实验七 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。
核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。
通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。
同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。
通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。
二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。
RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。
其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。
2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。
其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。
三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。
然后将菌液离心收获，去除上清液。
2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。
再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。
四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。
实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。
酵母核糖核酸的提取和组分鉴定1
实验步骤
一、酵母中RNA粗制品的制备
1、提取： 将5g酵母悬浮于30ml 0.04 M NaOH溶液中（先加15ml），并在 研钵中研磨均匀，将悬浮液转移到锥形瓶中，在沸水上加热30 分钟(期间不时搅拌)。 2、分离 上述提取液取出，冷却后转入大离心管内，以4000r/min离心 10min，使提取液与菌体残渣等分离。 3、沉淀RNA 将上清液缓缓倾入（边搅拌）15ml酸性乙醇溶液中，待核糖核 酸沉淀完全后，离心5min（4000rpm）。 4、洗涤和抽滤 用95%乙醇15ml洗涤沉淀，离心5min（4000rpm）弃去上清液， 沉淀再用15ml无水乙醚拌匀后，布氏漏斗中抽滤（用乙醚冲洗 2-3次），至沉淀抽干，即得RNA粗制品。
实验六
酵母核糖核酸的提取 和组分鉴定
实验目的
学习稀碱法提取RNA，了解核酸的组分，并掌握鉴定
核酸组分的方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备RNA的方法也各有不同，通
常根据材料的性质以及制备的要求来选择相应的提取方法。由于酵母
中RNA含量较高， DNA 较少，在实验室常用酵母作为提取RNA的材料, 一般使用浓盐法、稀碱法来提取变性的RNA ，若要制备具有生物活性 的RNA，实验室常用苯酚法。
本实验采用稀碱法提取制备RNA,其原理是利用稀的NaOH溶液，将细胞 裂解， RNA溶于碱性提取溶液中，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质 与核酸分离，然后通过离心除去菌体等残渣，在上清液（碱提取液） 中加入酸性乙醇溶液使解聚的RNA沉淀，即得到RNA的粗制品。
核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可 使其水解，在水解液中用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组分 的存在。
酵母的提取及组分鉴定常用文档
1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴， 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。
(二) 沸水中加热时要时常摇动试管；
加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴 然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其完全水解，并用下列方法鉴定其中组分：
磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变
磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变
6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中 化。
(三) 嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉淀，以鉴定嘌呤的存在。
加热5～10min，观察颜色变化。 管号 1号 2号 3号
混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色 化。
(二) 3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿色，以鉴定核糖的存在。
变化。 了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的方法
各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试纸检查。 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平；
2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试剂 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平；
3
氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。
10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～10min，观
察颜色变化。
四、结果与计算
管号
1号
2号
3号
颜色
五、注意事项 (一) 酵母研磨要充分； (二) 沸水中加热时要时常摇动试管； (三) 硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
实验七 核酸的定量
成分测定
取200mg提取的核酸，加入3mol/L硫酸10ml，在沸 水浴中加热10min制成分解液并进行组分的鉴定。
1、嘌呤碱 取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加 入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的 银化合物沉淀。
2、核糖 取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓 盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中 10min。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
二、器材与试剂
1、试剂的配制 钼酸铵-过氯酸沉淀剂[0.25%钼酸按-2.5%过
氯酸溶液]：取3.6ml 70%过氯酸和0.25g钼酸 铵溶于96.4ml蒸馏水中。 样品DNA 2、器材 容量瓶（50ml）、离心管、离心机、紫外分 光光度计。
三、操作步骤
取两支1.0ml小离心管，甲管加入0.5ml样品 和 0.5ml 蒸 馏 水 ； 乙 管 加 入 0.5ml 样 品 和 0.5ml钼酸铵-过氯酸沉淀剂，摇匀，在冰浴 中放置15min，以3000r/min离心10min，分 别取上清液0.75ml在量筒中定容到25ml，备 用。
干扰因素
蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能 吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在 280nm波长处，在260nm处的消光值仅为核 酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质 含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。 RNA的260nm与280nm消光值的比值在2.0以 上；DNA的260nm与280nm消光值的比值则 在1.8左右。当样品中蛋白质含量较高时比 值即下降。
2、二苯胺试剂为什么要溶于浓醋酸? 3、请分析自己的DNA样品。
三、操作 1、提取 称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。加
10% NaCl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴 中提取半小时。 2.分离 将上述提取液取出，用自来水冷却，分装 在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取 液与菌体残渣等分离。 3.沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50mL烧杯 内，并置于有冰块的250mL烧杯中冷却。待溶液冷 至10℃以下时，在搅拌下小心地加入等体积的酸性 乙醇，随着酸性乙醇的加入，溶液的逐步下降，溶液 中白色沉淀也逐渐增加，当 pH=2.5（RNA 等电 点）时沉淀量最多（注意严格控制pH值），继续于 冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
实验七酵母RNA的提取及鉴定
实验七酵母RNA的提取及鉴定姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍学号：12050011012实验七酵母RNA的提取及鉴定一、实验目的掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
三、实验仪器1、离心机2、水浴锅3、电炉4、烧杯5、量筒6、移液管7、玻璃棒8、滤纸9、漏斗10、试剂瓶11、电子天平12、pH试纸（pH1~14）四、实验试剂1、干酵母粉2、0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3、乙酸（A.R.）4、95%乙醇5、无水乙醚（A.R.）6、10%硫酸：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml。
7、氨水（A.R.）8、5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
五、实验步骤(一)RNA的提取：1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~8ml氢氧化钠）。
冷却，然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验，pH5~6），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
倒取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静置，待完全沉淀，过滤。
2、滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定和测定含量用。
（二）鉴定：1、取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1~2分钟，将RNA水解。
2、水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
注意事项：1、离心管回收2、离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本一样。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，
了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础
知识。
实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物
分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。
酵母核
糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝
胶过滤等方法进行纯化。
实验步骤：
1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。
2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。
3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，
分离出核糖体RNA。
4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。
实验结果：
1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依
据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。
2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其
它分子为其他转运RNA。
结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核
糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定一、实验背景及目的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍生物在生物化学、医药、食品添加剂、农业等领域有着广泛的应用。
比如能够促进作物的生长，在水稻、小麦、柑橘及多种蔬菜生产中应用，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强力助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料。
而利用微生物资源提取氨基酸、核苷酸等生物小分子，具有成本低、非化学合成、无毒、无害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵行业的快速发展，产生了相应的大量发酵副产物，如何利用这些副产物，既做到不污染环境，还能产生良好的经济效益，一直是研究的热点。
而啤酒废酵母中RNA含量达6%~8%，是生产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋白质(占干菌体的50%)还具有很高的利用价值。
所以利用啤酒废酵母生产RNA形成了非常有益的产业链。
[2] 本实验目的就是学习从酵母中提取RNA的方法并掌握其测定手段。
二、实验原理微生物是工.业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调至其等电点，使之沉淀，进行离心收集。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利用碱使细菌细胞壁水解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于水，在含盐的菌体溶液中，RVA有较高的溶解度。
二者均通过控制温度使蛋白质变性沉淀，通过离心将RNA及蛋白质和酵母菌体分离，进而在等电点沉淀RNA，从而达到提取目的。
本实验采用浓盐法(10% NaCl),是食品医药卫生领域制备RNA 制剂的经典方案。
生物化学与分子生物学实验指导书
生物化学实验指导书生命科学与工程学院目录实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定―纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验十一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九 PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握直接测定法测定总糖的原理和方法。
二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。
三、器材1.电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6mol/L 盐酸溶液2.%甲基红乙醇溶液：称取甲基红，用60%乙醇溶解并定容至100ml。
3.20%氢氧化钠溶液。
4.%转化糖标准溶液：称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖，用水溶解并移入1000ml 容量瓶中，定容，混匀。
取50ml 于100ml 容量瓶中，加6mol/L盐酸5ml，在68-70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2 滴，用20%NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。
此溶液每毫升含转化糖1mg。
5.费林氏A液：称取15g（CuSO4·5H2O）及次甲基蓝，溶于水并稀释到1L。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。
酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。
1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。
2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。
2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。
3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。
3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。
3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。
3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。
4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。
5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。
6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材四、试剂和材料将2 mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400 mL浓盐酸中。
9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。
10．定磷试剂 50 mL（1）17％硫酸溶液将17mL浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 mL水中。
（2）2.5％钼酸铵溶液将2.5g钼酸铵溶于100 mL水中。
（3）10％抗坏血酸溶液10g 抗坏血酸溶于100 mL水中，贮棕色瓶保存。
溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效，需纯化抗坏血酸。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17％硫酸溶液∶2.5％钼酸铵溶液∶10％抗坏血酸溶液∶水=1∶1∶1∶2（V／V）。
11．酵母粉 200 g五、操作将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至150毫升锥形瓶中。
在沸水浴上加热30分钟后，冷却。
离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。
弃去清液。
用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。
沉淀可在空气中干燥。
取200 mg提取的核酸，加入1.5 mol／L硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1．嘌呤碱取水解液1mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol／L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
酵母核糖核酸
实验六：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的：了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、主要器材： 1．水浴2、离心机四、试剂和材料1．0.04 mol/L氢氧化钠溶液2．酸性乙醇溶液3．95%乙醇5．1.5 mol/L硫酸溶液6．浓氨水7．0.1 mol／L硝酸银溶液8．氯化铁浓盐酸溶液9．苔黑酚乙醇溶液10．定磷试剂11．酵母粉五、操作：将1g酵母悬浮于10mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至玻璃试管内。
沸水浴加热30分钟，冷却后移入到离心管内，离心(3000r/min)10分钟，将上清液缓缓倾人10mL酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾人。
待核糖核酸沉淀完全后，移入离心管内，再离心(3000r/min)5分钟。
弃上清液。
用95%乙醇离心洗涤沉淀1次，弃乙醇后，得RNA沉淀。
将RNA沉淀从离心管内转移到一只试管中，然后向试管内加入1.5 mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟，制成水解液，通过下述实验进行组分鉴定：1、嘌呤碱做三组对照实验：取3支试管分别进行如下操作（1）水解液1mL＋浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？（2）浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无沉淀？（3）水解液1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？2、核糖：取1支试管，水解液1mL ＋三氯化铁浓盐酸溶液2mL ＋苔黑酚乙醇溶液0.2 mL，沸水浴中3分钟。
注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
3、磷酸：取1支试管，水解液1mL ＋定磷试剂1mL，在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
实验七 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
五 思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品？ 2、本实验RNA组分是什么？怎样验证的？
生 物 化 学 实 验
生 物 化 学 实 验
（5）1mol/L浓氨水； （6）三氯化铁-浓盐酸溶液； （7）苔黑酚乙醇溶液 ； （8）抗坏RNA的提取
（1）将2g酵母悬浮于10ml 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中； （2）在沸水浴上加热30分钟后，将匀浆液转移至10ml离心 管中，冷却。配平离心(3000r／min)15分钟； （3）将上清液缓缓倾人盛有4ml酸性乙醇溶液的另一10ml离 生 学 实 验 物 心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀； 化 （4）离心(3000r／min)3分钟，弃去上清液；
二实验原理
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅 为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原 料。 酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中
生 物 化 学 实 验
加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由 此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤 碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水 解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
（二）RNA成分的鉴定
四操作步骤
在沉淀中，加入1.5 mol／L硫酸溶液3ml，在沸水浴中加 热至少10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 （1）戊糖： 取1支试管加入水解液5滴、三氯化铁浓盐 酸溶液10滴和苔黑酚乙醇溶液2滴。用木夹夹好后放沸水 浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 生 物 化 学 实 验 （2）嘌呤碱： 在1支干净试管内加入水解液5滴，再逐滴 加入15滴氨水，然后加入约5滴硝酸银溶液，放置片刻， 观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。 （3）磷酸： 取1支试管，加入水解液10滴和定磷试剂10 滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说 明磷酸的存在。
生化实验课件-酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (2)
核苷酸的消化和核酸一樣。此外嘌呤類核苷
酸可用1.5mol/L的HCL，100℃ 水解1小時脫磷；
嘧啶類核苷酸可用10mol/L H 2 SO4消化1—2個小
時脫磷。
二，試劑
1.標準磷試劑（含磷5μg/ml）:準確稱取恒重
（105℃ ）的 KH 2 PO4 0.4389g,用水定容到100ml，此液
3. 催化劑：硫酸銅（ CuSO4 •5H 2O）：硫酸鉀
（ K 2 SO4）=1：4（W/W）,研成細末。
4. 30%過氧化氫，濃硫酸
三，操作方法
1.製作磷標準曲線：
取標準磷酸溶液（ 5μg/ml ）0，0.5，1.0，1.5，2.0，
2.5，3.0ml，用水補足到3ml，含磷量分別為0，2.5，5，
3.磷酸：取一支試管，加入水解液1ml和定磷試劑 1ml。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍色，說明磷 酸是否存在。
離心機使用及注意事項
使用方法:
1 ．接通電源 2 ．平衡離心樣品 3. 加入樣品, 關蓋 4 ．設置時間 5．調節轉速 6. 關機, 開蓋, 取出樣品
注意事項:
（1）離心前必須仔細檢查轉頭各孔內有無異物。 （2）離心管必須仔細平衡。 （3）機內若不清潔，離心管要封口。 （4）必須慢啟動，然後加速。 （5）離心時不准開蓋。 （6）不准用手刹車。
1000ml 500ml 1000ml 500ml 200ml 50ml 50ml 80ml 10ml
11. 定磷試劑
50ml
（1）17%硫酸：將17毫升濃硫酸（比重1.84）緩緩 加入到83毫升水中。
（2）2.5%鉬酸銨溶液： 2.5g鉬酸氨溶於100ml水中。
（3）10%抗壞血酸溶液：10g抗壞血酸溶於100ml水 中，貯存棕色瓶保存。溶液呈淡黃色時可用，如呈深 黃色或棕色則失效，需要純化抗壞血酸。
酵母核糖核酸的提取及测定
二、 研究依据及原理：
酵母作为工业上大量生产核酸的最为理想的微生物，因为酵母 核酸中主要是 RNA（2.67~10.0%） ，DNA 很少（0.03~0.516%） ，菌体 容易收集，RNA 也易于分离。此外，抽提后的菌体蛋白质，也具有 很高的利用价值。 RNA 提取过程是先使 RNA 从细胞中释放， 并使它和蛋白质分离， 然后将菌体除去，再根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将 pH 调 到 2.0~2.5 使 RNA 沉淀，进行离心收集。 提取 RNA 的方法很多， 在工业生产上常用的是稀碱性和浓盐法。 本实验采取浓盐法（10%NaCl） 核酸不论是 DNA 还是 RNA，都是由核苷酸组成的多聚核苷酸 化合物，而核苷酸是由糖，碱基和磷酸构成。 要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量，只
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需要测定组成核苷酸的一种成分，如磷，糖或碱基，便可计算出核糖 的含量，因为核算分子中这三个组份是以等分子比例存在的，即每一 个嘌呤或嘧啶分子都与一分子戊糖及一分子磷酸相连接的， 所以只要 测出其中任何一组分的含量即可求出核糖的含量。 本实验采用紫外吸收法测定核糖核酸含量，因为核酸的组成成 分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，最大吸收在 260mm 处，利 用此特性可以对核酸进行定量测定。
E 260 A 260
（1） RNA 含量（%）=
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。
通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。
本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。
实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。
2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。
3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。
这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。
4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。
5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。
通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。
酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。
通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。
此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。
结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。
7-酵母RNA的制备及鉴定
实验结果
1、计算干酵母粉中RNA的含量； 、计算干酵母粉中 的含量； 的含量 2、记录RNA各组分鉴定后，观察到的现象。 、记录 各组分鉴定后， 各组分鉴定后 观察到的现象。 嘌呤碱：是否有（银化合物沉淀） 核糖：是否（溶液变为绿色） 磷酸：是否有（黄色磷钼酸沉淀）
二、 RNA组分鉴定 组分鉴定 RNA水解：取1g提取的RNA，加入10%硫酸溶液5mL， 沸水浴10min，制成ห้องสมุดไป่ตู้解液，然后进行组分鉴定。 1、嘌呤碱：1mL水解液 + 2mL氨水，再加入1mL硝酸银， 观察现象； 2、核糖：1mL水解液 + 2mL三氯化铁-盐酸 + 0.2mL 地衣 酚-乙醇，沸水浴10min，观察现象； 3、磷酸：2mL水解液 + 5滴硝酸银 + 1mL钼酸铵，沸水浴 滴 加热，观察现象。
酵母RNA的制备及组分测定 的制备及组分测定 酵母
实验目的
掌握稀碱法分离酵母RNA原理及操作过程。
实验原理
酵母细胞富含核算，其中只要是RNA，含量可达 干菌体的2.67%~10% ，而DNA含量有0.03%~0.516%， 因此工业上提取RNA多以酵母为原料，利用稀碱法使 酵母细胞变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和 菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA，或调pH2.5利用等 电点沉淀。这种方法成本低、工业简单，得到的产物 为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料。 RNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。 加硫酸水解RNA，水解液可以用定糖、加钼酸铵沉淀 和加硝酸银沉淀等方法测出上述组分的存在。
实验试剂
（1）0.2%氢氧化钠溶液 （3）冰醋酸 （5）0.1mol/L硝酸银溶液 （7）三氯化铁-浓盐酸溶液 液 （9）钼酸铵溶液 （2）95%乙醇 （4）10%硫酸溶液 （6）1mol/L氨水 （8）地衣酚-乙醇溶
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（二）RNA成分的鉴定
四操作步骤
在沉淀中，加入1.5 mol／L硫酸溶液3ml，在沸水浴中加 热至少10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 （1）戊糖： 取1支试管加入水解液5滴、三氯化铁浓盐 酸溶液10滴和苔黑酚乙醇溶液2滴。用木夹夹好后放沸水 浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 生 物 化 学 实 验 （2）嘌呤碱： 在1支干净试管内加入水解液5滴，再逐滴 加入15滴氨水，然后加入约5滴硝酸银溶液，放置片刻， 观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。 （3）磷酸： 取1支试管，加入水解液10滴和定磷试剂10 滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说 明磷酸的存在。
二实验原理
鉴定方法： (1)磷酸与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。 (2)核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。 (3)嘌呤碱与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
生 物 化 学 实 验
嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解
三 仪器、原料和试剂
仪器：试管；试管架；烧杯；移液管； 量筒；滴管；水浴锅； 离心机；离心管；锥形瓶。 原料：干酵母粉 试剂： （1）0.04mol／L氢氧化钠溶液； （2）酸性乙醇溶液； （3）1.5mol／L硫酸； （4）0.1mol/L硝酸银溶液；
《生物化学实验》课件
实 验 七
酵母核糖核酸的分离 及组份鉴定
一实验目的
1.了解并掌握稀碱法提取RNA的基本 原理及方法。
生 物 化 学 实 验
2.了解RNA的化学组成及定性鉴定的 原理与操作过程。
二实验原理
苯酚法 实验室： 去污剂法 （有活性的） 盐酸胍法 工业生产： 稀碱法---本实验 浓盐法 （无活性的） 生 物 化 学 实 验
核酸提取方法
二实验原理
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱 和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇 后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和 蛋白质。 浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速 生 物 化 学 实 验 冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。 稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去 蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。
五 思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品？ 2、本实验RNA组分是什么？怎样验证的？
生 物 化 学 实 验
生 物 化 学 实 验
（5）1mol/L浓氨水； （6）三氯化铁-浓盐酸溶液； （7）苔黑酚乙醇溶液 ； （8）抗坏血酸 ； （9）钼酸铵试剂。
四操作步骤
（一）酵母RNAቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ提取
（1）将2g酵母悬浮于10ml 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中； （2）在沸水浴上加热30分钟后，将匀浆液转移至10ml离心 管中，冷却。配平离心(3000r／min)15分钟； （3）将上清液缓缓倾人盛有4ml酸性乙醇溶液的另一10ml离 生 学 实 验 物 心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀； 化 （4）离心(3000r／min)3分钟，弃去上清液；
二实验原理
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅 为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原 料。 酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中
生 物 化 学 实 验
加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由 此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤 碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水 解，从水解液中可以测出上述组分的存在。