差示分光光度法测定药物制剂中的四环素

差示分光光度法测定药物制剂中的四环素
四环素是生物合成的广谱抗菌素。

临床研究表明，病人服用四环素后，定时测定体液中四环素含量可诊断胃癌，四环素还可作为荧光探针用以诊断癌症。

近年来，四环素还广泛被用作饲料添加剂，以增强动物的抗病能力。

关于四环素的测定方法，已有许多报道，如微生物法、分光光度法差示导数光谱法、FIA、RHPL、ISE、吸附SV、三氯化铁比色法等。

本文利用四环素与钻离子在PH为11.5的Na2HPO4－NaOH缓冲溶液中生成黄绿色络合物，并根据其光谱变化的牲性，采用差示光度法不经分离直接测定了药物制剂中的四环素。

四环素浓度在0.80－25ug/ml范围内符合比耳定律。

1 实验部分
1.1仪器与试剂
TU－1221型紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；PH－HJ908OB数字酸度计时北京海淀航天计算机公司）；XYJ80－2离心沉淀机（江苏医疗器械厂）。

盐酸四环素标准液：用标准品（中国药品生物制品检定所提供）配成2mg／ml的储备液，使用时用水稀释成0.2mg／ml；钻离子溶液：用CoCl2·6H2O配成1mg／ml的储备液，使用时稀释成0.1mg／ml；Na2HPO4－NaOH缓冲溶液。

以上试剂均为分析纯，水为市售二次去离子水。

1.2 实验方法
于两支25ml的比色管中，分别加入0.2mg／ml的盐酸四环素标准使用液2.0ml，一支用水稀释至刻度作参比液，另一支加入0.1mg／ml的钴离子溶液2ml，Na2HPO4－NaOH缓冲2ml，用水稀释至刻度。

前者置参比池中，后者置样品池中，于405nm处测其吸光度。

2结果与讨论
2.1 实验条件的选择
络合物的形成受诸多因素的影响，本文对酸度，缓冲溶液的种类及用量、钴离子的用量、反应温度、反应时间等条件的影响作了讨论。

2.1.1 吸收光谱将盐酸四环素标准使用液按实验方法处理后，在380－500nm波长范围内进行波长扫描。

盐酸四环素在405nm处最大吸收，可作为测定波长。

2.1.2 酸度对络合物形成的影响溶液的酸度对四环素与钴离子生成络合物影响较大。

对不同酸度条件下
络合物的形成进行了研究，在酸性、中性介质中，络合物不易形成。

随着溶液PH值的升高，溶液颜色逐渐加深，吸光度逐渐增大。

PH在10.5－13.0范围内吸光度最大且稳定；当PH>13.0，络合物的吸光度开始减小，这说明络合物在强碱性介质中开始离解，PH值越大，离解越历害。

这是由于大量的OH－和钴离子形成了Co(OH)的络离子，促使四环素一钴离子络合物离解。

故本实验选择pH11.5。

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2.1.3 缓冲溶液种类及用量
缓冲溶液的种类及用量对络合物的形成有一定的影响。

在Na2HPO4－NaOH，H3PO4－柠檬酸－NaOH，NaOH等不同的缓冲体系中，以在Na2HPO4－NaOH缓冲液中络合物的吸光度最大且稳定，用量以控制在2ml最为合适，用量太小不利于络合物的形成，太大形成的络合物又开始离解。

在H3PO4－柠檬酸－NaOH 缓冲液中，由于柠檬酸对Co2+有较强的络合能力，消弱了Co2+与四环素的络合。

故本实验选择Na2HPO4－
NaOH作为缓冲溶液。

2.1.4 钴离子用量的影响在Na2HPO4－NaOH缓冲液中，足够量的Co2+对对络合物的形成是必要的，随
钴离子用量的增加，络合物的吸光度了相就增加。

钴离子用量在1.5－3.0ml范围内，吸光度值最大且稳定。

故本验选择钴离子的用量为2ml。

2.1.5 温度及时间对形成络合物的影响温度升高，吸光度略有减小，同时，随温度升高，络合物的最大吸
收波长会发生红移，故本研究选择在室温（20℃）下进行。

另外，实验还表明，络合物的形成速度比较快，按实验方法加入试剂后（约需10min），立刻进行时间扫描，发现1h内络合物的吸光度值的变化仅为0.005，24h内吸光度值无显著变化，说明生成的络合物很稳定。

2.1.6 线性范围在12支25ml的比色管中，依次加入0.1、0.5、1.0、1.5、2.0，2.5ml盐酸四环素标准工
作液各两份，其余按实验方法处理后测定，所得结果线性处理后，线性回归方程为：A＝－0.0095＋0.0305c （c为四环素的浓度：ug／ml），相关系数r＝0.9997，
ε＝1.33×104L·mol－1·cm－1。

根据IUPAC规定，计算得检出限为0.40ug／ml，结果表明四环素浓度在0.80－
25ug／ml范围内符合比耳定律。

2.2 干扰性实验
四环素制剂中加有淀粉、滑石粉、糊精、葡萄糖、硬脂酸镁等赋形剂。

按实验方法作同样处理，所有赋形剂的差示光谱在测定波长处无吸收。

因此，可以不用任何分离直接测定片剂中四环素的含量。

2.3 回收率测定
精密称取适量已知含量的样品，加入一定量的盐酸四环素标准品，按实验方法处理，用测得的吸光度值减去样品的吸光度，用线性回归方程计算，结果见表1。

表 1 回收率实验结果
加入量检测量RSD 回收率
（mg）(mg) (n=4)(%) (%)
4.25 4.23 0.46 99.5
4.25 4.31 0.85 101.5
3.75 3.65 1.34 97.8
3.75 3.70 0.72 98.7
3 样品的测定
精密称取四环素片10片，分别研成粉末，再适量称取，按前述实验方法处理测定，用回归方程计算其含量，结果见表2。

本法较紫外法结果略偏低，经t检验，本法与紫外法间并无系统误差。

表2 样品中四环素的测定
本法测得值RSD（n＝4标示量紫外法测得
样品（mg／片）（％）（mg／片）值（mg／片）
10.22970.470.250.2308
20.2255 1.010.250.2278
30.24550.610.250.2480
40.22480.750.250.2265。