小鼠精子畸形实验

正常精子
香蕉形
Baidu Nhomakorabea
胖头畸形
双尾畸形
无尾精子、头部重叠的或整个与另一个 重叠的精子均不计数。
判断双头、双尾精子时，要注意与两条 精子的部分重叠相区别
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组
织残渣后再推片效果更好，注意推片的质 量； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的精 子损伤。
注意事项
处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较 敏感，因此在染毒后3～5周时精子畸形率 最高，必要时可作动态观察有助于全面评 价；
小鼠精子畸形实验
Sperm Abnormality Test in Mouse
•遗传学终点（genetic endpoint）：遗传学实验观察到的
现象所反应的各种事件。
•遗传学终点分类：共4类
1）基因突变；
2）染色体畸变；
3）染色体组畸变； 4）DNA损伤
1、基因突变检测 Ames试验、果蝇伴性隐性致死试验、正向基 因突变试验 2、染色体损伤检测 染色体畸变分析、微核试验、显性致死试验 3、DNA损伤检测 SCE试验、UDS试验、SCGE试验
阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹 腔注射，连续５天，每天一次。
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹 腔，取出两侧附睾
过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中， 用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤
涂片：取１小滴滤液涂片
操作步骤
固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直 接涂片镜检）
缺血、感染、发热等可产生假阳性结果；
各组小鼠精子畸形检测结果
组别
正常组 损伤对照组
高剂量组 中剂量组 低剂量组
动物数 / 受检精子数/ 畸形精子总数/
只
个
个
5
5000
51
5
5000
187
5
5000
259
5
5000
153
5
5000
69
精子畸形率 /％
1.02 3.74* 5.18*
3.06*
1.38
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小鼠
2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。
试验设计
受试物高剂量组的总剂量应能使部分 动物死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低 剂量组。
染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高
倍镜，在较暗的视野下观察）
观察与计数
首先，在低倍镜下选择背景清 晰、精子分布均匀、重叠较少的区 域，然后，在高倍镜下观察结构完 整的1000个精子，计数其中畸形的 精子。
精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、 无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。
目的
观察精子在生成过程中形态的改 变来检查受试物对雄性生殖细胞的 致突变作用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制， 当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。
某些特殊的染色体重排，如性-常染色体 易位是精子产生畸形的主要机理。但是， 缺血、变态反应、感染和体温升高也可能 导致精子的畸形。