【CN110079508A】一种噬菌体、噬菌体表达的解聚酶及其制备方法和应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910388278.3

(22)申请日 2019.05.10

(71)申请人 上海瑞宙生物科技有限公司

地址 201210 上海市浦东新区中国(上海)

自由贸易试验区高科中路1976号1幢

B201室

(72)发明人 何平　祝先潮　吴运强　刘畅　

杜娟　

(74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司

11332

代理人 巩克栋

(51)Int.Cl.

C12N 7/00(2006.01)

C12N 9/18(2006.01)

C12N 15/70(2006.01)

A61K 35/76(2015.01)A61K 38/46(2006.01)A61P 31/04(2006.01) (54)发明名称

一种噬菌体、噬菌体表达的解聚酶及其制备

方法和应用

(57)摘要

本发明提供了一种噬菌体、噬菌体表达的解

聚酶及其制备方法和应用，所述噬菌体命名为

SH -KP152302，

具有降解生物被膜的特性，噬菌体的基因组的第42位开放阅读框编码解聚酶，能够

特异性降解肺炎克雷伯菌的胞外荚膜多糖，抑制

生物被膜的形成，去除生物膜，并在抵抗生物膜

的形成过程中表现出剂量依赖的活性，可以作为

一种潜在的抗生素替代品。权利要求书1页 说明书9页序列表5页 附图5页CN 110079508 A 2019.08.02

C N 110079508

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110079508 A

1.一种肺炎克雷伯菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体的基因组的第42位开放阅读框编码解聚酶。

2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述肺炎克雷伯菌的wzi分型为K47荚膜型；

优选地，所述噬菌体的基因组包括至少28个功能基因。

3.一种如权利要求1或2所述的肺炎克雷伯菌噬菌体的分离方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)向污水中加入肺炎克雷伯菌，培养后收集上清液；

(2)将上清液点斑于双层琼脂平板上，纯化后得到单一斑块；

(3)向单一斑块中加入缓冲液，搅拌后静置，收集液体和上层琼脂；

(4)离心取上清，采用PEG-8000富集，氯化铯密度梯度离心1h，得到噬菌体颗粒。

4.一种如权利要求1或2所述的噬菌体表达的解聚酶，其特征在于，所述解聚酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

优选地，所述解聚酶的结构域包括T7噬菌体尾丝蛋白、果胶酸裂解酶、含氮氧化酶和右手β螺旋结构域；

优选地，所述解聚酶为85kDa。

5.编码如权利要求4所述的解聚酶的核酸序列；

优选地，所述核酸序列如SEQ ID NO:2所示。

6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求5所述的核酸序列。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5所述的核酸序列和/或如权利要求6所述的表达载体。

8.一种如权利要求4所述的解聚酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1’)采用如SEQ ID NO:3-4所示的引物对，从噬菌体的基因组中扩增得到第42位开放阅读框，并在扩增产物的两端引入SacI和HindIII的限制性位点；

(2’)将扩增产物插入pSUMO3的SacI和HindIII酶切位点，转化入大肠杆菌，氨苄青霉素抗性筛选得到重组菌株，并进行IPTG诱导表达；

(3’)将表达产物进行组氨酸纯化后得到SUMO-解聚酶融合蛋白，加入SUMO蛋白酶，得到所述解聚酶。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括解聚酶；

优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

10.一种如权利要求1或2所述的噬菌体、如权利要求4所述的解聚酶、如权利要求5所述的核酸序列、如权利要求6所述的表达载体、如权利要求7所述的宿主细胞或如权利要求9所述的药物组合物在制备肺炎克雷伯菌抑制剂、治疗肺炎克雷伯菌感染药物、抗生素替代制剂或消毒剂中的应用。

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