实验四 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2010版
三、器材
锥形瓶 大研钵 电子天平 离心机 恒温水浴锅
注意仪器使用方法 离心管平衡!!
2010版
四 NaOH,95%乙醇,1.5 M H2SO4溶液,浓氨水,0.1M AgNO3 酸性乙醇溶液：30ml95%乙醇加0.3ml浓盐酸混匀。 苔黑酚--FeCl3溶液：将100 mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,再 加入100mgFeCl3.6H2O，临用时配制。 定磷试剂： 按顺序以A：B：C：蒸馏水＝1：1：1：2（V/V）混匀,现配。 A、17% H2SO4： 将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。 B、2.5%（NH4）6Mo7O24：2.5g（NH4）4Mo2O7溶于100ml蒸 馏水中。 C、10%Vc：10g Vc溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。颜 色呈淡黄色时可以使用，如呈深黄或棕色则失效。
2010版
五、操作
1、酵母RNA的提取(2-3人一份) 将4g酵母溶于20ml0.04 M NaOH溶液中（先以少量 NaOH溶液湿润酵母，并充分研磨)， 将悬浮液转移 到250ml锥形瓶中，在沸水浴30分钟，不时搅拌,冷 却后转入离心管进行离心 . ----（蛋白质变性沉淀，RNA溶于
碱性溶液）
五、操作
2、RNA水解液的制备： 取200mg 提取的核酸，加入1.5 M H2SO4 10ml ， 在沸水浴中加热10分钟后制成水解液并进行组分 的鉴定。 3、RNA组分的鉴定： ① 嘌呤碱：取水解液1ml加入过量的浓氨水，然后 加入约1ml 0.1 M AgNO3溶液 观察溶液的变化。 ② 核糖：取1支试管加入水解液1ml，加苔黑酚-FeCl3溶液１ml，放沸水浴中10分钟，注意溶液颜 色的变化。 ③ 磷酸：取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂 1ml，在水浴中加热，观察溶液颜色的变化。
离心10min（4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇 溶液中，待核糖核酸沉淀完全后，离心3min （4000rpm），弃去上清。 --- RNA不溶于乙醇，pI=2.5） 用95%乙醇洗涤沉淀，离心3min（4000rpm）弃去 上清液，共进行两次。 沉淀可在空气中干燥，即为 酵母RNA的粗制品。 2010版
2010版
六、注意事项
1. 先以少量 NaOH溶液湿润酵母，并进 行充分研磨，再用剩余的NaOH溶液冲洗 研钵一起转入离心管。 提取时,注意每个步骤的目的和意义 2.值日第五组 3.完成实验报告
2010版
实验四 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
(先打开水浴锅,温度设置成100摄氏度) 一、目的 二、原理 三、器材 四、试剂和材料 五、操作 六、注意事项
2010版
一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分 的方法以 了解苔黑酚定量测定RNA的方法。
2010版
二、原理
酵母核糖核酸中RNA含量较多，RNA可溶 于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙 醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，即 得到RNA的粗制品。 核糖核酸中含有核糖、嘌蛉碱，嘧啶碱 和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解， 从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材
锥形瓶 大研钵 电子天平 离心机 恒温水浴锅
注意仪器使用方法 离心管平衡!!
2010版
四 NaOH,95%乙醇,1.5 M H2SO4溶液,浓氨水,0.1M AgNO3 酸性乙醇溶液：30ml95%乙醇加0.3ml浓盐酸混匀。 苔黑酚--FeCl3溶液：将100 mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,再 加入100mgFeCl3.6H2O，临用时配制。 定磷试剂： 按顺序以A：B：C：蒸馏水＝1：1：1：2（V/V）混匀,现配。 A、17% H2SO4： 将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。 B、2.5%（NH4）6Mo7O24：2.5g（NH4）4Mo2O7溶于100ml蒸 馏水中。 C、10%Vc：10g Vc溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。颜 色呈淡黄色时可以使用，如呈深黄或棕色则失效。
2010版
五、操作
1、酵母RNA的提取(2-3人一份) 将4g酵母溶于20ml0.04 M NaOH溶液中（先以少量 NaOH溶液湿润酵母，并充分研磨)， 将悬浮液转移 到250ml锥形瓶中，在沸水浴30分钟，不时搅拌,冷 却后转入离心管进行离心 . ----（蛋白质变性沉淀，RNA溶于
碱性溶液）
五、操作
2、RNA水解液的制备： 取200mg 提取的核酸，加入1.5 M H2SO4 10ml ， 在沸水浴中加热10分钟后制成水解液并进行组分 的鉴定。 3、RNA组分的鉴定： ① 嘌呤碱：取水解液1ml加入过量的浓氨水，然后 加入约1ml 0.1 M AgNO3溶液 观察溶液的变化。 ② 核糖：取1支试管加入水解液1ml，加苔黑酚-FeCl3溶液１ml，放沸水浴中10分钟，注意溶液颜 色的变化。 ③ 磷酸：取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂 1ml，在水浴中加热，观察溶液颜色的变化。
离心10min（4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇 溶液中，待核糖核酸沉淀完全后，离心3min （4000rpm），弃去上清。 --- RNA不溶于乙醇，pI=2.5） 用95%乙醇洗涤沉淀，离心3min（4000rpm）弃去 上清液，共进行两次。 沉淀可在空气中干燥，即为 酵母RNA的粗制品。 2010版
2010版
六、注意事项
1. 先以少量 NaOH溶液湿润酵母，并进 行充分研磨，再用剩余的NaOH溶液冲洗 研钵一起转入离心管。 提取时,注意每个步骤的目的和意义 2.值日第五组 3.完成实验报告
2010版
实验四 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
(先打开水浴锅,温度设置成100摄氏度) 一、目的 二、原理 三、器材 四、试剂和材料 五、操作 六、注意事项
2010版
一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分 的方法以 了解苔黑酚定量测定RNA的方法。
2010版
二、原理
酵母核糖核酸中RNA含量较多，RNA可溶 于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙 醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，即 得到RNA的粗制品。 核糖核酸中含有核糖、嘌蛉碱，嘧啶碱 和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解， 从水解液中可以测出上述组分的存在。