实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察
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(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平 面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低 倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和 最均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中 央。
(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出 目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是 否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点 调到视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和 聚光镜的边缘相接为止。
厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
基础知识
三、显微镜概述
显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
1.光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
6.相差显微镜
一种介壳虫的染色体
7. 偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）
偏光显微镜（百度文库olarizing microscope）用于检测具有双折射性的物 质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
8.微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微 镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
五、 实验步骤
(一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。
物镜
镜口率(N.A.)
工作距离(mm)
10×
0.25
5.40
40×
0.65
0.39
100×
1.30
0.11
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，
公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的
上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全
2. 显微镜的调节
瞳距调节
屈光度调节
调节
粗调松紧调节旋钮
②10X物 镜
聚光镜中心调节
①标 本
④ 聚光镜升降 旋钮
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
孔径光栏调节
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
孔径光栏开度与图象
100% 70% 30%
孔径光栏的运用
操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水 平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果 可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它 的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
• 普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于 0.2μ m，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍 数通常为1000X。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，
分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨
距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61λ/N·A
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，
是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，
包括镜台(载物台) 、调节器和、
物镜转换器(旋转器)等。
尼康E-600显微镜 基础知识
2.体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）
3.荧光显微镜
尼康E800荧光DIC显微镜
荧光显微镜照片（微管呈绿 色、微丝红色、核蓝色）
• 经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。
• 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关 。
• 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越 接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为 0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。
一、实验目的
1.了解普通光学显微镜的工作 原理，掌握光学显微镜的使 用方法。
2.熟悉光学显微镜下细胞的基 本形态与结构。
二、实验原理
细胞是生物体的基本结构单位。构成生 物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行 研究，首先要从其形态结构人手。所以，要 借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下 ，才能观察到细胞的基本形态结构。
3. 观察操作：
(1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片 0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移 到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时， 把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜， 然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
N·A·=n·sina/2
式中D为分辨率，A为光波波长， n=介质折射率；α=镜口角（标本对 物镜镜口的张角）， N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小 于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数 字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
• 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜 投射于样品上。
• 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普 通显微镜。
• 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除 可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线 ，用以保护人目。
4. 激光共聚 焦扫描显微镜 （具有高分辨 率可进行显微 断层扫描）
DIC显微镜下的 硅藻（伪彩色）
9. 倒置显微镜（组织培养中长工作距离的）
• 组成和普通显微镜一样， 只不过物镜与照明系统颠 倒，前者在载物台之下， 后者在载物台之上（右图 ），用于观察培养的活细 胞，具有相差物镜。
10. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射仪
四、实验用品
• 各种组织切片
LCSM照片 蓝色为细胞核，绿 色为微管
（能观察活细胞）
5.暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当 光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光 线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这 种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高 50倍。
(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出 目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是 否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点 调到视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和 聚光镜的边缘相接为止。
厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
基础知识
三、显微镜概述
显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
1.光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
6.相差显微镜
一种介壳虫的染色体
7. 偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）
偏光显微镜（百度文库olarizing microscope）用于检测具有双折射性的物 质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
8.微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微 镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
五、 实验步骤
(一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。
物镜
镜口率(N.A.)
工作距离(mm)
10×
0.25
5.40
40×
0.65
0.39
100×
1.30
0.11
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，
公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的
上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全
2. 显微镜的调节
瞳距调节
屈光度调节
调节
粗调松紧调节旋钮
②10X物 镜
聚光镜中心调节
①标 本
④ 聚光镜升降 旋钮
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
孔径光栏调节
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
孔径光栏开度与图象
100% 70% 30%
孔径光栏的运用
操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水 平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果 可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它 的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
• 普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于 0.2μ m，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍 数通常为1000X。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，
分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨
距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61λ/N·A
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，
是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，
包括镜台(载物台) 、调节器和、
物镜转换器(旋转器)等。
尼康E-600显微镜 基础知识
2.体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）
3.荧光显微镜
尼康E800荧光DIC显微镜
荧光显微镜照片（微管呈绿 色、微丝红色、核蓝色）
• 经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。
• 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关 。
• 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越 接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为 0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。
一、实验目的
1.了解普通光学显微镜的工作 原理，掌握光学显微镜的使 用方法。
2.熟悉光学显微镜下细胞的基 本形态与结构。
二、实验原理
细胞是生物体的基本结构单位。构成生 物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行 研究，首先要从其形态结构人手。所以，要 借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下 ，才能观察到细胞的基本形态结构。
3. 观察操作：
(1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片 0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移 到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时， 把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜， 然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
N·A·=n·sina/2
式中D为分辨率，A为光波波长， n=介质折射率；α=镜口角（标本对 物镜镜口的张角）， N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小 于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数 字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
• 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜 投射于样品上。
• 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普 通显微镜。
• 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除 可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线 ，用以保护人目。
4. 激光共聚 焦扫描显微镜 （具有高分辨 率可进行显微 断层扫描）
DIC显微镜下的 硅藻（伪彩色）
9. 倒置显微镜（组织培养中长工作距离的）
• 组成和普通显微镜一样， 只不过物镜与照明系统颠 倒，前者在载物台之下， 后者在载物台之上（右图 ），用于观察培养的活细 胞，具有相差物镜。
10. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射仪
四、实验用品
• 各种组织切片
LCSM照片 蓝色为细胞核，绿 色为微管
（能观察活细胞）
5.暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当 光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光 线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这 种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高 50倍。