2021级硕士实验课补体依赖细胞毒试验

加样方法
试管 靶细胞 抗Thy-1血清
PBS 补体
阳性管 (ml) 100
100
—
100
阴性管 (ml) 100
—
100
100
结果判定
Ag+Ab+C
Ag+C
阳性管
阳性管
阴性管
细胞毒百分率(%)=
(Байду номын сангаас-
阳性管活细胞数 )×100% 阴性管活细胞数
注意事项
靶细胞浓度要适中，过高或过低均会影响试验结果
。
台酚兰染色时间不要太长，因为台酚兰本身具有一
定的毒性作用，可致细胞死亡。
补体要新鲜采集，三只以上的豚鼠的血清混合。
实验原理示意图
MAC
T Cell
T细胞+抗Thy-1抗体 +
补体
细胞溶解现象
实验分组
四人一组，1只小鼠/组。 两人做脾，两人做胸腺。
器材名称 加样器 吸头
载玻片/盖玻片 显微镜 小试管 滴管 平皿
刻度吸管(5ml) 剪刀、镊子 (直,弯) 纱布块
物品分配
量/组 1把 12个 4套 1台 6支 2支 1对 1支 1套
2021级硕士实验课补体 依赖细胞毒试验
2020/9/11
实验原理
细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)的结合可 激活补体活化的经典途径，引起细胞膜损伤，膜通 透性改变而吸收染料，使细胞着色，胀大而死亡， 失去正常的折光性。根据死细胞的多少判断细胞毒 性的强弱。
本次实验采用抗Thy-1血清(Thy-1是T细胞的一种表 面标志)与小鼠的胸腺和脾的T细胞相互作用，通过 激活补体对胸腺和脾的T细胞进行杀伤。
试剂名称 PBS
抗Thy-1血清 台酚兰 补体 小鼠
2块
量/组 10ml 0.3ml 1瓶 0.5ml 1只
操作步骤
1. 将3ml PBS加入平皿中。 2. 小鼠脱颈处死，取脾和胸腺(分别位于左侧腹部和胸骨柄处
) 3. 取胸腺和脾脏分别放到平皿中，用直头镊子固定组织，用
弯头镊子轻压组织，将其捣碎，再将3-4层纱布覆盖到组织 上，然后用滴管隔着纱布将细胞悬液吸出。 4. 按下图加样：>> 5. 混匀后放置37℃水浴，孵育40分钟。 6. 取出后每管加入50ul台酚兰染液，混匀后立即取出染色的 细胞悬液20ul滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观 察。 7. 观察结果：计数200个细胞中死细胞数(死细胞形态为肿胀