血清麻疹IgM抗体试验酶免法-检验科免疫室作业指导书

血清麻疹IgM抗体试验酶免法
原理
利用包被在固相上的抗人IgM-μ链抗体直接捕获待测血清的IgM，然后在经酶标抗体显色进行特异性抗体检测。

标本采集
采集前病人准备：受检者应空腹。

标本种类：血清或血浆。

标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：最好使用新鲜标本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。

避免标本反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。

标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

试剂
6.1试剂名称：麻疹病毒抗体酶免试剂盒
6.2试剂生产厂家：深圳市安群生物工程有限公司
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。

仪器设备
仪器名称：自动酶标仪
仪器厂家：Rayto
仪器型号：RT-2100C
操作步骤
平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

配制洗涤液：1支浓缩洗涤液加380ml(96T)蒸溜水。

标本稀释：待测血清用标本稀释液按1：50(稀释后每孔加样100ul(或每孔加入200ul样本稀释液后再4ul血清样本，充分混合)。

设空白、阳性、阴性各一孔，阴、阳性对照不做稀释直接各加100ul。

温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。

洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤3次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体2滴，轻拍混匀。

温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。

洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤3次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.10每孔加显色剂A及显色剂B各1滴，置37℃温育10分钟。

8.11目测法不终止，比测法每孔加终止液一滴。

9.结果判断与分析
目测：在白色背景下观察各孔显色，有明显蓝色者为阳性，无色者为阴性.
仪器检测：每孔加终止液1滴(50ul)，轻摇，以空白对照调零，用酶标仪在450nm波长测定各孔OD值.
临界值(C.O.)＝阴性对照孔均值N×2.1
(阴性对照孔OD值小于0.1时以0.1计)
阳性：样本OD值S/C.O.≥1(S/N≥2.1)
阴性：样本OD值S/C.O.＜1(S/N＜2.1)
在临界值附近的样品，应重复检测，并结合临床症状综合判断。

10.质量控制：每次均应有阴阳对照，其OD值应在要求范围内。

参考值范围：阴性
12.临床意义：麻疹病毒是麻疹的病原体。

儿童最常见的一种急性传染病，通过呼吸道或接触传染，除引起麻疹外，常并发呼吸道感染，如哮喘，支气管炎，毛细支气管炎等，并可并发巨细胞间质肺炎、妊娠期感染麻疹病毒，可能流产及死产明显增加。

麻疹病毒可根据临床表现进行分型诊断，但非典型者需分离病毒或作血清抗体测体，也可用分泌物涂片找多核巨细胞来确诊。

13.操作性能：特异性强，灵敏度高，重复性好。

方法局限性
注意事项
15.1使用前试剂应置室温平衡，用前摇匀，剩余包被板条应密封保存，以免受潮。

15.2本试剂盒应置2~8℃贮存，有效期6个月，不同批号试剂不能混用，标本稀释液及酶结合物不能冻结。

15.3所有样品都应按传染源处理。

15.4使用过程如遇无法解决问题，应与试剂公司或当地经销商联系。

当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。

17.参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。

全国临床检验操作规程（第二版）。

18.其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。