2010版药典无菌检查法培训

5、方法验证试验----直接接种法
CP2005
CP2010
取符合直接接种法培养基用量要 求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别 接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢 梭菌各2管；取符合直接接种法培养基 用量要求的改良马丁培养基4管，分别 接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲 霉各2管。其中1管接入规定量的供试 品，另1管作为对照，按规定的温度培
无
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，
若保存在2～8℃可以在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证
过的贮存期内使用。
4、稀释液、冲洗液及其制备方法
CP2005
CP2010
如需要，可在上述稀释液或冲 洗液的灭菌前或灭菌后加入表 面活性剂或中和剂等 。
3。根据供试品的特性，可选用其他经验证过 的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或 灭菌后加入表面活性剂或中和剂等 。
大肠埃希菌（Escherichia coli） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) 白色念球菌（Candida albicans）] 黑曲霉（Aspergillus niger）
3、培养基的适用性检查
将规定量的供试品按薄膜过滤法 过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中 加入小于100cfu的试验菌，过滤。取 出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基 或改良马丁培养基中，或将培养基加 至滤筒内。另取一装有同体积培养基 的容器，加入等量试验菌，作为对照 。按规定温度培养3～5天。各试验菌
同法操作。
CP2010
取每种培养基规定接种的供试品 总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最 后一次的冲洗液中加入小于100cfu的 试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙 醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基 中，或将培养基加至滤筒内。另取一 装有同体积培养基的容器，加入等量 试验菌，作为对照。按规定温度培养3 ～5天。各试验菌同法操作。
一、进一步确定了无菌检查法的定义：
无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料 、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
二、无菌检查保障
1、无菌环境规定要防止微生物污染，但防止污染的措施 不得影响供试品中微生物的生长。
2、日常检验还需对试验环境进行监控。 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌
养3～5天。
取符合直接接种法培养基用量要 求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别 接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭 菌各2管；取符合直接接种法培养基用 量要求的改良马丁培养基4管，分别接 入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉 各2管。其中1管接入每管培养基规定 的供试品，另1管作为对照，置规定的 温度培养3～5天。
5、方法验证试验----结果判断
CP2005
与对照管比较，如含供试品各容 器中的试验菌均生长良好，则供试品 的该检验量在该检验条件下无抑菌作 用或其抑菌作用可以忽略不计，照此 检查法和检查条件进行供试品的无菌 检查。
如含供试品的任一容器中微生物 生长微弱、缓慢或不生长，则供试品 的该检验量在该检验条件下有抑菌作 用，可采用增加冲洗量，或增加培养 基的用量，或使用中和剂或灭活剂如 β－内酰胺酶、对氨基苯甲酸，或更 换滤膜品种等方法，消除供试品的抑
2、培养基灵敏度试验用菌种
CP2005
2005版药典增 补版即有
CP2010
铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosa） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) 白色念球菌（Candida albicans） 黑曲霉（Aspergillus niger）
---菌液的制备、保存
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本版药典重大 变动之一
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂
丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天 斜面培养基中，培养5～7天，加入3～
，加入3～5ml 0.9%无菌氯化钠溶 5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%
液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用
菌种及菌液制备 同培养基灵敏度检查。
菌种及菌液制备 除大肠埃希菌（Escherichia coli）
[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄 球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白 色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检 查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色 葡萄球菌。
5、方法验证试验----薄膜过滤法
CP2005
技术的培训。
1、培养基的制备及培养条件
CP制备及培养条件
选择性培养基:
选择性培养基:
……加入适量的中和剂或表面活性剂 ……加入适量的中和剂、灭活剂或表 ，如对氨基苯甲酸(用于磺胺类供试品) 面活性剂，其用量同验证试验。 、聚山梨酯80(用于非水溶性供试品) 或β-内酰胺酶(用于β-内酰胺类供试 品)等，中和剂或表面活性剂的用量应 通过验证。
5、方法验证试验
CP2005
CP2010
当建立药品的无菌检查法时，应进行 方法的验证，以证明所采用的方法适 合于该药品的无菌检查。若药品的组 分或原检验条件发生改变时，检查方 法应重新验证。
当建立产品的无菌检查法时，应进行 方法的验证，以证明所采用的方法适 合于该产品的无菌检查。若产品的组 分或原检验条件发生改变时，检查方 法应重新验证。
无菌检查 ---2010版药典
2009.06.10
根据无菌检查增修定内容起草的指导思想和 起草的基本原则并参照美国药典第30版、31版和 欧洲药典第6版无菌检查法收载的内容对《中国药 典》一部、二部附录的无菌检查法进行了修订，三 部附录的无菌检查法向一、二部靠拢， 2010年版 药典主要增修订内容如下：
悬液（用管口带有薄的无菌棉花或 适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用
纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌
至无菌试管内，用0.9%无菌氯化 氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100
钠溶液制成每1ml含孢子数50～ 100cfu的孢子悬液。
cfu的孢子悬液。