NADPH和NOX抑制剂Apocynin(夹竹桃麻素)联用在小鼠脑卒中模型中抗炎和神经保护的作用

NADPH和NOX抑制剂Apocynin（夹竹桃麻素）联用在小鼠脑卒中

模型中抗炎和神经保护的作用

目的:观察NADPH和NOX抑制剂Apocynin联用对缺血/再灌注诱导的神经炎症和神经元损伤的抑制作用。方法:采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型观察NADPH、Apocynin单独用药及NADPH联合Apocynin用药对小鼠脑梗死体积、脑水肿含量及急性期和长期行为学症状的影响,并进行病理组织学检测。

运用DHE探针标记检测缺血大脑皮层ROS的变化及相关试剂盒检测缺血大脑皮层的rGSH和NADPH含量。运用免疫印迹法检测小鼠缺血大脑皮层NOX2、NOX4、NF-?B信号通路相关蛋白和炎症小体信号通路相关蛋白的含量变化。

应用免疫荧光法分析NF-?B的核转位及NLRP3炎症复合物、炎症因子细胞分布和表达情况。结果:小鼠脑缺血再灌注后,NOX2和NOX4的蛋白水平明显升高,在16h达到高峰。

DHE染色法检测ROS水平结果显示:NADPH、Apocynin、NADPH联合Apocynin 均可抑制小鼠脑缺血再灌后ROS水平的升高,且NADPH联合Apocynin组抑制效果最为明显。试剂盒检测NADPH和rGSH水平变化结果显示:NADPH、Apocynin、NADPH 联合Apocynin均可抑制小鼠脑缺血再灌后NADPH和rGSH水平的降低,且NADPH 联合Apocynin组抑制作用最显著。

Western blot结果显示:小鼠脑缺血再灌注16 h后大脑皮层缺血区I?B?、NF-?B p65及p-NF-?B p65含量显著升高,同样i NOS和COX2的含量也显著上升,NADPH、Apocynin、NADPH联合Apocynin均可显著降低p-IKK?、p-I?B?和

p-NF-?B p65的含量,抑制了NF-?B p65、iNOS、COX2的表达,增加了总I?B?的蛋

白水平,且NADPH联合Apocynin组效果最为显著。免疫荧光结果显示:假手术组小鼠大脑皮层NF-?B p65蛋白主要表达在神经元胞浆中,缺血再灌后,NF-?B p65从胞浆转移至胞核,大量表达在细胞核中,而NADPH、Apocynin、NADPH联合Apocynin均可明显抑制NF-?B的核转位,两药合用效果更好。

Western blot和免疫荧光结果共同显示:假手术组小鼠大脑皮层NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1?和IL-18蛋白表达量很低,缺血再灌注16 h后NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1?和IL-18含量在神经元细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞均显著升高,给予NADPH或Apocynin后可明显抑制缺血皮层NLRP3炎症复合物通路的激活及炎症因子的产生,NADPH联合Apocynin使用效果优于单独使用。此

外,NADPH、Apocynin单独用药及NADPH联合Apocynin用药均可减少小鼠脑梗死体积、降低脑水肿含量以及改善脑缺血再灌小鼠的急性期和长期行为学障碍。

病理组织学检测结果显示:NADPH、Apocynin、NADPH联合Apocynin均可改善缺血再灌后神经元的形态,减轻核固缩和核溶解程度,降低神经元损伤程度,其中NADPH联合Apocynin可产生更显著的效果。结论:除了抗氧化作用外,NADPH 还具有抗炎作用,并且NADPH联合NOX抑制剂Apocynin使用可在缺血性脑中风中发挥更好的神经保护作用。