检查精子穿透能力

检查精子穿透能力

1．精子穿透粘液玻片试验

这一试验的优点是方法简单，主要用于比较宫颈粘液质量，诊断由于宫颈粘液粘稠所致的不孕，鉴别夫妻间不孕不育的原因，于人工授精时了解受试者粘液性质以及测试粘液质量。

取一载玻片，将排卵期宫颈粘液一滴滴于载玻片上，在距其4mm处另外滴一滴液化好的精液，用盖玻片轻轻盖上，使两个标本恰好接触，而又不重叠，然后在37℃条件孵育10-15分钟，镜下分析即可。正常情况下，于15分钟即可见有多数精子进入粘液滴内，进入的方式是通过一个领先精子首先突破阻力，其余精子由诊通道循序鱼贯而入，在粘液内自由活动。当精子或粘液任一方有异常时，精子不能通过两个标本液体接触界面进入粘液，而是呈扇形分布。

2．精子穿透毛细玻璃管试验

这一试验是由Kremer首先创造并设计了Kremer精子穿透计。其基本原理是采用一根长10cm，内径为0。2-1。2mm的圆柱形毛细玻璃管，管内充满介质，毛细管一端用胶泥封口，另一端插大容量为0。5ml的精液池内，将穿透计置37℃恒温水浴箱中孵育1小时，取出置显微镜下观察并记录精子穿透高度，试验结果的评价标准有二种：

（1）1小时后观察毛细玻璃管内领先精子到达的高度（mm），以游动的活精子为止点。

（2）世界卫生组织推荐的方法：评价时间可为10分钟，30分钟，3小时或24小时。评价内容包括：

1）活动力：按毛细管上1/3段中精子的前向运动分为0-Ⅲ级。

2）穿透密度：选择精子最多的一段毛细管，计算其中的精子数。

3）穿透深度：领先精子的高度（mm）。

0级：无前向运动；

Ⅰ级：前向运动精子占25%；

Ⅱ级：前向运动精子占25％-50%；

Ⅲ级：前向运动精子>50%。

常用来作穿透试验的介质有以下几种：

①正常排卵期宫颈粘液：取材应为婚后近期内有生育史的妇女，身体健康，无生殖系统

炎症。粘液的物理性状正常，粘滞性低，干燥后有羊齿状结晶形成。由于正常排卵期妇女宫颈粘液取材不易，一次用不完的粘液可贮存于试管中，管口用石蜡纸封闭，避免脱水，放入4℃冰箱保存，1周内仍可使用。

②动情期母牛宫颈粘液：其来源较人的容易且量多，国外文献报道牛的粘液的物理性状、颜色、拉丝度、弹性等与人相似，干燥后也可见羊齿状结晶，可以代替人的宫颈粘液。在取材时应先消毒牛的外阴，取得的粘液须经物理检查和穿透鉴定后方可使用。牛的宫颈粘液可保存于4℃冰箱，1周内仍可使用。

③精子营养液加白蛋白液：NaC17．721g，果糖1g，KH2PO40．136g，MgSO40．247g，Na2HPO43．581g，加蒸馏水至1000ml，调pH至7．4，存放4℃备用。用时取25%人体血清白蛋白1ml，加入6ml精子营养液混匀后即可使用。也有用150mg牛血清白蛋白溶于5ml精子营养液中做为穿透介质。

④鸡蛋清：新鲜鸡蛋黄周围较清稀部分的蛋清也是很好的穿透介质。蛋清的物理性状同排卵期妇女的宫颈粘液相似，透明无色，有粘滞性，内含多种蛋白质及有机物，精子在蛋清介质中穿透自由。

为保证试验结果的准确可靠，应注意以下几点：精液要求新鲜，禁欲5天，取精液后让其液化，1小时内做穿透试验；穿透介质要新鲜可靠，不可有污染；毛细管顶端装入介质并封闭后应静置10分钟，无气泡后才能使用，因气泡阻止精子前向运动；检测时系统的温度应保持恒温37℃。

3．性交后试验

本试验是通过观察性交后若干小时内宫颈粘液中活动的精子数，以评价精子功能。试验时首先根据基础体温，宫颈粘液，超声波等项检查确定排卵期，时间应掌握在宫颈粘液将有羊齿状结晶出现时进行。试验前禁欲3天，性交后分别于2、4、6、10小时取宫颈粘液作显微镜检查。用吸管或不带针头的注射器分别吸取阴道后穹窿、宫颈口、宫颈管的粘液标本。

穹窿部的标本中精子常在2小时后失去活动能力，检查穹窿部标本的目的在于查明精子是否进入阴道。宫颈口标本在正常情况下每高倍视野有20个以上活动力为Ⅱ-Ⅲ级的精子，如果每一视野下出现10个以上Ⅲ级前向直线运动的精子，也可表示正常。宫颈管标本在性交后6-10小时内检查，正常每高倍视野内有10-15个以上活动力在Ⅱ-Ⅲ级的精子，这一段时间是确定精子在宫颈粘液活力及寿命的理想时间。

宫颈粘液正常，而性交后试验异常者应考虑以下因素：①性交因素：性交方法错误，精液未排入阴道或不射精；②阴道因素：由于阴道炎症感染或pH改变使排入阴道内的精子失活；③精液因素：少精子症，精液量少，液化不良，或精浆异常引起精子活力下降；④宫颈因素：宫颈管解剖异常，粘连狭窄，子宫颈炎症，感染及宫颈粘液存在精子抗体；⑤其他因素：试验时间不合适，为非排卵期，宫颈粘液黄而稠厚，羊齿状结晶不典型。

4．精子穿透仓鼠卵试验

Yonagimachi于1976年首先报道了去透明带仓鼠卵人精子穿透试验，经过近十几年的发展，该方法现已被广泛用于检测评价人精子的受精能力。这一技术适用于分析精子的受精能力，异常精液者治疗后的疗效观察，人工授精标本的质量评价以及体外受精前评价丈夫或供精者的精子质量。