大孔树脂纯化总黄酮工艺

大孔树脂提取银杏叶中总黄酮最佳工艺

摘要: <目的>考察大孔树脂对银杏叶中总黄酮的静态吸附和动态吸附以及解吸的最佳工艺条件。<方法>采用多种树脂对银杏叶中总黄酮进行静态和动态吸附, 以总黄酮的吸附量或解吸量为指标, 分别考察了过柱次数、时间、水洗量、上样浓度、洗脱机浓度和用量以及泄露曲线的考察。关键词:银杏叶/化学; 总黄酮/分析; 大孔树脂;静态吸附；动态吸附; 紫外线，分光光度法

一、实验器材

1.1 主要实验材料与试剂

大孔吸附树脂,：AB-8、LKY-02、HPD750、MD130、D101、HPD450、HPD5000、MD131；

银杏叶、工业乙醇

1.2 主要实验器材与设备

紫外可见分光光度计、粉碎机、真空干燥器、水浴锅、提取装置、电子天平、旋转蒸发器、恒温振荡器。

二、实验步骤与结果

1.1 标准曲线的绘制

精确称取芦丁1mg。用60%乙醇溶解并定容到25ml容量瓶中，摇均配制得0.4mg/ml的标准溶液。分别准确量取该芦丁标准溶液0、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.50mL到10mL容量瓶中，分别加60%乙醇到溶液3ml，摇匀；分别加入5%NaNO2溶液0.30mL，摇匀静置6min；再每个容量瓶分别加入10%A1（NO3）3溶液0.30mL，摇匀后静置6min；再每个容量瓶分别加入4.00mlL4%NaOH溶液，用60%乙醇溶液稀释定容至刻度线，摇均静置15min后，在510nm处测吸光度。以不加芦丁标准品的溶液为空白对照。（吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图一）

图一

2、提取银杏叶中总黄酮

2.1提取时间探究:称取银杏叶粉末5g五份,分别加体积分数60%的乙醇加热回流提取, 每份15倍量的溶剂，保持在75°C下分别提取1、2、3、4小时后过滤。测吸光度。结果如下

时间（h） 1 2 3 4

吸光度0.178 0.183 0.213 0.195

提取率(%) 0.516 0.516 0.71 0.64

乙醇浓度60%

物料比1：15

温度80°C

2.2乙醇浓度探究:称取银杏叶粉末5g四份,分别加体积分数20%40%60%80%的乙醇加热回流提取, 每份6倍量的溶剂，保持在75°C下提取2小时后过滤。测吸光度。结果如下

乙醇浓度（%）20 40 60 80 吸光度0.600 0.704 0.661 0.649

提取率(%) 0.6 1.16 1.29 1.01 时间2h

物料比1：6

温度75°C

2.3物料比探究：称取银杏叶粉末5g五份,分别加体积分数60%的乙醇加热回流提取, 分别以4、6、8、10、12倍量的溶剂，保持在75°C下提取2小时后过滤。测吸光度。结果如下

物料比1：4 1：6 1：8 1：10 1：12 吸光度0.64 0.536 0.541 0.425 0.402 提取率(%) 0.8 0.9 1.2 1 1.15 时间2h

乙醇浓度% 60

温度75°C

2.4提取温度探究：称取银杏叶粉末5g四份,分别加体积分数60%的乙醇加热回流提取, 以8倍量的溶剂，分别在50、60、70、80°C下提取2小时后过滤。测吸光度。结果如下

温度（°C）50 60 70 80 吸光度0.366 0.466 0.553 0.443

提取率(%) 0.8 0.9 1.2 1 时间2h

乙醇浓度% 60

物料比1：8

2.5提取结果：通过以上单因素实验表明提取银杏叶中总黄酮的最佳工艺为提取时间3小时，乙醇浓度为40%，物料比为1：6，提取温度70°C时最大提取可达1.29%。

3、银杏叶总黄酮大孔树脂静态吸附初探

3.1提取液的准备：按照上面最佳提取方法提取足量黄酮备用。

3.2静态吸附：将已预处理完的八种大孔树脂（AB-8、LKY-02、HPD750、MD130、D101、HPD450、HPD5000、MD131），各称取0.1g，分别置于100ml锥形瓶中，精确加入40ml一定总黄酮浓度的银杏叶提取液，置于25°恒温振荡器中震荡，分别在2、4、6、8、24h时吸取1ml 溶液进行吸光度测定，并计算吸附容量和吸附率。结果如下

时间（h）树脂2 4 6 8

12

吸光度

AB-8 0.164 0.155 0.140 0.139 0.520

LKY-02 0.150 0.146 0.136 0.135 0.140

HPD750 0.168 0.152 0.136 0.143 0.146

MD130 0.169 0.164 0.149 0.148 0.178

D101 0.167 0.162 0.150 0.145 0.170

HPD450 0.183 0.167 0.156 0.156 0.164

HPD5000 0.180 0.157 0.151 0.150 0.160

MD131 0.175 0.168 0.159 0.160 0.162

3.3吸附结果：实验表明树脂LKY-02吸附能力好，并在6h时基本达到饱和。

4、银杏叶总黄酮大孔树脂动态吸附探究

4.1大孔树脂对银杏叶中总黄酮吸附次数实验

取一定量（径高比1：4）预处理好的树脂LKY-02装入3*30cm玻璃制层析柱中，量取一定量提取液过树脂柱，上柱次数分别为1、2、3、4、5次，分别收集过柱液，取0.5ml测定吸光度。

上柱次数 1 2 3 4 5

吸光度0.507 0.459 0.448 0.401 0.393

4.2大孔树脂对银杏叶中总黄酮连续吸附实验

吸附质与吸附剂的接触时间在吸附操作过程中是个重要的影响因素。在进行动态树脂吸附实验中，同样有必要考虑时间因素对吸附效果的影响。

取一定量（径高比1：4）预处理好的树脂LKY-02装入3*30cm玻璃制层析柱中，量取一定量提取液过树脂柱，控制好流速，将接出的过柱液与样品耶合并连续上样吸附，并分别在15、30、45、60、75、90min时接取1ml过柱液，测其吸光度。

时间

（min）

15 30 45 60 75 90

吸光度0.473 0.62 0.439 0.420 0.403 0.372 4.3大孔树脂对银杏叶中总黄酮的上样浓度实验