实验6 酵母RNA的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。
核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。
通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。
同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。
通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
食品实验六酵母RNA的提取与定量测定
【实验材料和主要仪器、试剂】
1、实验材料：
酵母粉 (或酵母片)
2、实验仪器：
试管及试管架、研钵、锥形瓶、离心机等。
【实验材料和主要仪器、试剂】
3、实验试剂： 0.04mol/LNaOH溶液、酸性乙醇溶液、 1.5mol/L硫酸溶液 、浓氨水、 0.1mol/L硝酸银溶液 、氯化铁浓盐酸 溶液、苔黑酚乙醇溶液、钼酸铵试剂 （将2g钼酸铵溶解在100mL10%硫酸 中）
2、了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组 分的方法。
【实验原理】
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱 性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可 以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA 的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷 酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解 液中可以测出上述组分的存在。
【注意事项】
样品中蛋白质含量较高时，应先用5%三氯乙 酸溶液沉淀蛋白质后再测定。
定磷试剂含有还原剂抗坏血酸，抗坏血酸很容 易被空气中的氧所氧化，使定磷试剂失效。因 此可以改用钼酸铵试剂定磷。核酸分子中的有 机磷经强酸消化后形成无机磷，在酸性条件下, 无机磷与钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀。
【操作步骤】
1、RNA的提取：将5g酵母粉（或15片酵母片） 先干粉研磨均匀，然后用30mL 0.04mol/L氢氧 化钠溶液分次悬浮，将悬浮液分次转移至100 毫升三角瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷 却。离心(3000r/min)15分钟，向上清液中缓缓 倾入15 mL酸性乙醇溶液。注意要一边搅拌一 边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后，离心 (3000r/min)3分钟，弃去清液，沉淀可在空气 中干燥，即为RNA粗制品。
3rna的组分鉴定1嘌呤碱取水解液1ml加入过量约2ml浓氨水然后加入约1ml01moll硝酸银溶液观察有无嘌呤碱的银化合物絮状沉淀生2核糖取1支试管加入水解液1ml三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液02ml沸水浴中加热
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定目的和要求了解核糖核酸（RNA）的提取方法及其组成成分的定性测定原理核酸在机体生命活动中具有重要意义，核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。
酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开，然后用乙醇提取。
加酸水解核酸，可鉴定其组成成分。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
操作方法一、酵母RNA的提取（1）取酵母3克置于研钵中，加入25毫升0.5%氢氧化钠溶液研成匀浆。
（2）将匀浆移入三角瓶中，在沸水浴上加热水30分钟。
（3）离心沉淀10-15分钟。
（4）取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至兰色石蕊试纸变红色。
（5）一面搅拌一面加入含2%HCL的95%酒精溶液10毫升。
（6）离心5分钟，将沉淀用无水乙醇5毫升洗涤一次，离心5分钟，沉淀再用3毫升洗涤一次，离心5 分钟，回收。
（7）用手心握住离心管并不断搅拌使挥发而使RNA迅速干燥。
二水解RNA 取1/2左右的RNA粉末于试管中加入8%硫酸4毫升在沸水浴上水解5分钟。
三、组成成分鉴定（1）嘌呤碱基的检查取水解液6滴，于试管中加氨水10滴，再加0.1M硝酸银溶液6滴，在沸水浴上加热，观察变化，何故？（2）磷酸的检查取水解液5滴，于试管中加5滴浓硝酸酸化，再加入5滴钼酸铵溶液在沸水浴上加热，冷却静止有何现象。
（3）核糖的检查取水解液6滴，于试管中加10%氢氧化钠，使其成碱性，然后加地衣酚3毫升，在沸水浴上加热，观察变化，何故？试剂和器材一、试剂（1）0.5% NaOH（2）3M 醋酸（3）8% 硫酸（4）无水酒精（5）氨水（6）含2% HCL的95%酒精（7）浓硝酸（8）0.1M AgNO3（9）酵母（10）石蕊试纸（11）钼酸铵试剂：将2克钼酸铵溶解在100毫升10% 硫酸中。
生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定
实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。
临用时配制。
五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。
然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。
（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。
2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。
（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。
（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
酶的特异性及影响酶活性的因素
滴瓶、滴管与细口瓶 生 物 化 学 实 验
1、提出滴头，排出空气。 2、伸入液面下，吸取液体。 3、按量排出液体。 4、将剩余液体排出，放松手指，将滴 头自然放入滴瓶内
Exit
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蛋白质的提取、分离纯化及定量
离心机
生 物 化 学 实 验
⑴将字心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
反应，产生显色复合物。
⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的粗提取：
二、水解RNA
三、RNA组分鉴定
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的提取 1.7g酵母悬浮于0.2％ 氢氧化钠溶液70ml中。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
实验6酵母RNA的分离及组分鉴定
结果讨论与结论
01
根据分光光度计的读数分析，实验组的RNA浓度较高且纯度良 好，而对照组的RNA浓度较低，可能受到了其他物质的干扰。
02
通过电泳结果观察，实验组的RNA完整性较好，而对照组 的RNA可能受到了降解。
03
综合以上结果，可以得出实验组分离得到的酵母RNA质量较高 ，适合用于后续的分子生物学实验。而对照组的RNA质量较差
条带。
RNA的组分鉴定
01
02
03
将提取的RNA进行反转 录，合成cDNA。
利用PCR仪对cDNA进行 扩增，并进行电泳检测
。
根据电泳结果判断RNA 的完整性，并分析其组
分。
04
结果分析
分光光度计的读数分析
实验组
在260nm和280nm处的吸光度分别 为0.85和0.78，表明RNA浓度较高， 纯度良好。
实验中遇到的问题和解决方案
问题1
解决方案
问题2
酵母细胞破碎不完全， 导致提取的RNA不纯。
采用更剧烈的破碎方法， 如超声破碎，以提高细
胞破碎率。
电泳过程中出现条带模 糊。
解决方案
优化电泳条件，如调整 缓冲液浓度和电泳温度
等。
对实验的改进建议和展望
01
改进建议1
在细胞破碎步骤中，尝试使用不同的破碎方法以提高破碎效率和RNA提
了解RNA的组成成分
了解RNA的基本组成
RNA由核糖核苷酸组成，包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿 嘧啶四种碱基，以及磷酸和核糖。
学习通过电泳分离RNA组分
通过电泳技术可以将RNA分离成不同大小的组分，如rRNA 、mRNA和tRNA等。
学习并掌握分光光度计的使用方法
酵母RNA 的提取(浓盐法)及成分鉴定
酵母RNA的提取（浓盐法）及成分鉴定一、实验目的：1、掌握浓盐法提取RNA的原理和方法。
2、理解等电点沉淀分离两性物质的原理和基本操作。
3、掌握钼蓝反应的原理，了解戊糖和嘌呤检验的原理。
二、实验原理：1、浓盐法提取酵母RNA：酵母中RNA含量特别多，约占干重的3～10％，DNA含量很少，约占干重的0.5％或更少，且菌体容易收集（即可利用发酵工业的下脚料），因此多采用酵母来提取RNA。
；本实验采用工业上常用的浓盐法，其基本原理是在浓盐加热的条件下酵母细胞壁通透性增加或发生破损，且加热又可使酵母中蛋白质变性沉淀，使RNA以可溶性钠盐的形式游离析出。
离心去除菌体，将上清液调至RNA的等电点（pH2～2.5），使RNA沉淀析出，离心收集沉淀。
2、RNA成分鉴定:RNA酸解，其水解产物含有碱基+核糖+磷酸；碱基（嘌呤）：磷酸：核糖：戊糖在约12％的盐酸中可以发生脱水缩合成为糠醛，糠醛可与5-甲基间苯二酚(又称苔黑酚、地衣酚)缩合生成蓝绿色的物质。
该反应用于检验戊糖的存在。
三、实验步骤：1.浓盐法提取酵母RNA（1）RNA的提取：取干酵母一包（约1～2g）放入100mL锥形瓶内，加入10％NaCl溶液30mL，搅匀后将锥形瓶固定在水浴锅内，于沸水浴中加热40分钟。
（2）RNA的离心分离：将上述锥形瓶从沸水浴中取出，立即用自来水冷却至室温。
然后将锥形瓶内溶液倒入离心管，平衡后3000转／分离心10分钟,收集上清液。
（3）RNA的收集：将上清液小心倾入50mL烧杯内，在冰浴中冷却。
用6mol/LHCl溶液调pH值至RNA的等电点2.0～2.5（一滴一滴的加入，边加边搅拌，随着pH下降，白色RNA沉淀逐渐增加，至等电点时沉淀最多）。
静置冰浴中5分钟使沉淀完全，颗粒变大。
再经3000转／分离心10分钟，收集沉淀。
2.RNA成分鉴定（1）溶解RNA：在离心所得的含RNA的离心管中加入1滴蒸馏水，用玻棒把RNA搅成糊状，再加入蒸馏水至mL，然后一边搅拌一边加入5%氨水1滴，将溶液调至pH=6，使白色RNA沉淀完全溶解，成为RNA溶液。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
Exit
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
酵母RNA的提取及组分鉴定
二.水解RNA 生 物 化 学5mol/L硫酸溶液
10ml，在沸水浴中加 热10min制成水解液并 进行组分的鉴定。
Exit
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酵母RNA的提取及组分鉴定 三、RNA组分鉴定
1.嘌呤碱：取一支
生 物 化 学 实 验
试管，加入水解液
1ml ，浓氨水2ml ， 5％的硝酸银溶液 1ml，观察有无白色 嘌呤碱基的银化物
2.将悬浮液转移至
150ml锥形瓶中，在沸 水浴上加热30分钟，冷 却至室温，离心 （4000r/min）15分钟。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
3.将上清液缓缓
倾入30ml乙醇溶
生 物 化 学 实 验
液中，注意要一 边搅拌一边缓缓 倾入。加毕用冰 醋酸调pH至2.5，
静置，等核糖核
酸沉淀完全后，
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理 生 物 化 学 实 验
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。 RNA用硫酸水解时，可以生成磷酸、戊糖和碱基. ⑴ 强酸使RNA分子中的有机磷消化成无机磷，使与钼酸铵 试剂中的钼酸铵结合成磷钼酸铵[(NH4）3PO4· 12MoO3】。 （黄色沉淀） PO43-+3NH4++12MOO42-+24H+=(NH4)3PO4· 12MOO3· 6H2O↓+6H2O （黄色）。 ⑵定磷试剂鉴定：上述反应当有还原剂存在时，MO6+被 还原成MO4+，此4价钼再与试剂中的其他MO42-结合成MO（MOO4） 2或MO3O8,呈蓝色，称为钼蓝。在一定浓度范围内，蓝色的 深浅和磷含量成正比，可用比色法测定RNA的含量。
实验6 酵母RNA的分离及组分鉴定
三、实验器材与试剂
1、器材： 干酵母粉，天平，抽滤瓶、布氏漏斗、离心机 2、试剂： ① 0.04 mol/L氢氧化钠 ②酸性乙醇 ③无水乙醚（C・P） ④氨水（C・P） ⑤ 1.5mol/L硫酸 ⑥ 5%硝酸银 ⑦苔黑酚―三氯化铁试剂 ⑧定磷试剂
取酵母粉7.5g 于100ml锥形瓶中 加入0.04 mol/L NaOH 溶液 45 ml 摇匀 沸水浴加热30min（时常搅拌），冷却 离心（3000r/min）15 min 沉淀 上清液 倾入25ml酸性（乙酸）乙醇溶液中（边搅拌边缓 缓倾入）Ph5-6，静置，核糖核酸完全沉淀 离心（3000r/min） 3 min
RNA的来源和种类很多，提取制备方法各异，一般有 苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。苯酚法是实验室最常用的。 组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和 的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇 后，RNA以白色絮状沉淀析出。该法提取的RNA具有生物 活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，所提取的核 酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺 比较简单。浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取 3―4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀 RNA。 稀碱法使用用0.2%NaOH溶液使酵母细胞裂解，然后 用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液,用乙醇沉淀RNA 或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。
上清液
沉淀
95%乙醇洗涤2次(每次5 ml) 乙醚洗涤1次(10 ml) 乙醚自然干燥
RNA粗制品 取200mg，加1.5mol/L硫酸溶液10mL 沸水浴加热5 min，得到水解液. 组分鉴定
组份鉴定
① 磷酸与定磷试剂反应呈蓝色 (1ml$ + 1ml定磷试剂→水浴加热) ② 核糖与苔黑酚—FeCl3试剂呈鲜绿色 (1ml$ + 2ml苔黑酚—FeCl3试剂→水浴加热) ③ 嘌呤碱与硝酸银作用产生絮状白色的嘌呤银化合物
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
1.嘌呤碱：取水解液1毫升加入过量（约等体积）浓氨水，然后 加人约1ml 0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 2.核糖：取一支试管加入水解液1ml、 三氯化铁浓盐酸溶液2ml 和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。 放沸水浴中l0min。注意溶液是否变 成绿色，说明核糖的存在。
3.磷酸：取一支试管，加入水解液1毫升和定磷试剂l毫升。在 水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的 了解从酵母中提取RNA的原理、方法及其组分，掌握鉴定 核酸组分的方法。 二、原理 酵母核酸中主要是RNA（2.67％～10.0％），DNA含量很 少（0.03％中提取RNA的方法很多，常用的有稀碱法和浓盐法。前者是 利用稀碱使细胞壁溶解，这种方法提取时间短，但是RNA在此 条件下不稳定，易分解；后者是在加热的条件下，利用高浓度 盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，产品色泽较好。本 实验主要目的是提取核酸进行核酸组分鉴定，对RNA稳定性要 求不严格，故采用稀碱法。
三、材料和试剂 干酵母 定磷试剂 ……
四、操作 将5g酵母悬浮于15mL0.04M氢氧化钠溶液中，并在乳钵 中研磨均匀（此步是实验能否成功的关键，至少10min）。将 悬浮液转移至锥形瓶中。再用10mL0.04M的氢氧化钠溶液分 两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。将锥形瓶置于沸浴上加 热30min后，将锥形瓶置于自来水中冷却。将匀浆转移到离心 管中，托盘天平上配平，离心4000r/min，8min，取上清液于 洗净的锥形瓶中，并缓缓倾入二倍体积的PH=2.5酸性乙醇溶 液。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后， 再配平，离心 4000r/min ，5min。弃去上清液，取沉淀，即 RNA粗品。用1.5M的硫酸（约5ml）将沉淀分几次转移到玻璃 试管内，用沸水浴加热10min（时间太短可能致使组分鉴定实 验失败）制成水解液并进行组分的鉴定。
实验六 酵母RNA的提取及组份鉴定
2.5g鉬酸铵溶于100mL水中；
10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水，棕色并保存溶液；
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17％硫酸：
2.5％鉬酸铵：10％抗坏血酸：
水＝1：1：1：2（V/V）。
二、材料
干酵母粉。
三、器材
移液管
2.0mL（×1）,1mL（×4）；移液枪；量筒10mL（×1）,50mL（×1）；滴管；水浴锅；低速离心机；研钵；天平。操作方法
二、RNA组份鉴定
将所提取的核酸转移到试管中，加入
1.5M硫酸5mL,沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
1．嘌呤碱：
取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL
0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
2．核糖：
取水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液
0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
一、酵母RNA提取
称5g干酵母粉悬浮于30mL
0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入大试管，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心10分钟后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000r/min离心5min。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，第一次洗涤后3000r/min离心5min，第二次洗涤后过滤，将沉淀转移到滤纸上，沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量，计算：
实验六酵母
目的要求
（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。
酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。
1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。
2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。
2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。
3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。
3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。
3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。
3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。
4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。
5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。
6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。
实验 酵母RNA的分离及组分鉴定
※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
【实验原理】酵母核酸种RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。
由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。
核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。
嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。
【实验器材】150 ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗【试剂和材料】1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；3、95%乙醇；4、乙醚；5、1.5 mol/L硫酸溶液；6、浓氨水；7、0.1 mol/L硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10% 三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400 ml浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml 水中（2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10% 抗坏血酸溶液：10 g抗坏血酸溶于100 ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17% 硫酸溶液：2.5%钼酸铵溶液：10% 抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；11、酵母粉。
【实验操作】1、溶解RNA将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。
2、解聚RNA将冷却的碱提取液离心（6000ｒ/min）5分钟，将上清液用乙酸调节pH至酸性（pH5~6））缓缓倾入30 ml乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
酵母RNA的提取测定及组分分析
实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。
因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。
由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。
工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。
稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。
稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。
浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。
离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。
加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。
2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。
待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。
随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。
调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析
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①磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀 (1mL $ + 1mL定磷试剂)：
(NH4)2MoO4 + H3PO4 → (NH4)3PO4·12MoO3↓(黄色)
Mo6+
SnCL2
Mo4+
Mo(MoO4)2 (兰色)
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② 核糖与地衣酚(orcin)试剂反应呈鲜绿色 (1mL $ + 1mL FeCl3 + 2mL orcin→水浴加热)
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OD260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD260/OD230估计 去盐的程度。
对于RNA纯制品，其OD260/OD280≈2.0，OD260/OD230应大于 2。
OD260/OD230<2说明去盐不充分, 可以再次沉淀和70%乙醇洗 涤。
浓度计算： DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000 RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml
纯DNA：OD260/OD280≈1.8 (＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染） 纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0 （＜1.7时表明有蛋白质或酚污染,可以增加酚 /氯仿抽提）
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5.RNA的组分鉴定
①RNA的酸解 将装有待测RNA的三角瓶，在电炉上加热，至溶液透明 为止，得到RNA的水解液，期间不停晃动，以使受热均 匀。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。
通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。
本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。
实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。
2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。
3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。
这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。
4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。
5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。
通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。
酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。
通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。
此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。
结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
验
迅速冷却，提取液离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀
碱法是用稀碱溶液使细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋
白质和菌体后
,的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
生
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。
甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚 反应，产生显色复合物。 ⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物
一、RNA的粗提取：
化
二、水解RNA
学
三、RNA组分鉴定
实
验
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实验步骤
酵母RNA的提取及组分鉴定
生 一、RNA的提取 物 1.7g酵母悬浮于0.2％ 化 氢氧化钠溶液70ml中。 学 2.将悬浮液转移至 实 150ml锥形瓶中，在沸 验 水浴上加热30分钟，冷
开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线
上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食
指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。
Exit
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酶的特异性及影响酶活性的因素
移
液
生 物 化 学 实 验
生 入水解液1ml ，加入三氯
物
化铁的浓盐酸溶液2ml和
化
苔黑酚的乙醇溶液3滴，
学
实
在沸水浴中加热，观察试
验
管内颜色变化。解释原因。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
酵母RNA的提取和组分鉴定
酵母RNA的提取一、实验目的1、掌握酵母RNA提取的方法。
2、了解核酸的组成。
3、掌握鉴定核酸组分的方法和操作。
二、实验原理三、实验步骤1、用托盘天平称1g干酵母于研钵中，加入少许石英砂，再加入2ml 0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨至少5min。
2、再加4ml 0.04mol/LNaOH溶液于匀浆液中，混匀后，将匀浆液转移到大试管中，再用4ml 0.04mol/LNaOH溶液洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。
3、将大试管小心在沸水浴中加热30min，冷却后倒入离心管中，与另一组同学的离心管在托盘天平上平衡，然后两组的离心管对称地放入离心机中，2000r/min下离心15min。
4、吸取10ml酸性乙醇溶液于小烧杯中，将离心管上清液小心倒入小烧杯中，边倒入边搅拌，直到RNA沉淀完全。
5、将小烧杯中的液体倒入2个干净的离心管，平衡、离心（2000r/min）3min。
6、弃去两离心管上清液，各离心管中加入95%乙醇2.5ml，振荡、混匀、平衡、离心（2000r/min）3min。
7、弃去两离心管上清液，各离心管加入3ml 1.5mol/L硫酸，混匀、倒入同一个大试管中，贴上标签，放在试管架上，备用。
8、将水解液在沸水浴中加热至少10min，使沉淀RNA充分水解。
9、取一支试管A，加入1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，再逐滴加入浓氨水至沉淀消失，然后加入1ml水解液放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。
10、另取一支试管B，加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2ml和地衣酚乙醇溶液0.2ml（约4滴），混匀，用试管夹夹好后放到沸水浴中3~5min，注意观察溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
11、再取一支试管C，加入水解液1ml和定磷试剂1ml，混匀，在沸水浴中加热，注意观察溶液颜色的变化，溶液变蓝，说明磷酸存在。
注意事项：离心一定要平衡对称放入离心机中，离心机达到设置转速时才能离开。
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上清液
沉淀
95%乙醇洗涤2次(每次5 ml) 乙醚洗涤1次(10 ml) 乙醚转移沉淀至布氏漏斗中抽滤
沉淀在空气中自然干燥
RNA粗制品 取200mg，加1.5mol/L硫酸溶液10mL 沸水浴加热5 min，得到水解液. 组分鉴定
组份鉴定
① 磷酸与定磷试剂反应呈蓝色 (1ml$ + 磷试剂→水浴加热) ② 核糖与苔黑酚—FeCl3试剂呈鲜绿色 (1ml$ + 2ml苔黑酚—FeCl3试剂→水浴加热) ③ 嘌呤碱与硝酸银作用产生絮状白色的嘌呤银化合物
实验6 酵母RNA的分离及鉴定
一、实验目的
掌握核酸分离纯化的方法 掌握用苔黑酚法鉴定RNA组份的原理和方法
二、实验原理
酵母核酸中 RNA 含量较多。在细胞中除了核酸
外还有 Pr、多糖及其他多种化合物； RNA可溶于碱性溶液，在碱性提取液中加入酸性 乙醇溶液可以使 RNA 析出； RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成的——在 提取的 RNA 中加1.5mol/L硫酸煮沸5min即可得到 这些组份的混合溶液 —— 可对它们分别进行定性 鉴定，以证明提取物是否为核酸。
RNA的来源和种类很多，提取制备方法各异，一般有 苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。苯酚法是实验室最常用的。 组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和 的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇 后，RNA以白色絮状沉淀析出。该法提取的RNA具有生物 活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，所提取的核 酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺 比较简单。浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取 3―4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀 RNA。 稀碱法使用用0.2%NaOH溶液使酵母细胞裂解，然后 用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液,用乙醇沉淀RNA 或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。
三、实验器材与试剂
1、器材： 干酵母粉，天平，抽滤瓶、布氏漏斗、离心机 2、试剂： ① 0.04 mol/L氢氧化钠 ②酸性乙醇 ③无水乙醚（C・P） ④氨水（C・P） ⑤ 1.5mol/L硫酸 ⑥ 5%硝酸银 ⑦苔黑酚―三氯化铁试剂 ⑧定磷试剂
取酵母粉7.5g 于100ml锥形瓶中 加入0.04 mol/L NaOH 溶液 45 ml 摇匀 沸水浴加热30min（时常搅拌），冷却 离心（3000r/min）15 min 沉淀 上清液 倾入25ml酸性（乙酸）乙醇溶液中（边搅拌边缓 缓倾入）Ph5-6，静置，核糖核酸完全沉淀 离心（3000r/min） 3 min
(2ml$ + 2ml过量氨水 + 0.1mol/LAgNO3 1ml )。
五、实验结果与分析
1、提取的RNA量； 2、RNA组份鉴定结果. 分析：