银杏叶提取物国际商务标准编制说明

《银杏叶提取物国际商务标准》

编制说明

一、工作简况

本标准的制定工作，是由中国医药保健品进出口商会提出而进行的，由中华人民共和国商务部归口，中国医药保健品进出口商会标准化技术委员会负责解释。本标准由浙江康恩贝制药股份有限公司负责起草，北京绿色金可生物技术股份有限公司、晨光生物科技集团股份有限公司、重庆科瑞南海制药有限责任公司和上海诺德生物实业有限公司等单位复核。标准主要起草人为王如伟、方玲、姚建标、叶剑锋、姚德中、苏一多、章江生、雷凯琴、胡江宁、何厚洪、吴旭明、吴健、乔洪翔。

二、标准制订的目的及意义

银杏叶提取物(Ginkgo leaves extract)是以银杏叶为原料经提取分离制成的植物提取物，是我国乃至世界上重要的天然药物原料之一。中国是银杏的主产地，由于竞争激烈，各厂家生产设备及工艺水平参差不齐，部分银杏叶提取物厂家为了使产品主要化学指标符合客户标准，采用水提、半萃取，掺入银杏树皮、根皮与银杏叶共同提取，或掺入含有芦丁、槲皮素或山奈素结构的物质共同提取，使用甲醇、工业乙醇提取，这些不当的商业行为，不仅混乱了产品的质量构成，还严重干扰了市场秩序，损害了产品、行业乃至国家声誉，使得银杏叶提取物出口行业境况举步维艰。随着美国药典、欧州药典对EGB质量标准的修订和不断改进，国外企业在国内的银杏种植基地与产业基地逐步发展壮大，势必对我国的EGB行业构成实质性的冲击。目前，如何跟进美国药典、欧洲药典银杏叶提取物标准，提高国内EGB的标准，保证银杏叶提取物的质量稳定性，保证人民用药安全是第一紧迫任务。为了进一步规范国内银杏叶提取物在生产、贮存、运输过程中的质量管理，特制定本标准。

三、国内外有关法律法规和其他标准的关系

银杏叶提取物标准已收载于《中国药典》2010年版一部、USP36-N31和EP7.0。不同药典标准中，银杏总黄酮醇苷、银杏内酯及银杏酸的样品前处理方法、含量测定方法、含量计算方法及标准限度等方面均存在一定的差异。

四、标准的制订与起草原则

本标准遵循《中华人民共和国药品管理法》、现行版《国家药品标准工作手册》和《中国药品检验标准操作规范》的有关规定，参照《中国药典》2010年版、USP36-NF31和EP7.0中银杏标准、及GB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准等，制定本标准。

五、确定各项技术内容

样品来源：银杏叶提取物主要由浙江康恩贝制药股份有限公司，样品批号为（120204、120318、120505等）；部分样品为市售银杏叶提取，样品批号为（110901、111104、111224等）；对照品芦丁、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果新酸、总银杏酸对照品、银杏叶对照提取物：中国食品药品检定研究院提供。

1 工艺要求

参照《中国药典》2010年版一部银杏叶提取物标准，本品为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba L.）的干燥叶经加工制成的提取物。其制法为：取银杏叶，粉碎，用乙醇和水一定比例混合溶液提取，浓缩，稀释，沉淀，经大孔吸附树脂吸附、洗脱，洗脱液回收乙醇，干燥，粉碎，过80目筛，即得。

2 感官要求

对本品三批样品，嗅其气味和尝其滋味；另取试样适量置于白色瓷盘中观察其色泽、外观，并检查有无异物，结果见表1

表1 银杏叶提取物感官要求

批号120204 120318 120505

色泽浅棕黄色至棕褐色浅棕黄色至棕褐色浅棕黄色至棕褐色

气味气微，味微苦气微，味微苦气微，味微苦

外观均匀，无可见异物的粉末均匀，无可见异物的粉末均匀，无可见异物的粉末

根据观察结果，本标准规定银杏叶提取物的感官要求描述为：本品为浅棕黄色至棕褐色粉末；气微，味微苦；外观均匀，无可见异物。

3 理化指标

表2 理化指标

3.1 鉴别

按中华人民共和国药典（2010版）一部银杏叶提取物【鉴别】项下要求：

鉴别（1）取本品0.2g，加正丁醇15ml，置水浴中温浸15分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取银杏叶对照提取物0.2g，同法制成对照提取物溶液。照薄层色谱法（药典附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3μL，分别点于同一以含0.4 %醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365mn)下检视。供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

三批提取物鉴别结果见下图。

鉴别(2) 照薄层色谱法（药典附录VI B)试验，吸取〔含量测定〕项下萜类内酯的供试品溶液和对照品溶液各15μL，分别点于同一以含0.4 %醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（10:5:5:0.6)为展开剂，在15°C以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸气熏15分钟，在140~160°C加热30分钟，放冷，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

三批提取物鉴别结果见下图。

3.2 总萜类内酯含量测定

银杏萜类内酯是银杏叶提取物中最重要的活性成分之一。对比国内外药典标准，针对内酯的含量检测，

在检测器、样品前处理、色谱条件、含量计算方式等方面，均存在一定差异。

检测器方面：目前主要采用的检测器有ELSD（如Ch.P、USP）和折光仪检测器（如EP）两种，国内外很多报道的文献，大多采用ELSD检测器，因此本标准仍采用ELSD检测器来检测银杏叶提取物总萜类内酯。

含量计算方式方面：Ch.P标准采用外标两点法对数方程来分别计算各分内酯的含量；USP标准采用标准曲线法对数方程来分别计算各分内酯的含量；EP标准采用苯甲醇为对照分别计算各分内酯的含量（折光仪检测器，暂不考虑）。研究认为，Ch.P标准的两点法和USP标准的标准曲线法，本身并不存在太大差异，但是由于两点法受对照品浓度大小的限制，加之国内银杏叶提取物规格众多，容易出现同一个样品中，个别内酯测定的峰面积不在对照品相应两点范围内，如此计算所得结果准确性存在一定问题；同时，两点法所得k、b值的重复性，不如标准曲线法所得k、b值重复性好，测定误差相对较大。因此，为保证银杏叶提取物总萜类内酯测定结果更准确、可靠，本标准参考USP银杏叶提取物标准，采用标准曲线法对数方程来分别计算各分内酯的含量。

样品前处理及色谱条件方面：Ch.P2010银杏叶标准采用酸性氧化铝柱纯化，流动相甲醇-THF-水系统测定，银杏叶提取物标准采用乙酸乙酯萃取，流动相正丙醇-THF-水系统测定；USP标准采用硅藻土柱纯化，流动相甲醇-水系统梯度洗脱；EP标准采用硅藻土柱纯化，流动相THF-甲醇-水系统测定。本研究首先对供试品前处理方法进行了对比研究，供试品批号120204、120318，结果如下表。

表3不同前处理方法对比

前处理方法试剂来源、规格总内酯含量/（%）120204 120318

乙酸乙酯萃取国药，分析纯7.69 7.01

硅藻土柱纯化国药进口分装7.78 7.18 结果表明，乙酸乙酯萃取和硅藻土柱纯化相比，柱纯化测定结果相对含量稍高，总体上总内酯含量并没有太显著差异。由于萃取法操作步骤较多，过程比较复杂繁琐，柱纯化方法操作更便捷，在保证含量测定结果没有显著差异的情况下，优选柱纯化方法。采用同一批供试品（批号120204）对不同柱纯化填料进行了考察，结果见下表。

表4不同前处理填料对比

前处理方法试剂来源、规格填料用量/（g）洗脱剂/用量总内酯含量/（%）硅藻土柱纯化1 Merck 15g 乙酸乙酯/100mL 7.88

硅藻土柱纯化2 Agela 15g 乙酸乙酯/100mL 7.32

硅藻土柱纯化3 国药进口分装15g 乙酸乙酯/100mL 7.80

酸性氧化铝柱纯化国药，100-200目3g 甲醇/50mL 7.85

对比不同填料，只有Agela厂家的硅藻土前处理测定结果偏低，Merck和国药进口分装的硅藻土处理测定的含量和酸性氧化铝处理（暂参考Ch.P银杏叶标准，酸性氧化铝3g，200-300目，柱内径1cm，甲醇