昆虫细胞的驯化方案
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
昆虫细胞的驯化方案
昆虫细胞的特性
1．翻倍时间（Doubling Time） 细胞的翻倍时间是评价昆虫细胞是否健康的一个标 准。翻倍时间应该在细胞处于对数期时测量，对于 Sf9和Sf21细胞来说通常是介于16-24小时之间。
2．细胞大小（Cell Size） 细胞的大小也是评价细胞健康程度的一个参数。如 果细胞是健康的，细胞的大小均一，都处于该细胞 株体积正常变化范围的下限。细胞的大小在不同的 细胞株变化是很大的。对于我用过的Sf9和Sf21，典 型的直径是16-18um。
第二阶段： 1．准备适量的由50%新培养液和50%旧培养液组成的 混合培养液II。 2．将细胞以两倍最低分装密度分装至混合培养液II 中。 3．如第一阶段一样，监测细胞生长指数，使细胞达 到稳定状态。然后将分装密度降到最低分装密度， 再使细胞达到稳定状态。
第三阶段： 步骤同第一阶段和第二阶段，使细胞适应混合培养 液III（75%新培养液和25%旧培养液）。
第四阶段： 1．步骤同第一阶段、第二阶段和第三阶段，使细胞 适应新培养液。 2．当细胞在新培养液中达到稳定后，监测细胞的生 长指数，看是否波动过大。
3．滞后期（Duration of Lag） 当细胞的密度过低时，会有一个滞后期，其长短取 决于分装或者传代后细胞的密度。一般说来，该密 度越低，滞后期越长。对于一个特定的细胞株来说， 当这个密度高出一个阈值时，滞后期的长短与密度 无关；而低于一个阈值时，滞后期无限长，细胞不 再增殖。
பைடு நூலகம்
4．低密度分装极限（Low Density Split Tolerance） 每种细胞适应的浓度不同，这是细胞株的特性，需 要进行实验来确定你的细胞株的密度极限。我的细 胞株有些在分装成密度为5×10*4细胞/ml时仍然可以 很好复苏，有些细胞株分装成5×10*5细胞/ml就不能 复苏了。
直接适应法： 这种方法简单，操作时间短，但对细胞的损伤较大， 用过几次效果不理想。
间接适用法： 也叫渐进式适用法，耗时时间长，但是能给细胞缓 和的时间恢复自身的状态和功能，效果不错。
第一阶段： 1．准备合适体积的由25%体积新培养液和75%旧培养液（即细胞原先适应 的培养液）组成的混合培养液I。 2．将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液I中。 3．使细胞生长到通常培养时的较高密度，监测细胞生长参数。 4．继续以步骤2中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液I中，直到生长参 数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。 5．一旦细胞稳定下来，以通常使用的最低分装密度分装细胞至新鲜的混 合培养液I中，同样监测细胞参数。 6．细胞达到较高密度后，继续以步骤5中的分装密度把细胞分装到新鲜的 混合培养液I中，直到细胞的生长参数达到可以接受的水平。 7．如果细胞恢复到正常状态，进行第二阶段的实验。 8．如果细胞不能达到正常状态，新培养液可能不适于培养这种细胞。 9．如果细胞在新培养液中的生长参数达到平衡状态，虽然与正常状态不 同，但是可以为实验接受，也可进行第二阶段的实验。
昆虫细胞的特性
1．翻倍时间（Doubling Time） 细胞的翻倍时间是评价昆虫细胞是否健康的一个标 准。翻倍时间应该在细胞处于对数期时测量，对于 Sf9和Sf21细胞来说通常是介于16-24小时之间。
2．细胞大小（Cell Size） 细胞的大小也是评价细胞健康程度的一个参数。如 果细胞是健康的，细胞的大小均一，都处于该细胞 株体积正常变化范围的下限。细胞的大小在不同的 细胞株变化是很大的。对于我用过的Sf9和Sf21，典 型的直径是16-18um。
第二阶段： 1．准备适量的由50%新培养液和50%旧培养液组成的 混合培养液II。 2．将细胞以两倍最低分装密度分装至混合培养液II 中。 3．如第一阶段一样，监测细胞生长指数，使细胞达 到稳定状态。然后将分装密度降到最低分装密度， 再使细胞达到稳定状态。
第三阶段： 步骤同第一阶段和第二阶段，使细胞适应混合培养 液III（75%新培养液和25%旧培养液）。
第四阶段： 1．步骤同第一阶段、第二阶段和第三阶段，使细胞 适应新培养液。 2．当细胞在新培养液中达到稳定后，监测细胞的生 长指数，看是否波动过大。
3．滞后期（Duration of Lag） 当细胞的密度过低时，会有一个滞后期，其长短取 决于分装或者传代后细胞的密度。一般说来，该密 度越低，滞后期越长。对于一个特定的细胞株来说， 当这个密度高出一个阈值时，滞后期的长短与密度 无关；而低于一个阈值时，滞后期无限长，细胞不 再增殖。
பைடு நூலகம்
4．低密度分装极限（Low Density Split Tolerance） 每种细胞适应的浓度不同，这是细胞株的特性，需 要进行实验来确定你的细胞株的密度极限。我的细 胞株有些在分装成密度为5×10*4细胞/ml时仍然可以 很好复苏，有些细胞株分装成5×10*5细胞/ml就不能 复苏了。
直接适应法： 这种方法简单，操作时间短，但对细胞的损伤较大， 用过几次效果不理想。
间接适用法： 也叫渐进式适用法，耗时时间长，但是能给细胞缓 和的时间恢复自身的状态和功能，效果不错。
第一阶段： 1．准备合适体积的由25%体积新培养液和75%旧培养液（即细胞原先适应 的培养液）组成的混合培养液I。 2．将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液I中。 3．使细胞生长到通常培养时的较高密度，监测细胞生长参数。 4．继续以步骤2中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液I中，直到生长参 数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。 5．一旦细胞稳定下来，以通常使用的最低分装密度分装细胞至新鲜的混 合培养液I中，同样监测细胞参数。 6．细胞达到较高密度后，继续以步骤5中的分装密度把细胞分装到新鲜的 混合培养液I中，直到细胞的生长参数达到可以接受的水平。 7．如果细胞恢复到正常状态，进行第二阶段的实验。 8．如果细胞不能达到正常状态，新培养液可能不适于培养这种细胞。 9．如果细胞在新培养液中的生长参数达到平衡状态，虽然与正常状态不 同，但是可以为实验接受，也可进行第二阶段的实验。