酵母核糖核酸

实验六：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的：了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。

二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。

RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。

核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。

加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。

三、主要器材： 1．水浴2、离心机
四、试剂和材料
1．0.04 mol/L氢氧化钠溶液
2．酸性乙醇溶液
3．95%乙醇
5．1.5 mol/L硫酸溶液
6．浓氨水
7．0.1 mol／L硝酸银溶液
8．氯化铁浓盐酸溶液
9．苔黑酚乙醇溶液
10．定磷试剂
11．酵母粉
五、操作：将1g酵母悬浮于10mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。

将悬浮液转移至玻璃试管内。

沸水浴加热30分钟，冷却后移入到离心管内，离心(3
000r/min)10分钟，将上清液缓缓倾人10mL酸性乙醇溶液中。

注意要一边搅拌一边缓缓倾人。

待核糖核酸沉淀完全后，移入离心管内，再离心(3000r/min)5分钟。

弃上清液。

用95%乙醇离心洗涤沉淀1次，弃乙醇后，得RNA沉淀。

将RNA沉淀从离心管内转移到一只试管中，然后向试管内加入1.5 mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟，制成水解液，通过下述实验进行组分鉴定：
1、嘌呤碱做三组对照实验：取3支试管分别进行如下操作
（1）水解液1mL＋浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？（2）浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无沉淀？
（3）水解液1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？
2、核糖：取1支试管，水解液1mL ＋三氯化铁浓盐酸溶液2mL ＋苔黑酚乙醇溶液0.2 mL，沸水浴中3分钟。

注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。

3、磷酸：取1支试管，水解液1mL ＋定磷试剂1mL，在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。

六、思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品?
2、本实验RNA组分是什么? 怎样验证的?。