广东医学院级研究生培训课件

广东医学院级研究生
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研究内容
• 收集慢性鼻咽炎、鼻咽低分化鳞状
细胞癌、放射后复发的鼻咽癌标本 各20例，用MSP法测fhit基因甲 基化是否存在及甲基化率，用免疫 组织化学法测PKC的表达。
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研究内容
• 对Tr-12细胞做姜黄素的细胞毒实验（MTT
法），取低毒性剂量联合照射（不同剂量） 作用于Tr-12细胞，设对照组、单纯加药组、 药物联合放射组、单纯放射组。各组细胞 用克隆形成实验绘制放射-存活曲线；RTPCR检测survivin的mRNA水平，免疫细 胞化学检测survivin和caspase-3的表达
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研究目标
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研究目标
探讨survivin的表达与鼻咽癌细胞放射抵 抗的关系，姜黄素作用对survivin表达及 放射敏感性的影响，为鼻咽癌预后的判断， 放疗后复发的治疗及放射增敏提供理论指 导
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研究目标
对比慢性鼻咽炎、鼻咽低分化鳞状 细胞癌及放疗后复发鼻咽癌 survivin及caspase-3蛋白表达，
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Survivin的组织分布
•胚胎和胎儿组织中大量表达，
分化成熟的正常组织无表达
•特异性地表达于多数肿瘤组织
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survivin基因的主要功能
•抑制凋亡
Caspase途径：caspase-3/7 非caspase途径：NFκB
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survivin基因的主要功能
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二、临床病理部分
慢性鼻咽炎
鼻咽分化性非角化型 鳞状细胞癌
放疗后复发鼻咽癌
Survivin蛋白表达 免疫组化
Caspase-3蛋白表达 免疫组化
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拟解决的关键问题
抗炎抗氧化抗凝降血脂 抗动脉粥样硬化及抗 肿瘤
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姜黄素放射增敏的研究进展
我室黄小军、曹璋的实验已证明姜黄素通过 改变细胞周期对鼻咽癌放射抵抗细胞的增 敏作用
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创新之处
探讨survivin与鼻咽癌细胞放 射抵抗的关系以及姜黄素对 survivin表达的影响，为鼻咽 癌的放射增敏提供理论依据
空
不
白
同
对
剂
照
量
组
照
射
空
不
姜
白
同
黄
对
剂
素
照
量
加
组
照
照
射
射
RT-PCR测survivin ,caspase-3mRNA 水平
克隆形成实验
比色法测caspase-3活性
hoechst/PI双染测凋亡水平
免疫细胞化学测survivin caspase-3蛋白
表达
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姜 黄 素 阈 下 剂 量
阻滞细胞周期于放射不敏感期
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survivin参与肿瘤放疗抵抗的机制
阻止自发性和放射诱导性凋亡
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以Survivin为靶点的肿瘤放射增敏
• Survivin核酶
Pennati等用靶向Survivin的锤头状核酶 作用于两个过表达Survivin的黑色素瘤细 胞株 ，γ-射线照射后，与亲代细胞相比， 表达核酶的细胞克隆形成率下降， caspase-3活性提高，凋亡水平增加
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研究内容
• 收集慢性鼻咽炎、鼻咽分化性非角化型鳞
状细胞癌、放射后复发的鼻咽癌标本各30 例，免疫组化检测survivin与caspase-3 蛋白的表达
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技术路线
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一、实验病理部分
CNE-2Z细胞培养
Tr-12细胞培养
姜黄素细胞毒实验 (MTT)
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研究内容
• CNE-2Z及其放射残存细胞tr12的培养。
• 分别检测两个细胞株的自发Leabharlann Baidu亡水平，然
后施以不同剂量(暂定为2、4、8、10Gy) 的照射，培养一定时间后用 hoechst33342/PI双染法检测凋亡水平； RT-PCR检测survivin的mRNA水平；比 色法测caspase-3的活性变化
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Survivin与鼻咽癌放射残存细胞 Tr-12放射抵抗的关系探讨
研究生： 毕 宏 导 师： 孙 宁教授 时 间： 2005年8月20日
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立题依据
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立题依据
• 放射治疗是鼻咽癌的首选治疗手段，但放
射后5年生存率较低，局部复发和远处转移 是放疗失败的原因。
•参与细胞周期调控
特异性地表达于G2/M期
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survivin基因的主要功能
•参与血管的生成 •参与DNA损伤后修复
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survivin参与肿瘤放疗抵抗的机制
参与放射引起肿瘤细胞DNA损 伤修复的调节
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survivin参与肿瘤放疗抵抗的机制
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以Survivin为靶点的肿瘤放射增敏
• Survivin反义寡核苷酸
Cao等在肺癌小鼠模型中，瞬时转染 survivin与XIAP的反义寡核苷酸能显著下 调它们的表达，反义治疗联合放疗组的移 植瘤出现了超过15天的生长延迟
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以Survivin为靶点的肿瘤放射增敏
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survivin基因
• Survivin是IAPs家族中分子量最小但抗凋
亡能力最强而倍受关注的明星分子
• 位于染色体17q25，全长15kb，含4个外
显子，3个内含子，编码分子量为16.5kD 的蛋白质
• 羧基末端缺乏环指结构 ，氨基端只含有一
个包含保守的Cys/His 的BIR功能区
• 放射后存活细胞对放射的抵抗是放疗后复
发和转移的基础。
• 明确放射抵抗的机理可提高放疗的局部控
制率和完全缓解率。
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立题依据
研究证明肿瘤细胞对放射的反应主要受基 因控制
在受放射细胞中DNA链断裂，伴有细胞周 期、生长因子、信号转导、基因表达的改 变
照射存活后代放射抵抗机制可能与：凋亡 减少;增殖减慢;DNA损伤修复能力增强有 关
• siRNA干扰
Kappler等以survivin siRNA转染肉瘤细 胞，发现survivin表达明显下降，且肿瘤 细胞的放射敏感性随照射剂量的增加而增 加。
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姜黄素放射增敏的研究进展
姜科姜黄属植物姜黄Curcuma longa L．(C．domestica Valet．)是一种常用 中药，药用其根茎