科研指标测定方法

指标：1、品质指标

硬度、色泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放

率、可滴定酸、Vc

2、抗性指标

抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA原果胶（可溶性果胶）

抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL酚类黄酮木质素

3、测定方法：

褐变指数

色泽

失重率

腐烂率

呼吸强度

乙烯释放率

硬度

可溶性固型物

可滴定酸：

试剂：0.1mol/L NaO（4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定）1獅酞试剂

（1g酚酞加入到100ml50%勺乙醇溶液中溶解）

方法：1、NaOH的标定：准确称取105C下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾

0.6g，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%&酞

指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红色。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。

2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%&酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉色并30秒内不退色为终点（PH8.1-8.3 ）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度* （滴定滤液消耗的氢氧化钠体积一滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/ （滴定时所取滤液体积*样品质量）

Vc：

试剂：5%®酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA 溶液（称取6.3g草酸和0.75g EDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）

5%H2SO4体积分数）偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48ml,溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取

Vc100mg置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用）（如果纯度不够应进行标定）

提取及测定：1、制作标准曲线：7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂

1 2 3 4 5 6 7

试管号试剂

/ml0 0.1 0.20.40.60.8 1.0 Vc标准液/ml 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 EDTA溶液草酸/ml0.5 0.5 0.50.50.50.50.5 -乙酸溶液偏磷酸1:19H2SO4/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

1.0

/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 5%钼酸铵/mg 0 10 20 40 60 80 100V c 含量

加完试剂摇匀后，置30C水浴中保温15min,用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用1号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以Vc含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2、提取及测定：称取5g果蔬组织，加5ml草酸-EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25ml容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵，冲洗液一并倒入容量瓶中。取一部分匀浆液经3000g离心10min后，取1ml上清液与标准管同法测定，若样品显色液中出现沉淀，可过滤后进行比色，不影响测定结果。

计算公式：Vc含量（mg*100g-仆W =标准曲线上查的的Vc的量*样品提取液总体积/（测定时所用样品液体积*样品鲜重）注意：显色温度和加入显色剂后的时间要一致。

GSH

试剂：50g/L三氯乙酸（5g三氯乙酸和蒸馏水溶解稀释至100ml，再加入

186mgEDTA-Na2.2H2O0.1mol/LPH7.7 磷酸钠缓冲液和0.1mol/LPH6.8 磷酸钠缓冲液4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（15.8mgDTNB 用0.1mol/L、PH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，摇匀，4C保存）100umol/L还原性谷胱甘肽标准液（3g 还原型谷胱甘肽加入少量无水乙醇用蒸馏水定容至100ml）

实验步骤：1、标准曲线制作：

取六只试管编号，按下表加入各种试剂，混匀，于25E保温反应10min,以0 号管为参比调零，测定显色液在波长412nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，还原型谷胱甘肽为横坐标，绘制标准曲线。

管号项目

/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

液/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 还原型谷胱甘肽标

蒸馏

1 2 3 4 5 6

7 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

20 40 60 80 100 2、提取和测定：5g 果实加入经预冷的三氯乙酸，在冰浴下研磨匀浆，于 4C 、 12000xg 离心20min ,收集上清液测定。取一只试管，依次加入 1ml 蒸馏水、

1mlPH7.7磷酸缓冲液和0.5mlDTNB 混匀即为绘制标准曲线的0号管溶液，此液 作为参比调零。另取两支试管，分别加入 1ml 上清液、1mlPH7.7磷酸缓冲液， 然后向一只管中加入0.5mlDTNB 向另一支管中加入0.5mlPH6.8磷酸缓冲液。 将两只管置于25C 下保温反应10min ,迅速测定显色液在波长412nm 下的吸光度 值，分别记作ODs 和ODc 重复三次。

根据ODs-ODC 勺差值从标准曲线上查的还原型谷胱甘肽含量，计算每克果实中还 原型谷胱甘肽的含量：还原型谷胱甘肽含量=（标准曲线上查得的值*样品提取液 总体积）/ （吸取样品液体积*样品质量）注意：先做样品本底对照。.

MDA

试剂：100g/L 三氯乙酸（称取10g 三氯乙酸蒸馏水溶解稀释至 100ml ） 6.7g/L 硫代巴比妥酸（称取0.67g 硫代巴比妥酸，用100ml0.05mol/L 氢氧化钠溶解） 测定步骤：称取1g 果蔬样品，加入5ml 三氯乙酸溶液，研磨匀浆于4C 10000g 离心

20min ,收集上清液低温保存备用。取 2ml 上清液，对照空白管中加入 2ml 三氯乙酸代替提取液，分别加入 2ml0.67%硫代巴比妥酸，混合后在沸水浴中煮 沸20min ,取出冷却后再离心一次，分别测定上清液在 450nm 532nm 600nm 波 长处的吸光度值，重复三次。计算：丙二醛含量（umol/L ）

=6.45*（OD532-OD600）-0.56*OD450

每克果蔬中丙二醛的含量二丙二醛含量*样品提取液总体积/（测定时所取样品液 体积*样品质量*1000） 注意：岀现负值，表明糖的影响很大，需做预实验确定适宜的 条件。

原果胶（可溶性果胶）：

试剂：1.5g/L 咔唑-乙醇溶液（称取0.15g 咔唑加入无水乙醇 溶解并稀释至100ml ） 100ug/ml 半乳糖醛酸标准液（称取10mg 半乳糖醛酸,用蒸馏水溶解定容至

M=194100ml ） 浓硫酸 95%L 醇0.5mol/L 硫酸溶液

测定步骤：1、制作标准曲线：取6支25ml 具塞刻度试管，编号，按下表加入半 乳糖醛酸标准液，然后小心地沿管壁加入 6ml 浓硫酸，在沸水浴中加热 20min , 取出冷却至室温后，各加入0.2ml1.5g/L 咔唑-乙醇溶液，摇匀，在暗处放置30min 后，测定反应液在波长530nm 处的吸光度值，并以吸光度值为纵坐标，半乳糖醛 酸质量（ug ）为横坐标，绘制标准曲线求出方程。 管号项目

水/ml PH7.7/ml 剂 DTNB/umol 肽物质的量 磷酸缓冲液 试 相当于还原型谷胱甘