大蒜SOD酶性质研究

大蒜SOD酶性质研究

摘要：超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)是生物体内专一清除超氧阴离子的蛋白酶。自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。

大蒜是SOD含量较丰富的天然植物之一。本论文探讨了从大蒜中提取与纯化SOD的工艺路线、优化条件、纯化效果及大蒜SOD的生化性质。实验结果表明，经过三次纯化，大蒜SOD的比酶活有显著提高；且大蒜SOD具有较好的热稳定性，在60℃时酶活达到最大，总体呈先增后减的趋势。

关键词：大蒜；超氧化物歧化酶；纯化；性质

Abstract：Superoxide Dismutase is a kind of important enzyme in organism，which can specifically eliminate the superoxide anion.SOD are very widespread in nature, and its content varies with the organism, even with a biological

or different organizations in different parts of the same organization, the type and content of SOD is also very different.

Garlic is rich in SOD content of natural plants.This thesis discusses the process route ,optimum conditions

,result of purification about the extraction and purification of SOD from garlic and the biochemical properties of garlic SOD.Experimental results show that after three purification, activity of garlic SOD was significantly improved.Garlic SOD has good thermal stability and maximum activity at 60 ℃.First increase after reduction of the overall trend showed.

Key words:garlic; superoxide dismutase;purification

; properties

大蒜是人们喜爱的一种香辛蔬菜和调味料，历来被认为具有保健和治疗作用，其活性物质主要是蒜氨酸和超氧化物歧化酶(SOD)。SOD是生物体内产生的超氧阴离子自由基的清除剂，具有抗衰老，提高机体对多种疾病的抵抗力，增强机体对外界环境的适应力，减轻肿瘤患者在放疗、化疗过程中的严重毒副作用等生理功能。所以在医药、食品、化妆品、

农业等方面都具有广泛的应用。大蒜中SOD含量较高，其活性是一般果蔬的数倍，被认为是人类重要的SOD来源。本文以市场上销售的大蒜为材料，通过分离提取大蒜的SOD 粗酶，并用氯仿一乙醇沉淀、丙酮沉淀、硫酸铵分级沉淀对SOD粗提物进行分离纯化，测定大蒜不同温度下SOD活力变化，为今后实际研究或提取大蒜的SOD粗酶提供一个选择依据。

1.试剂与仪器

1.1实验材料

市售新鲜大蒜

1.2试剂配制

（1）0.05mol／L磷酸缓冲液(pH为7．8使用91．5mLO．05 ml／L NaHPO4与8．5 mL O．05mol／L NaH2PO4配置而成);

（2）氯仿一乙醇混合液(氯仿：乙醇为3：5)

（3）标准蛋白质溶液：（用移液枪吸取1ml浓度为1mg/ml 标准蛋白质溶液，溶于蒸馏水并定容至10ml，制成0.1mg/ml 的原液）、

（4）考马斯亮蓝G-250(0.01%)染液:（称取0.01g考马斯亮蓝G-250,溶于5ml 90%乙醇中，加入85%（m/v)的磷酸10ml,最后用蒸馏水定容至100ml（此溶液不宜久存，在常温中可放置1~2个月），将定容好的染液过滤并装入棕色瓶中保存）

（5）130mmol/l甲硫氨酸溶液（称1.9399gmet用磷酸缓冲液定量至100ml）

（6）750umol/l NBT（称0.06133gNBT PBS定量至100ML （避光）

（7）100umol/L EDTANA2（称0.03721g EDTANA2，用PBS定量至100ml）

（8）20umol/l核黄素（称0.0753G核黄素用蒸馏水定量至100ml（避光））

（9）

1.3主要仪器

电子天平、研磨皿、离心机(5000rpm)、水浴箱、可见光分

光光度计、温度计等。

2.实验方法

2.1酶液提取纯化

2.1.1提取大蒜ＳＯＤ粗提液：将蒜瓣去外膜，取5g置于研钵中研磨至蒜泥状，加入3倍体积的磷酸缓冲液，浸泡30～45min后用6层纱布抽滤，将滤渣再用2倍体积磷酸缓冲液浸泡30 min后，6层纱布抽滤。如此反复共3次，收集3次抽滤所得滤液. 粗酶液中加入0．6倍体积的冷丙酮，搅拌15 min，5000 r／min离心15 min，得到SOD沉淀，将SOD 沉淀溶于磷酸缓冲液中，于55～60℃热处理15 min，5000 r／min离心15 min，弃去沉淀，得到40mlSOD酶液。

2.1.2第一次纯化（氯仿一乙醇沉淀法）：将氯仿一乙醇混合液，按酶液体积的O．25将其加入酶液中，搅拌15 min，5000 r／min离心15 min，弃沉淀，将上清液置于试管中静10min后测其SOD酶活力。

2.1.3第二次纯化（丙酮沉淀法）：粗酶液中加入O．6倍体积的冷丙酮，搅拌15 min，5000 r／min离心15 min，得到SOD沉淀，将SOD沉淀溶于磷酸缓冲液中，于55～60℃热处理15min，5000 r／min离心15min，崎岖得到SOD酶液。测其SOD酶活力。

2.1.4第三次纯化（硫酸铵分级盐析法）：将硫酸铵晶体研磨