产气荚膜梭菌
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❖ 专性厌氧 ❖ 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、湿润，
双层溶血环 ❖ 卵黄琼脂平板：Nagler反应 ❖ 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 ❖ 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖
产气荚膜梭菌－－临床意义
❖ 致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 ❖ 所致疾病：
气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎
产气荚膜梭菌－－检查方法
❖ 优杆菌属
❖ 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群
❖ 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正 常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥 重要作用
厌氧性球菌
❖ 消化球菌属：革兰阳性球菌
❖ 消化链球菌属：革兰阳性球菌
❖ 韦荣球菌属：革兰阴性球菌
测验1
❖ 正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌
❖ 专性厌氧 ❖ 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑，有
腐败恶臭
肉毒梭菌－－临床意义
❖ 致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引起肌 肉驰缓型麻痹。
❖ 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 ❖ 所致疾病 ❖ 肉毒食物中毒 ❖ 婴儿肉毒病
肉毒梭菌－－检验程序
毒素测定
标本 分离培养
疱肉培养 毒素测定
可疑菌落
厌氧菌特点
特点
芽胞厌氧菌
无芽孢厌氧菌
种类
1个菌属
40多属
分布
自然界
人和动物体内
致病
外源性感染
内源性感染
多以外毒素致病 多为条件致病菌
厌氧菌感染的临床及细菌学特征
❖ 感染发生于黏膜附近 ❖ 深部外伤 ❖ 感染局部有气体产生 ❖ 分泌物有恶臭或暗血红色 ❖ 某些抗生素治疗无效的感染 ❖ 标本直接涂片细菌染色不均 ❖ 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养
厌氧菌－－分离培养
❖ 初代培养：
厌氧培养48h ❖ 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试验，
每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和 厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培 养生长的菌落进行鉴定
厌氧菌－－鉴定
❖ 菌体形态： ❖ 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 ❖ 药敏鉴定试验：
卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属多耐 药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链球菌 ❖ 生化反应 ❖ 气相色谱技术
❖ 非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生素K
❖ 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌
厌氧菌－－厌氧培养法
❖ 厌氧罐培养法 ❖ 厌氧器袋法 ❖ 厌氧手套箱法 ❖ 疱肉培养法
革兰染色
生化反应
肉毒梭菌－－检验方法
❖ 标本采集：可疑食物、呕吐物等 ❖ 分离培养：疱肉培养、分离培养 ❖ 毒素测定 ❖ 毒素定性检验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
❖ 毒素型别鉴定： ❖ 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养物、
肉毒毒素
艰难梭菌
❖ 革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无荚膜 ❖ 严格厌氧 ❖ 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 ❖ 脂酶－、卵磷脂酶－ ❖ 人和动物肠道中的正常菌群 ❖ 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 ❖ 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性粗大
❖ 标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、荚 膜
❖ 分离培养：注意观察双圈溶血环 ❖ 生化反应：汹涌发酵现象 ❖ 动物实验： ❖ 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培养→
解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片染色镜检
肉毒梭菌－－形态与培养
❖ 革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于菌体 次级端，大于菌体，呈“网球拍状”无荚膜
❖ 所致疾病：破伤风 ❖ 感染途径：伤口 ❖ 致病条件：伤口内形成厌氧微环境
破伤风芽孢梭菌－－检查方法
❖ 显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 ❖ 分离培养：厌氧培养，菌落特征 ❖ 动物实验：
毒力试验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状
保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
产气荚膜梭菌－－形态与培养
❖ 革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体 中央或次级端，小于菌体，无鞭毛
肉眼观察 染色镜检
标本
分离培养
厌氧培养
厌氧培养
挑取菌落
血标本 增菌
需氧培养
厌氧培养
生长
不生长
生长
专性厌氧菌
专性厌氧菌
形wk.baidu.com染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱
v 肉眼厌观氧察菌：观－察－标标本本的观性察状和（涂片脓镜性检、带
血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等）
v 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法
杆菌并有芽孢，具有诊断价值
革兰阴性无芽孢厌氧菌
❖ 类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌
❖ 普雷沃菌属 ❖ 卟啉单胞菌属
❖ 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
革兰阳性无芽孢厌氧菌
❖ 丙酸杆菌属
痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂 腺等部位，与痤疮有关
测验5
❖ 在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌
厌氧菌感染的原因
❖ 局部形成厌氧微环境 ❖ 局部或全身免疫功能下降 ❖ 菌群失调 ❖ 寄居部位发生改变
采厌集氧菌－－标本采集运与送送检
v 部位恰当
v 针筒运送法
v 正确采集
v 无氧小瓶运送法
v 避免污染
v 标本充盈运送法
v 严格厌氧
v 组织块运送法
v 及时送检
v 厌氧袋运送法
v 棉拭运送法
厌氧菌－－常用培养基
破伤风芽孢梭菌－－主要性状
❖ 革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位于菌 体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴棒状”
❖ 专性厌氧 ❖ 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整齐，
呈羽毛状 ❖ 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶臭味
破伤风芽孢梭菌－－临床意义
❖ 致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中枢抑 制性神经介质的释放，导致骨骼肌强制性痉 挛
测验2
❖ 在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出阳性 率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌
测验3
❖ 下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌
测验4
❖ 下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌
双层溶血环 ❖ 卵黄琼脂平板：Nagler反应 ❖ 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 ❖ 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖
产气荚膜梭菌－－临床意义
❖ 致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 ❖ 所致疾病：
气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎
产气荚膜梭菌－－检查方法
❖ 优杆菌属
❖ 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群
❖ 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正 常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥 重要作用
厌氧性球菌
❖ 消化球菌属：革兰阳性球菌
❖ 消化链球菌属：革兰阳性球菌
❖ 韦荣球菌属：革兰阴性球菌
测验1
❖ 正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌
❖ 专性厌氧 ❖ 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑，有
腐败恶臭
肉毒梭菌－－临床意义
❖ 致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引起肌 肉驰缓型麻痹。
❖ 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 ❖ 所致疾病 ❖ 肉毒食物中毒 ❖ 婴儿肉毒病
肉毒梭菌－－检验程序
毒素测定
标本 分离培养
疱肉培养 毒素测定
可疑菌落
厌氧菌特点
特点
芽胞厌氧菌
无芽孢厌氧菌
种类
1个菌属
40多属
分布
自然界
人和动物体内
致病
外源性感染
内源性感染
多以外毒素致病 多为条件致病菌
厌氧菌感染的临床及细菌学特征
❖ 感染发生于黏膜附近 ❖ 深部外伤 ❖ 感染局部有气体产生 ❖ 分泌物有恶臭或暗血红色 ❖ 某些抗生素治疗无效的感染 ❖ 标本直接涂片细菌染色不均 ❖ 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养
厌氧菌－－分离培养
❖ 初代培养：
厌氧培养48h ❖ 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试验，
每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和 厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培 养生长的菌落进行鉴定
厌氧菌－－鉴定
❖ 菌体形态： ❖ 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 ❖ 药敏鉴定试验：
卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属多耐 药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链球菌 ❖ 生化反应 ❖ 气相色谱技术
❖ 非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生素K
❖ 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌
厌氧菌－－厌氧培养法
❖ 厌氧罐培养法 ❖ 厌氧器袋法 ❖ 厌氧手套箱法 ❖ 疱肉培养法
革兰染色
生化反应
肉毒梭菌－－检验方法
❖ 标本采集：可疑食物、呕吐物等 ❖ 分离培养：疱肉培养、分离培养 ❖ 毒素测定 ❖ 毒素定性检验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
❖ 毒素型别鉴定： ❖ 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养物、
肉毒毒素
艰难梭菌
❖ 革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无荚膜 ❖ 严格厌氧 ❖ 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 ❖ 脂酶－、卵磷脂酶－ ❖ 人和动物肠道中的正常菌群 ❖ 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 ❖ 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性粗大
❖ 标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、荚 膜
❖ 分离培养：注意观察双圈溶血环 ❖ 生化反应：汹涌发酵现象 ❖ 动物实验： ❖ 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培养→
解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片染色镜检
肉毒梭菌－－形态与培养
❖ 革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于菌体 次级端，大于菌体，呈“网球拍状”无荚膜
❖ 所致疾病：破伤风 ❖ 感染途径：伤口 ❖ 致病条件：伤口内形成厌氧微环境
破伤风芽孢梭菌－－检查方法
❖ 显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 ❖ 分离培养：厌氧培养，菌落特征 ❖ 动物实验：
毒力试验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状
保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
产气荚膜梭菌－－形态与培养
❖ 革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体 中央或次级端，小于菌体，无鞭毛
肉眼观察 染色镜检
标本
分离培养
厌氧培养
厌氧培养
挑取菌落
血标本 增菌
需氧培养
厌氧培养
生长
不生长
生长
专性厌氧菌
专性厌氧菌
形wk.baidu.com染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱
v 肉眼厌观氧察菌：观－察－标标本本的观性察状和（涂片脓镜性检、带
血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等）
v 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法
杆菌并有芽孢，具有诊断价值
革兰阴性无芽孢厌氧菌
❖ 类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌
❖ 普雷沃菌属 ❖ 卟啉单胞菌属
❖ 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
革兰阳性无芽孢厌氧菌
❖ 丙酸杆菌属
痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂 腺等部位，与痤疮有关
测验5
❖ 在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌
厌氧菌感染的原因
❖ 局部形成厌氧微环境 ❖ 局部或全身免疫功能下降 ❖ 菌群失调 ❖ 寄居部位发生改变
采厌集氧菌－－标本采集运与送送检
v 部位恰当
v 针筒运送法
v 正确采集
v 无氧小瓶运送法
v 避免污染
v 标本充盈运送法
v 严格厌氧
v 组织块运送法
v 及时送检
v 厌氧袋运送法
v 棉拭运送法
厌氧菌－－常用培养基
破伤风芽孢梭菌－－主要性状
❖ 革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位于菌 体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴棒状”
❖ 专性厌氧 ❖ 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整齐，
呈羽毛状 ❖ 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶臭味
破伤风芽孢梭菌－－临床意义
❖ 致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中枢抑 制性神经介质的释放，导致骨骼肌强制性痉 挛
测验2
❖ 在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出阳性 率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌
测验3
❖ 下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌
测验4
❖ 下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌