不同细胞基质狂犬病疫苗的优缺点探讨-董关木

二倍体细胞疫苗
➢ 缺点：
➢ 不能无限繁殖， ➢ 培养条件要求高， ➢ 疫苗生产时病毒产量较低，生产成本较高。 ➢ 目前不能大规模生物反应器培养
➢ 优点：
➢ 为正常二倍体细胞，无肿瘤原性， ➢ 可建立细胞库 ➢ 无外源因子污染，质量可高度控制， ➢ 生产纯化时无须考虑细胞 DNA ➢ 不用大量动物 ➢ 与人抗原性一致，过敏反应小，安全可靠。
中国药品生物制品检定所
细胞培养疫苗的推进
➢ 80年代由于细胞培养疫苗价格昂贵，仅在美国、欧洲 和加拿大使用，各种疫苗的比率
➢ 细胞培养疫苗7％ ➢ 羊脑疫苗占64％ ➢ 乳鼠脑疫苗占29％
➢ 2004年WHO强烈推荐，停止使用脑组织疫苗，至今非 洲、南美使用脑组织疫苗。
➢ 中国1980年代已实现了细胞培养疫苗
1885 1911
1955
1960 1964 1965 1985
Powel et al 鸭胚疫苗
Fuenzalida et al 乳鼠脑组织疫苗
David Semple 成年羊脑组织疫苗
Montagnon et al Vero传代细胞培养疫苗
Kondo et al 鸡胚细胞培养疫苗
Wiktor et al 人二倍体细胞培养疫苗
二倍体细胞疫苗
二倍体细胞
➢ 具有正常二倍体（2n）染色体的数目，核型正常； ➢ 在培养条件下，不能无限期的分裂繁殖； ➢ 无肿瘤原性，保留原体内细胞特性。
常见的二倍体细胞：
➢ WI-38 IMR-90 MRC-5 ➢ 2BS KMB-17
二倍体细胞代次的计算：
以细胞群体倍增为计算单位，当一瓶细胞长满达到一定数量时， 进行细胞传代使一瓶分种为二瓶，到该二瓶细胞长满分别达到 原来的细胞数量时为一代，如1：4传代即为二代。
人二倍体细胞狂犬病疫苗 (HDCV)
细胞种子批 MRC 5 第16 代
病毒株 PM 1503 - 3 M
优点
• WHO 推荐的狂犬病疫 苗 金标准 • 免疫原性高 • PET体现的效价高 • 安全性高
过滤 超率 灭活 纯化 稳定 – 冻干
终产品 1 ml/剂
缺点
• 不可能大规模生产 ✓ 病毒产量低 ✓ 生产时间长 ✓ 需要病毒抗原高度浓缩 ✓ 复杂的时间控制使生产 难度加大
收获病毒
病毒灭活
浓缩纯化 制备成疫苗
1、病毒株中国自行建立，是国际上最早的细胞疫苗之一。 2、经历了淡苗、浓缩苗和目前的纯化疫苗三个阶段。 3、病毒株传代过度，免疫原性少差，浓缩倍数高， 4、生产用毒种为豚鼠脑，有潜在的脑组织引起的过敏反应, 5、灭活剂为甲醛，疫苗中的残留可能引起注射部位疼痛。
纯化鸡胚细胞疫苗（PCEC）
不同细胞基质培养狂犬 病疫苗优缺点探讨
中国药品生物制品检定所
董关木
一、狂犬病疫苗的历史和细胞培养疫苗的推进 二、目前三种类型的细胞培养疫苗
1、二倍体细胞培养疫苗 2、原代细胞培养疫苗 3、传代细胞培养疫苗
三、疫苗中不同成分和添加剂Leabharlann Baidu关注的问题
1、人白蛋白 2、抗生素 3、明胶 4、牛血清 5、防腐剂
胚胎粉碎
病毒株： Flury-Lep
病毒收获 病毒灭活
病毒 浓缩 纯化
接种方案: 每次1 ml 5次注射
SPF鸡胚
➢ 原代鸡胚细胞培养，无致肿瘤潜在风险； ➢ 使用SPF鸡胚，无特定病原体，细胞安全性好； ➢ SPF鸡蛋成本高，疫苗价格高； ➢ 疫苗纯化降低了宿主细胞蛋白，但鸡蛋过敏者仍须慎重使用； ➢ 病毒株在鸡胚细胞中产量较低，生产成本较高。 ➢ 剂量大，每剂量1ml。
原代细胞
优点：
➢ 细胞的生物学形状基本与母体一致，染色体核型和 基因基本没有改变，没有致肿瘤的风险
缺点：
➢ 由多种类型的细胞组成，细胞种类比较复杂，细胞间特性 存在差异；
➢ 动物的个体间存在差异，难以保证细胞质量的一致性； ➢ 需要建立符合要求的动物繁殖设施，污染环境有悖3R原则 ➢ 原代细胞培养的营养条件要求较高 ➢ 不能进行生物反应器现代化大规模培养 ➢ 外源致病微生物污染的风险较大
四、暴露后处理的失败案例
一、狂犬病疫苗的历史和细胞培养疫苗的推进 二、目前三种类型的细胞培养疫苗
1、原代细胞培养疫苗 2、二倍体细胞培养疫苗 3、传代细胞培养疫苗
三、疫苗中不同成分和添加剂应关注的问题
1、人白蛋白 2、抗生素 3、明胶 4、牛血清 5、防腐剂
四、暴露后处理的失败案例
Rabies vaccines History
Fenje et al 原代地鼠肾细胞疫苗
我国目前人用狂犬病疫苗
一、我国生产的狂犬病疫苗 1、地鼠肾原代细胞纯化疫苗aG株 2、Vero细胞纯化疫苗aG株 3、Vero细胞纯化疫苗CTN株 4、Vero细胞纯化疫苗PM株
二、进口疫苗 1、法国Vero细胞纯化疫苗PM株 2、德国鸡胚细胞纯化疫苗Flury-LEP
对传代细胞的关注
年代
管理机构
1954 AF流行病学委员会
1967
NIH
1978
NIH
1984 NIH/FDA
• 价格昂贵
传代细胞
➢ 传代细胞称细胞系（XXXcell line)，最初来源与正常组织或 肿瘤组织，在原代细胞培养成功的基础上进行传代培养， 培养条件合适时可以连续传代，在某一传代过程中改变了 原来的形态和性状，可以无限期传代，传代细胞系往往具 有致肿瘤性
➢ 用于疫苗生产和研发的传代细胞 Vero BHK CHO等
原代细胞的种类和生产的疫苗
鸡胚细胞 地鼠肾细胞
原代狗肾细胞 原代猴肾细胞 原代兔肾细胞 原代牛肾细胞
狂犬病疫苗 麻疹疫苗 狂犬病疫苗、 乙型脑炎、 森林脑炎、肾综合征出血热 狂犬病疫苗 小儿麻痹疫苗 风疹疫苗 轮状病毒疫苗
地鼠肾原代细胞培养生产狂犬病疫苗
无菌取肾
肾脏粉碎
病毒株：
aG株，须使 用豚鼠脑毒种
一、狂犬病疫苗的历史和细胞培养疫苗的推进 二、目前三种类型的细胞培养疫苗
1、原代细胞培养疫苗 2、二倍体细胞培养疫苗 3、传代细胞培养疫苗
三、疫苗中不同成分和添加剂应关注的问题
1、人白蛋白 2、抗生素 3、明胶 4、牛血清 5、防腐剂
四、暴露后处理的失败案例
原代细胞
原代细胞最初来源于供体的正常组织细 胞后在体外的首次培养的细胞，在适宜的培养 条件下细胞可以基本不改变性状而获得可以连 续传代的特性，但不能无限期分裂繁殖，为有 限生命，没有肿瘤原性。