌种鉴定之前，首先与这几属细菌鉴别(见表)。
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)
和革兰阴性(红色)两类。
试剂
1. 结晶紫溶液
A 液： 结晶紫
2g
95％乙醇 20ml
B 液： 草酸铵
0.8g
蒸馏水
80ml
需在用前 24h 将 A 液、B 液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2．碘液
碘
1g
碘化钾
二、试验方法
(一)触酶试验(过氧化氢酶试验)
试剂：3％H2O2 溶液，置棕色瓶内于 4℃阴暗处保存。 方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加 3％过氧化氢溶液 1～2 滴。 静置之，lmin 内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。
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10ml
蒸馏水
90ml
染色方法： 1．涂片经火焰固定，加结晶紫液染 1 min，清水冲去染液。 2．加碘液染 l min，水洗。 3．加脱色液，不时摇动约 10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。 4．加复染液，染 30s，水洗。 5．干后镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须 掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。
- + d + + + - + + - - - + (d) + d - - ± +
- d - ++ - - d - - - ++ - + - - - - +
乙液： 碘
2g
碘化钾
3g
蒸馏水
300ml
先将碘化钾加少许蒸馏水(约 2m1)，充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏
水至 300ml。
染色方法
1. 涂片经火焰固定，加甲液，染 3～ 5 min。水洗。
2．滴加乙液，染 l min。水洗。
3．干后镜检，菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。
五、墨汁荚膜染色
2g
蒸馏水
300ml
碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完
全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至 300ml。
3．脱色液：95％乙醇。
4．复染液
A. 贮存液： 沙黄
2.5g
95％乙醇 100ml
B. 应用液： A 液
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片 上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水 1 滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时 必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果 的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫 为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳 性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺 O
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1．与链球菌鉴别：葡萄球菌与链球菌的区别如下：在镜下，葡萄球菌以单、双、葡萄状排列， 菌体呈圆形。链球菌以成单、双、链状排列，菌体形态为圆形或椭圆形。葡萄球菌触酶试验阳性， 链球菌则阴性。
2．与微球菌的鉴别：实验室常用的鉴别依据是形态和发酵葡萄糖产酸。在镜下，葡萄球菌以葡 萄状排列为主，菌体较小；微球菌以四联排列为主，且菌体较大。葡萄球菌发酵葡萄糖产酸试验阳 性，微球菌阴性。此外杆菌肽、呋喃唑酮敏感试验有利区别两属菌种。
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临床细菌检验工作的基本要求和技术
一、 对临床细菌检验人员的要求
1． 负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。 2． 一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。 3． 通晓细菌室守则，并严格遵守。 4． 负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。 5． 定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，