鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
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（ 山东农业大学动物 医学院／ 山东省 动物 生物技术与疫病 防治重点 实验 室 ， 山东 泰安 摘 ２１１） ７ ０ ８
要： 将鸡 自细胞介素 １ ８的成 熟蛋 白（ｈｃｅ ｔｒ ｕ ｉ １ ａ ｒ ｒｔ ｎ ｍ ｈＬ一１ ） ｃ ｉ ｎｉ ｅｌ ｋ ８ｍ ｔ ｅｐｏ ｉ ， Ｃ ｌ ８ 基因在原核系 ｋ ｎ ｅ ｎ ｕ ｅ
Ｐｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｐ ｅ ｓｏ ｆＣｈ ｃ ｅ Ｌ 一１ ａ ｕ ｅ Ｐｒ ｔ ｉ ｎ ｎ ｏ ａ ｙ ｔｃ Ｅｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ｉ ｋ ｎ Ｉ Ｍ ｔ ｒ ｏ ｅｎ Ｇｅ ｅ ａ ｄ ８ Ｅｓａ ｌ ｈ ｅ ｔｏ ｎ ｒ ｃ ｔ ｂ ｉ ｍ ｎ ｆＩ ｄｉｅ ｔＥＬＩ Ａ ０ Ｓ ｒ ｍ ｔｂ ｄ ｔｃ ｉｎ ｓ Ｓ ｆ ｒ、ｅ ｕ Ａｎ ｉ ｏ ｙ Ｄｅ ｅ ｔｏ
山东 农 业 科 学
２ １ ，４ ４ ： ９ ０ ２４ （ ）５—
Ｓａｄｎ ｇｉｕｔ ａ Ｓｉ ｃｓ ｈｎｏｇＡ ｒ ｌｒｌ ｃｅ ｅ ｃ ｕ ｎ
鸡 白细 胞 介 素 １ 熟 蛋 白的 原 核 表 达 ８成 及 抗 体 间 接 Ｅ ＩＡ方 法 的 建 立 ＬＳ
苏倩倩 ， 李恩扩 ， 张海 滨 ， 周 霞 ， 胡敬东
好的稳定性 、 重复性和特异性 ， 为下一Leabharlann Baidu单抗的筛选鉴定奠定 了必要的基础 。
关键词 ： 白细胞介索 １ 鸡 ８成熟蛋 白（ Ｃ Ｉ ８ ； ｍ ｈＬ一１ ） 原核表达 ； 白纯化 ； 蛋 间接 Ｅ ＩＡ ＬＳ 中圈分类号 ： ５ ３ Ｑ ０ 文献标识 号 ： Ａ 文章编 号 ：０ １ ４ ４ （０ ２ ０ ００ — ５ １０ — ９ ２ ２ １ ）４— ０ ５ ０
统表达 。 采用 Ｎ —Ｎ Ａ亲和层析方法纯化得 到该 重组 蛋 白。纯化后重组蛋 白包被反应板 ， 过方阵滴定 确定 ｉ Ｔ 通 最佳抗原包被浓度 、 血清 稀 释 倍数 、 羊抗 鼠酶 标二 抗 稀 释倍 数 ， 建立 检 测 Ｃ Ｉ ｈＬ—ｌ 熟 蛋 白抗 体 的 间接 ８成
Ｅ ＩＡ方法 。经方阵滴定结果确定 最佳 抗原包 被质 量浓 度为 ４ ／Ｉ， ＬＳ ｒ 阳性血清 稀释 比例为 １ ０ ， 抗 鼠 １ ｌ ：１ 羊
Ｉ ｇ Ｇ辣根过氧化物酶 结合 物最佳稀释 比例为 １ １ ０抗 原抗 体最佳 结合 时间是 １５ｈ 血清 与二抗最 适反 ： ２０ ， ０ ． ，
应时间为 １ 。阴性 、 ｈ 阳性血清的判定标准为 ： 被检样本 的 Ｏ Ｄ值是一 组阴性样本 Ｏ Ｄ值 的２或 ３倍且 Ｏ ４ ≥ Ｄ５ ｏ ０５ 即为阳性 ， 以 ＰＮ表示 ， ５＜ Ｎ＜ ． ．， 比值 ／ １ Ｗ ． ２０为可疑 ， ＷＮ＜ ． 为 阴性 。本试验 结果证 明该 方法具 有 良 １５
Ｓ ｉｎ—ｑａ ，Ｌ ｎ—ｋ ｏ Ｈ Ｎ ｉ ｉ ， Ｈ Ｕ Ｘ ａ Ｈ ｉ Ｕ Ｑａ ｉ ｎ Ｉ Ｅ ｕ ，Ｚ Ａ Ｇ Ｈａ —ｂｎ Ｚ Ｏ ｉ ， Ｕ Ｊ ｇ—ｄ ｎ ’ ｎ ｏ ｇ
（ Ｃ ｌｇ ｅ ｒ ａｙＭｅｉ ｎ ，ｈ ｎｏ ｇＡ ｒ ｕｔｒｌ ｎ ｅｓｙ ｈ ｎｏｇＰｏｉ ｉｌ ｅ ａｏａｏ ） ｏｌ ｅｏ Ｖｔｉ ｒ ｄ ｉｅＳ ａｄ ｎ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｒｔ／Ｓ ａ ｄｎ ｒ ｎ ａ ｙＬ ｂｒｔｒ ｏ ｅ ｆ ｅｎ ｃ ｃ ｕ ｖ ｉ ｖｃ Ｋ ｙ ｆ
Ａ ｉａ ｎ ｍ ｌＢｉｔｃ ｎ ｏ ｙ ａ ｄ Ｄｉ ａ ｅ Ｃ ｎ ｒ ｌ ｎ Ｐ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ａ ７ ０ ８，Ｃ ｉａ ｏｅｈ ａ ｇ ｎ ｌ ｓ ｓ ｏ ｔｏ ｄ ｒｖ ｎ ｉ ，Ｔ ｉ ｎ ２ １ １ ｅ ａ ｏ ｈｎ
．
Ａｋａ ａ ｔ Ｔ ｅ ｇ ｎ ｆｃ ｉｋ ｎ ｉｔｒ ｕ ｉ ｍａｕ ｅｐ ｏｅｎ ｗ ｓｅ ｐ ｅｓ ｄ ｉ ｒｋ ｒｏｉ ｙ ｔｍ． Ｔ ｅ ｒ ｅ ｈ ｅ ｅ ｏ ｈｃ ｅ ｎｅｌ ｋｎ １ ｔｒ ｒｔｉ ａ ｘ ｒｓｅ ｎ ｐｏ ａｙ ｔ ｓｓｅ ｅ ８ ｃ ｈ
（ 山东农业大学动物 医学院／ 山东省 动物 生物技术与疫病 防治重点 实验 室 ， 山东 泰安 摘 ２１１） ７ ０ ８
要： 将鸡 自细胞介素 １ ８的成 熟蛋 白（ｈｃｅ ｔｒ ｕ ｉ １ ａ ｒ ｒｔ ｎ ｍ ｈＬ一１ ） ｃ ｉ ｎｉ ｅｌ ｋ ８ｍ ｔ ｅｐｏ ｉ ， Ｃ ｌ ８ 基因在原核系 ｋ ｎ ｅ ｎ ｕ ｅ
Ｐｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｐ ｅ ｓｏ ｆＣｈ ｃ ｅ Ｌ 一１ ａ ｕ ｅ Ｐｒ ｔ ｉ ｎ ｎ ｏ ａ ｙ ｔｃ Ｅｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ｉ ｋ ｎ Ｉ Ｍ ｔ ｒ ｏ ｅｎ Ｇｅ ｅ ａ ｄ ８ Ｅｓａ ｌ ｈ ｅ ｔｏ ｎ ｒ ｃ ｔ ｂ ｉ ｍ ｎ ｆＩ ｄｉｅ ｔＥＬＩ Ａ ０ Ｓ ｒ ｍ ｔｂ ｄ ｔｃ ｉｎ ｓ Ｓ ｆ ｒ、ｅ ｕ Ａｎ ｉ ｏ ｙ Ｄｅ ｅ ｔｏ
山东 农 业 科 学
２ １ ，４ ４ ： ９ ０ ２４ （ ）５—
Ｓａｄｎ ｇｉｕｔ ａ Ｓｉ ｃｓ ｈｎｏｇＡ ｒ ｌｒｌ ｃｅ ｅ ｃ ｕ ｎ
鸡 白细 胞 介 素 １ 熟 蛋 白的 原 核 表 达 ８成 及 抗 体 间 接 Ｅ ＩＡ方 法 的 建 立 ＬＳ
苏倩倩 ， 李恩扩 ， 张海 滨 ， 周 霞 ， 胡敬东
好的稳定性 、 重复性和特异性 ， 为下一Leabharlann Baidu单抗的筛选鉴定奠定 了必要的基础 。
关键词 ： 白细胞介索 １ 鸡 ８成熟蛋 白（ Ｃ Ｉ ８ ； ｍ ｈＬ一１ ） 原核表达 ； 白纯化 ； 蛋 间接 Ｅ ＩＡ ＬＳ 中圈分类号 ： ５ ３ Ｑ ０ 文献标识 号 ： Ａ 文章编 号 ：０ １ ４ ４ （０ ２ ０ ００ — ５ １０ — ９ ２ ２ １ ）４— ０ ５ ０
统表达 。 采用 Ｎ —Ｎ Ａ亲和层析方法纯化得 到该 重组 蛋 白。纯化后重组蛋 白包被反应板 ， 过方阵滴定 确定 ｉ Ｔ 通 最佳抗原包被浓度 、 血清 稀 释 倍数 、 羊抗 鼠酶 标二 抗 稀 释倍 数 ， 建立 检 测 Ｃ Ｉ ｈＬ—ｌ 熟 蛋 白抗 体 的 间接 ８成
Ｅ ＩＡ方法 。经方阵滴定结果确定 最佳 抗原包 被质 量浓 度为 ４ ／Ｉ， ＬＳ ｒ 阳性血清 稀释 比例为 １ ０ ， 抗 鼠 １ ｌ ：１ 羊
Ｉ ｇ Ｇ辣根过氧化物酶 结合 物最佳稀释 比例为 １ １ ０抗 原抗 体最佳 结合 时间是 １５ｈ 血清 与二抗最 适反 ： ２０ ， ０ ． ，
应时间为 １ 。阴性 、 ｈ 阳性血清的判定标准为 ： 被检样本 的 Ｏ Ｄ值是一 组阴性样本 Ｏ Ｄ值 的２或 ３倍且 Ｏ ４ ≥ Ｄ５ ｏ ０５ 即为阳性 ， 以 ＰＮ表示 ， ５＜ Ｎ＜ ． ．， 比值 ／ １ Ｗ ． ２０为可疑 ， ＷＮ＜ ． 为 阴性 。本试验 结果证 明该 方法具 有 良 １５
Ｓ ｉｎ—ｑａ ，Ｌ ｎ—ｋ ｏ Ｈ Ｎ ｉ ｉ ， Ｈ Ｕ Ｘ ａ Ｈ ｉ Ｕ Ｑａ ｉ ｎ Ｉ Ｅ ｕ ，Ｚ Ａ Ｇ Ｈａ —ｂｎ Ｚ Ｏ ｉ ， Ｕ Ｊ ｇ—ｄ ｎ ’ ｎ ｏ ｇ
（ Ｃ ｌｇ ｅ ｒ ａｙＭｅｉ ｎ ，ｈ ｎｏ ｇＡ ｒ ｕｔｒｌ ｎ ｅｓｙ ｈ ｎｏｇＰｏｉ ｉｌ ｅ ａｏａｏ ） ｏｌ ｅｏ Ｖｔｉ ｒ ｄ ｉｅＳ ａｄ ｎ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｒｔ／Ｓ ａ ｄｎ ｒ ｎ ａ ｙＬ ｂｒｔｒ ｏ ｅ ｆ ｅｎ ｃ ｃ ｕ ｖ ｉ ｖｃ Ｋ ｙ ｆ
Ａ ｉａ ｎ ｍ ｌＢｉｔｃ ｎ ｏ ｙ ａ ｄ Ｄｉ ａ ｅ Ｃ ｎ ｒ ｌ ｎ Ｐ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ａ ７ ０ ８，Ｃ ｉａ ｏｅｈ ａ ｇ ｎ ｌ ｓ ｓ ｏ ｔｏ ｄ ｒｖ ｎ ｉ ，Ｔ ｉ ｎ ２ １ １ ｅ ａ ｏ ｈｎ
．
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