达对食管癌细胞紫杉醇敏感性的影响

图１

脂质体转染２４、４８、７２

ｈ后各组职ＣＣ２表达的凝胶电泳图

Ｆｉｇ．１

ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＲＣＣ２ｉｎＫＹＳＥｌ５０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４，４８，７２ｈｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ

Ｌａｎｅ１：ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；Ｌａｎｅ２：ｓｉ—ＥＲＣＣ２；Ｌａｎｅ３：Ｎｅｇａｔｉｖｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｌａｎｅ４：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００；Ｌａｎｅ５：Ｂｌａｎｋｃｏｎｔｒ０１．４８７２

表１脂质体转染后２４、４８、７２

ｈ细胞株ＫＹＳＥｌ５０朋Ｃ伐ｍＲＮＡ相对表达■

Ｔ曲．１

朋Ｃ．ｃＺ／ＧＡＰＤＨ

ｍＲＮＡｉｎＫＹＳＥＩＳ０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４。４８，７２

ｈ

ｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ

０．００００ＩｔＯ．００００。

０．８７ｉ－－０．１ｌ０．８７ｉ－０．１ｌ

Ｏ，８７士Ｏ．０８０．８７士ｏ．０８

０．８７士０，０７Ｏ．８７士ｏ．０７

ａ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｏｔｈｅｒｔｈｒｅｅｃｏｎｔｒｏｌｓ。Ｐ＜０．０１．

表２转染后２４、４８和７２

ｈ后各组朋ＣＣ２ｍＲＮＡ表达比较统计结果

Ｔａｂ．２

Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓｏｕｔｃｏｍｅｓ

ｏｆ

ＥＲＣＣ２ｍＲＮＡ

ａｆｔｅｒ

ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４，４８，７２ｈａｎａｌｙｚｅｄｂｙｏｎｅ－ｗａｙ

ＡＮＯＶＡ

（Ｊｐｖａｌｕｅ）

量明显低于阴性对照、脂质体对照组和空白对照组ＥＲＣＣ２蛋白表达量（Ｐ＜０．０１）。３个对照组无显著差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。各组内转染后不同时段ＥＲＣＣ２蛋白表达量：ｓｉ—ＥＲＣＣ２组２４、４８、７２

ｈ表达量逐渐下降（Ｐ＜Ｏ．０１）。３组对照之间各时段表达量无差异（Ｐ＞０．０５）。说明ｓｉＲＮＡ成功干扰了目的基因ＥＲＣＣ２蛋白水平的表达

（图２。４。表３、４）。

２．３

ｓｉＲＮＡ转染后细胞紫杉醇ＩＣ５０值ｓｉ—

ＥＲＣＣ２组、阴性对照、脂质体和空白对照组紫杉醇ＩＣ５０值分别为６．３±０．９，１３Ａ±１．１，１２．９±１３和１２．７±１．７。ｓｉ—ＥＲＣＣ２组明显低于３个对照组（Ｐ＜０．０１）。３个对照组紫杉醇ＩＣ，。值无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ｓｉ—ＥＲＣＣ２组紫杉醇ＩＣ，。值较对照组降低了４９％左右。结果提示ＥＲＣＣ２表达水平下调后细胞部分恢复了对紫杉醇的敏感

图２转染后２４ｈ各组细胞ＥＲＣＣ２蛋白表达的流式细胞图

Ｆｉｇ．２

ＥＲＣＣ２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＫＹＳＥｌ５０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４ｈｉｎｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ

ＦＣＭ

７６４王玉栋，等．ｓｉＲＮＡ干扰耿ａ口表达对食管癌细胞紫杉醇敏感性的影响

图３转染后４８ｈ各组细胞ＥＲＣＣ２蛋白表达的流式细胞图

Ｆｉｇ。３ＥＲＣＣ２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＫＹＳＥｌ５０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ４８ｈｉｎｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＦＣＭ

图４转染后７２ｈ各组细胞ＥＲＣＣ２蛋白表达的流式细胞图

Ｆｉｇ．４

ＥＲＣＣ２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＫＹＳＥ１５０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ７２ｈｉｎｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＦＣＭ

表３流式细胞术检测各转染组细胞ＥＲＣＣ２蛋白表达■

Ｔａｂ，３ＥＲＣＣ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ｎ）ＩｎＫＹＳＥｌ５０ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４，４＆７２ｈｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＦＣＭ

（知，玎＝９）型塾！！：墨墨兰：至！塑！ｇ！：！！！竺！生！巴：！！！坚！！里！！些：！！！坚！１

２４０．６９：Ｅ０．１１’０．９４ｉ－Ｏ．１３０．９５士０．１１０．９７士０．１３

４８０．４８：±－０．０９‘０．９５：ｔ－０．１６０．９７－ｘ－０．１４０．９８：￡－０．１ｌ

７２０．４０士０．０４＂０．９５：Ｌ－０．１３０．９７士－０．１３０．９７：ｋ０．１４ａ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｏｔｈｅｒｔｈｒｅｅｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｐ＜Ｏ．０１．

表４转染后２４、４８和７２ｈ后各组ＥＲＣＣ２蛋白表达比较统计结果

Ｔａｂ．４ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓｏｕｔｃｏｍｅｓｏｆＥＲＣＣ２ｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｆｏｒ２４，４８，７２ｈａｎａｌｙｚｅｄｂｙＯｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ（尸ｖａｌｕｅ）２４４８７２２４４８７２２４４８７２２４４８７２

性，逆转了紫杉醇耐药。

３讨论

紫杉醇是食管癌化疗中的经典药物，其主要的抗瘤机制是干扰肿瘤细胞有丝分裂，导致细胞周期阻滞于Ｇ，／Ｍ期。此外还可通过下调ｃｄｋ表达诱导Ｇ。／ｓ期阻滞，或通过其他途径诱导凋亡…。但仍存在着化疗耐药的问题。如何筛选出化疗敏感个体，实现个体化化疗是目前研究热点。

ＥＲＣＣ２作为基础转录因子ＴＦＩＩＨ（ｔｒａｎ—ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ

ｆａｃｔｏｒＩＩＨ）组分之一，在ＤＮＡ修复中发挥解螺旋作用，同时还可启动转录起始及调控细胞周期。研究发现ＴＦＩＩＨ功能过强可使细胞强制进入有丝分裂期，对抗凋亡。反之，其功能缺陷可诱导细胞凋亡ｏ２Ｊ。Ｓｅｋｅｒ等［３１在人类淋巴细胞中发现，ＥＲＣＣ２３１２Ａｓｐ／ＡｓＰ基因型编码高度保守的解螺旋酶，该等位基因上的天冬氨酸可抑制细胞凋亡。

大量文献和临床资料已经证实ＥＲＣＣ２表

达水平上调是铂类化疗药物耐药的重要分子