精子-宫颈粘液相互作用的检查方法与意义

人类精子功能状况检查

第一节精子-宫颈粘液相互作用检查

一、体内试验（性交后试验postcoital testing PCT）

1.时间的选择：

性交后试验应尽可能紧靠排卵期进行。排卵期可根据通常得临床指标，即通常得周期长度，基础体温、宫颈粘液变化和阴道细胞学检查，如有可能，也应测定血浆或尿中得雌孕激素水平及进行卵巢超声检查来确定。嘱每对夫妇于试验前避免性生活。重要的是要使性交后试验评价宫颈粘液得时间标准化，这一时间应是9-24小时内。

2.试验技术：

选择不加润滑剂得窥阴器放入阴道，再用结核菌素注射器（不带针头），吸管或聚乙烯管在阴道后穹窿部吸取混合标本。然后再用另一注射器或导管吸取宫颈腔中的粘液标本，并迅速地将这些标本置于载玻片上，盖上盖玻片，在相差显微镜下检查。压制标本的标准厚度可用硅胶浸渍过直径为100μm 的玻璃微球支撑控制，这样做可以使测定粘液中的精子浓度标准化。

3.阴道混合标本：

通常精子在阴道内2小时即死亡，检查阴道混合标本得目的在于证实精液确系曾存在于阴道内。

4.宫颈粘液标本：

宫颈管下部的精子数目随性交后时间的推移而改变。在性交后2-3小时内，在宫颈管下部积聚大量精子。

宫颈粘液中的精子活力分级问题，仍要依据世界卫生组织规定的标准，即：

a级，快速直线前向的前向运动；

b级，缓慢或呆滞得前向运动；

c级，非前向性运动；

d级，不活动精子。

5.结果的评价：

正常妇女在周期中期与精液指标正常得男子性交后9-24小时内，宫颈内粘液在每高倍视野（HPF，400×）通常有50个以上得活动精子，其活力属于a,b两级，即相当于2500条以上精子/mm3。每高倍视野中有20条或更多的“a”级前向运动的精子即可认为结果良好。如每高倍视野中精子不足10条（＜500mm3），特别是只有缓慢或转圈得“b”级精子，则表现精子穿透能力减轻或宫颈粘液异常。

性交后试验的目的不仅是为了测定宫颈粘液中得活精子的数量，而更重要得是确定性交后一定时间内精子存活和运动情况。

二、体外试验

1.玻片试验：

①方法：

将一滴宫颈粘液置于玻片上，用盖玻片（22m×22m）铺平。盖片之间得标准厚度用硅化的100μm玻璃微球来控制。载玻片两侧各滴一滴精液，使与盖玻片边缘接触，借毛细作用精液移向盖玻片下，这样就在宫颈粘液和精液之间出现一清晰的接触界面。该玻片置于湿润的温箱中，37℃温育30分钟。

几分钟内，精液在接触界面处形成一些指状突起深入粘液。大多数精子在穿透粘液前，先穿过指状突起通道。在很多情况下，似乎是一个为首的精子引导一纵列精子进入粘液。一旦进入宫颈粘液，精子群便呈扇形散开，并随意游动。有些精子返回精浆层，大多数都继续向宫颈粘液深处游动，直至遇到细胞碎片活着细胞的阻力才停止前进。

应该承认，这种玻片法试验结果时常带有一定的主观性。故本试验只能作为定性地评估精子-粘液相互作用结果。

②结果评定：

本试验几项有参考价值得指标：

a．精子穿透粘液，并有90%以上具有明显直线运动的精子（正常结果）；b．精子穿透粘液，但离开精液-粘液接触界面的距离小于500μm（约10条精子长度，结果差）；

c．精子穿透粘液，但很快失活或仅作摆动（异常结果）；

d．精子未穿透精液-粘液接触界面，指状突起形成不明显或尚未形成，但精子沿接触界面的精液侧凝集（异常结果）。

必须特别指出的是，采用同一份宫颈粘液标本来测量精子的穿透能力，才是评价精子功能试验。

三、精子-宫颈粘液接触试验（SCMC）：

1.试验方法：

取少量（10-50μl）排卵前宫颈粘液和大致等量的新鲜精液置于玻片的一端，将二者充分混匀。取一滴同一精液标本，置于载玻片的另一端。精液-粘液混合物和精液滴都用盖玻片覆盖，然后放入湿润培养皿中，室温下置30分钟，计算摆动迅速的活动精子百分率。以单独的精液滴作为精子活力的对照，不活动、非前向缓慢活动不作活动精子计数，间歇前向的、和缓慢前向运动的精子作为活动精子计数。

2.结果解释：

本试验的结果在于初步评价精子或（和）宫颈粘液是否有精子抗体存在，因为抗精子抗体抑制精子穿透和游动高度，即摆动高百分率在多数情况下，存在抗精子抗体。

四、精子-宫颈粘液相互作用检查中的毛细管试验

1.试验器材：

一根扁平的毛细管，长10cm，横截面3m m×0.3mm，用特殊尖细记号笔在毛细管壁上每隔1cm作一标记。

2.试验方法：

用射精后不超过1小时的新鲜精液，将宫颈粘液吸入毛细管，却不可吸进气泡。通过弹性密封剂如硅酮胶密封的巴斯德滴管大头制成的简单多支移液管完成毛细管的充填。在密封剂上制一个扁形小孔，以它将扁平毛细管插入其中，将扁平毛细管的开口端放入粘液池中。从管的另一端吸入足量的粘液，使半月型液面到管顶端的距离不超过2-3cm。从毛细管下端的入口处，切断被牵拉起的粘液，用

代用粘土、模型土或类似物封闭毛细管的上口。封管时应用足量的封闭剂，以便使粘液稍突出于毛细管的开口。装管结束后，应在显微镜下观察毛细管粘液中是否有精子存在，如果有精子存在的话，必须检测其数量和运动情况，以便在分析新鲜精子的穿透力时进行校正。

取少许充分混合的精液（50μl）于诸如NO，OO BEEM囊的贮粘液容器中，并在其盖上切一裂口以便毛细管的插入得到支撑。这样，在精子穿透过程中毛细管一直保持垂直位。如果贮液器没有盖，则应该将毛细管固定，使之基本保持垂直，并用海绵或手帕覆盖贮液器开口。试验操作时的温度应保持在标准的37℃，否则，影响结果的客观性。

3.结果的评估问题：

该试验主要是测定有穿透力精子沿毛细管流动的距离和密度。这一信息被综合成为一单一的定量计分标准。在精子放入粘液1小时后，将毛细管从贮液器中取出并用盐水冲洗开口端，或最好用二硫苏糖醇（DTT）或羟基乙醇冲洗，以便从粘液界面和毛细管表面去除残余精子。在40倍相差显微镜和10倍目镜的显微镜下观察。在毛细管的1cm，4cm，7cm标记处的3个视野中分别计数精子，测定3个视野中每组的精子总数，并以毛细管中任何先进入的精子进行校正。用已知显微镜视野区中的mm2的精子数表示。这个区域的面积可用镜台测微计测定。也要记录位于最前面的“先头部队”的精子位置。试验结果用等级分表示，最高为20，这个分数等于毛细管1cm，4cm，7cm处每平方毫米精子分数加上位于先头部队的精子分数总和。

计算方法总结表

精子数/ mm2 分 数 最前面精子的游动距离（cm） 分数

0 0 ＜ 30

1-30 1 ≥3- ＜4 1 31-60 2 ≥4- ＜5 2

61-120 3 ≥5- ＜6 3

121-200 3 ≥6- ＜7 4 ＞200 5 ≥7