显微镜的使用和细胞形态的观察

显微镜的使用及微生物形态观察

人的眼睛只能识别大小为0.1 ㎜的物体。显微镜是精密的放大仪器，是生物学研究不可缺少的工具。我们用它可以观察肉眼看不见的微小生物的结构。中学最常用的是光学显微镜，为了正确操作、妥善保管和维护显微镜，使之延长使用年限，我们必须首先了解显微镜的结构和功能。一台显微镜包括机械装置和光学系统两大部分，注意比较和识别。

（一）、显微镜的基本结构：

显微镜构造很复杂，种类很多，但基本结构是由机械和光学两大部分构成，现分述如下：１、机械部分：

它是为光学部分服务的部件，包括以下九部分：

(1)、镜座：显微镜最下面呈马蹄形或园形的部分，起稳定和支持镜身作用。

(2)、镜柱：从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。

(3)、镜臂：弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。

(4)、载物台：自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。

(5)、镜筒：和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是１６０－１７０毫米。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜）。作用是保护成像的光路与亮度。

(6)、调节器（也叫调节螺旋）：为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。

(7)、倾斜关节：镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。

(8)、载物台：从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移动。

２、光学部分：由目镜、物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。

(1)、目镜：装于镜筒上方，由两组透镜构成，接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。接目镜上刻有５×，８×，１０×，１５×，２５×等符号，表

示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。如接物镜是１０×，接目镜是８×，其物像的放大倍数是１０×８＝８０倍。

在接目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。

(2)、物镜：装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有２～４个接物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有４×，１０×，４０×及１００×。４×及１０×接物镜是低倍镜，４０×是高倍镜，１００×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌，高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构，油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。

(3)、聚光器（集光器）：位于载物台（通光孔）下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入接物镜和接目镜，有的聚光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈，可调集光器口径的大小和照射面，以调节光线强弱（有的显微镜只有遮光极而无集光器）。光线过强时，可缩小虹彩光圈。

(4)、反光镜：是显微镜观察时获得光源的装置，位于显微镜镜座中央，一面为平面镜，一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。

显微镜的成像原理（放大原理）

光线→反光镜→遮光器→通光孔→标本（一定要透明）→物镜的透镜（第一次放大成倒立实像）→镜筒→目镜（再放大成虚像）→眼。

物镜的作用：使被观察物体成一个倒立的放大的实像。像投影仪的镜头。

目镜的作用：把物镜成的实像，再一次放大成虚像。像放大镜的镜头，把物体的像放大。

（二）显微镜的使用方法：

1、取镜安放：

取镜右手握住镜臂，左手平托镜座，保持镜体直立。（特别要禁止单手提着显微镜走，防止目镜从镜筒中滑脱）。

安放放置桌边时动作要轻。一般应在身体的前面，略偏左，镜筒向前，镜臂向后，距桌边7～10 ㎝处，以便观察和防止掉落。安放目镜和物镜。

2、取好光源（调光）：用显微镜观察标本前，先要取好光源。首先把显微镜放在自己左肩一侧台前，镜座距桌边约两寸，镜臂朝自己，镜筒朝外。用手转动物镜转换器，使低倍接物镜和镜筒成一直线，正对通光孔。用左眼从接目镜向下注视，同时用手拨动反光镜，让镜面对着光源，当看到园形镜界（视野）呈现光亮而均匀的时候即调好光了，如视野阴暗不明，则需再调节反光镜和集光器，直到视野明亮均匀为止。

3、低倍镜的使用：

观察任何标本都必须先用低倍镜。

(1)放置切片升高镜筒，把玻片标本放在载物台中央，标本材料正对通光孔的中心，用压片夹压住载玻片的两端。

(2)调焦将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央，玻片标本两端用压片夹夹紧，再用手沿顺时针方向旋转粗调节器，把镜筒徐徐降到接物镜头差不多接近玻片标本（约半厘米）为止（从侧面观察下降镜筒）。然后左眼观察，边观察边用调节器将镜筒徐徐上升（逆时针方向旋转粗调节器）直到发现物象，观察清晰为止。如果不够清楚，可用细准焦螺旋调节。（不可以在调焦时边观察边使镜筒下降，以免压碎装片和镜头。）

(3)低倍镜的观察由所用的目镜放大倍数与物镜放大倍数相乘，即为原物被放大的倍数。如果物像不在视野中央，要慢慢移动到视野中央，适当再进行调节。

4、高倍镜的使用

(1)选好目标如果要观察视野内某部分更细微的结构，则需要用高倍镜观察。先用低倍物镜确定要观察的目标，将其移至视野中央。转动转换器，把低倍物镜轻轻移开，原位置小心换上高倍物镜。再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整，至视野中出现物象，然后用细调节器调节到看清物象止。（用高倍物镜工作距离较短，操作要十分仔细，以防镜头碰击玻片）。

(2)调焦在正常情况下，当高倍物镜转正之后，在视野中央即可见到模糊的物像，只要向反时针方向略微调动细准焦螺旋，既可获得清晰的物像。

在换上高倍物镜观察时，视野变小变暗，要重新调节视野亮度，可升高聚光器或利用凹面反光镜。

5、油镜的使用：

高倍镜下观察的标本，如果放大倍数还不够，可用油镜，换用前，同样要先在高倍镜下观察，把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后，在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒，直立反光镜，使光学部件的光线不再对在一条直线上。

应当了解的是，在显微镜中观察到的物象是倒象，因此移动玻片时，应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片，同样要使物象向前移动，就要向后移动玻片。

6、使用后的整理

观察结束，应先将镜筒升高，聚光器下降，再取下切片，然后转动转换器，使物镜与通光孔错开，做好清洁工作。清洁完毕，再下降镜筒，使两个物镜位于载物台上通光孔的两侧，呈“八”字形，将反光镜转至与载物台垂直，罩上防尘罩，仍用右手握住镜臂，左手平托镜座，按号放回镜箱中。